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NONO基因沉默对乳腺癌细胞生物学特性影响研究
目的 无POU域八聚体结合蛋白(non-POU domain containing octamer-binding protein,NONO)是一种参与多种核内事件的多功能核蛋白,NONO与某些肿瘤的发生密切相关.本研究旨在探讨NONO基因沉默对乳腺癌细胞(SKBR3)增殖、迁移和侵袭生物学特性的影响.方法 用含有靶向人NONO基因shRNA的慢病毒感染SKBR3细胞,并用嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质印迹法检测SKBR3细胞中NONO蛋白表达,建立稳定的NONO基因沉默的SKBR3细胞系;采用CCK-8法和平板克隆实验检测NONO基因沉默对SKBR3细胞增殖的影响;通过体外Transwell迁移和侵袭实验检测NONO基因沉默对SKBR3细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 蛋白质印迹法实验结果显示,SKBR3、NONO基因沉默的SKBR3(SKBR3-NONO-si)和阴性对照SKBR3(SKBR3-NC)组细胞NONO蛋白表达相对灰度值分别为0.716 7±0.225、0.103±0.045和0.727±0.127,差异有统计学意义,F=16.699,P=0.004,表明成功地建立了稳定的NONO基因沉默的SKBR3细胞系.CCK-8实验结果显示,细胞接种后7d,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC细胞CCK-8吸光度值分别为1.717±0.233、0.566±0.158和1.110±0.187,差异有统计学意义,F=78.469,P＜0.001;平板克隆形成实验结果显示,细胞培养14 d后,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC组形成的克隆数分别为64.667±14.84、21.167±7.414和53.667±11.587,差异有统计学意义,F=16.333,P＜0.001;以上结果均说明,NONO基因沉默抑制SKBR3细胞增殖能力.Transwell迁移实验结果显示,细胞接种后20 h,SKBR3、SKBR3NONO-si和SKBR3-NC组迁移细胞数分别为62.333±7.767、44.667±7.637和85.333±11.930,差异有统计学意义,F=14.338,P=0.005;侵袭实验结果显示,细胞接种后40 h,SKBR3、SKBR3-NONO-si和SKBR3-NC组侵袭细胞数分别为27.667±7.024、24.666±3.512和81.000±5.568,差异有统计学意义,F=97.558,P＜0.001;与SKBR3-NC细胞相比,NONO基因沉默的SKBR3-NONO-si细胞迁移和侵袭能力均明显降低.结论 NONO基因沉默抑制SKBR3细胞增殖、迁移和侵袭,提示NONO可能是促进乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭一个新的重要调控蛋白.
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辛伐他汀和NONO对乳腺癌细胞增殖的影响
目的:探讨辛伐他汀和NONO (non-POU-dormain-containing,octamerbinding protein)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其可能的作用机制.方法:将靶向NONO基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段siRNA-NONO和NONO过表达重组载体pcDNA4/TO-NONO分别转染至乳腺癌MCF-7细胞后,分别应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和细胞计数法检测NONO mRNA和蛋白的表达及细胞的增殖情况.辛伐他汀(20 μmol/L)处理MCF-7细胞后,分别应用细胞计数法、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞的增殖、NONO mRNA及蛋白的表达水平.辛伐他汀处理pcDNA4/TO-NONO转染组MCF-7细胞后,应用细胞计数法检测细胞的增殖情况.实时荧光定量PCR和组织总胆固醇酶法检测siRNA-NONO转染组MCF-7细胞中3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase,HMGCR)mRNA和胆固醇水平.结果:siRNA-NONO转染组MCF-7细胞中NONO mRNA和蛋白的表达水平低于阴性对照组[MCF-7细胞转染siRNA negative control(siRNA-NC)](P＜0.01,P＜0.05),pcDNA4/TO-NONO转染组MCF-7细胞中NONO mRNA和蛋白的表达水平高于转染空载体pcDNA4/TO的对照组(P值均＜ 0.01).siRNA-NONO转染组MCF-7细胞的增殖能力明显低于siRNA-NC转染组(P＜0.05),而pcDNA4/TO-NONO转染组MCF-7细胞的增殖能力明显高于转染空载体pcDNA4/TO的对照组(P＜0.05).辛伐他汀(20 μmol/L)处理组MCF-7细胞的增殖能力和NONO mRNA及蛋白的表达水平均明显低于辛伐他汀未处理的对照组(P＜0.05,P＜ 0.01,P＜0.05).pcDNA4/TO-NONO转染组细胞经辛伐他汀处理后,细胞的增殖能力明显低于未用辛伐他汀处理的细胞(P＜0.01).siRNA-NONO转染组MCF-7细胞中HMGCR mRNA和胆固醇水平均明显低于siRNA-NC转染组(P值均＜0.01).结论:辛伐他汀可以抑制MCF-7细胞的增殖,可能与抑制NONO的表达有关.
