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幽门螺杆菌黏附素基因(hpaA)的表达及重组蛋白的免疫原性检测

杨芸;孔超;徐帆洪;李笑梅

摘要: 目的 研究幽门螺杆菌黏附素A(adhesin A of Helicobacter pylori,HpaA)基因在大肠杆菌中的表达和检测纯化HpaA的免疫原性.方法 将hpaA/pET28a表达质粒转入大肠杆菌BL21(RP)株并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,通过Ni2+亲和层析和分子筛层析纯化表达蛋白.用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表达蛋白的相对分子质量,用蛋白质印迹法对表达蛋白进行特性确认.将纯化HpaA腹腔注射BALB/c小鼠,并检测小鼠的抗体水平.结果 表达蛋白的相对分子质量约为30 000,与HpaA相符.纯化的表达蛋白可与抗HpaA抗体发生特异性反应.腹腔注射HpaA的小鼠与对照小鼠间的血清抗HpaA IgG抗体水平差异存在统计学意义(t=8.367,P<0.01).结论 HpaA在大肠杆菌BL21(RP)株中得到成功表达,且纯化HpaA具有较好的免疫原性.

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