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人参茎叶皂苷、三七总皂苷和天麻素配伍防治肝细胞脂肪变性的作用
目的:探讨人参茎叶皂苷、三七总皂苷和天麻素配伍防治L02肝细胞脂肪变性的作用。方法:L02细胞中加50%小牛血清100 mmol/L乙醇体外培养36 h,生化分析仪测血清TG水平;流式细胞术检测肝细胞内ROS和线粒体膜电位;高效液相色谱测定肝细胞ATP含量;RT-PCR方法及Westren blot检测肝细胞CYP2E1及PPARαmRNA及蛋白表达。结果:油红O染色显示模型组细胞内有大小不等的红色脂滴聚集,证实建模成功;人参茎叶皂苷、三七总皂苷和天麻素配伍能明显减少细胞内红色脂滴,显著降低细胞TG含量及细胞内ROS水平;增加细胞线粒体膜电位和ATP 水平;并抑制细胞 CYP2 E1 mRNA 及蛋白表达,增加PPARαmRNA及蛋白表达。结论:3种中药成分配伍具有明显改善肝细胞脂肪沉积的作用;其机制可能通过增加肝细胞PPARα表达,减少肝细胞TG产生;同时降低CYP2E1表达,抑制脂质过氧化反应,改善线粒体功能,增加能量合成,从而发挥防治肝细胞脂肪变性的作用。
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小牛血清去蛋白注射液治疗急性脑梗死后运动瘫痪的前瞻性对照试验
目的:观察小牛血清去蛋白注射液治疗急性脑梗死运动瘫痪的疗效及安全性.方法:前瞻性持续纳入急性脑梗死病例并随机分为小牛血清去蛋白注射液治疗组(133例)和对照组(134例).采用简式Fugl-Meyer运动量表(FMMS)评分、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS),功能独立性评定(FIM)评分法进行疗效评价,分别在治疗14 d和28 d后进行疗效对比.结果:治疗后小牛血清去蛋白注射液组FMMS评分显著提高(P=0.03),亚组分析提示该药在上肢瘫痪及重度脑梗死患者中疗效更为明显.未见明显不良反应.结论:小牛血清去蛋白注射液治疗运动瘫痪的急性脑梗死患者安全有效,尤其适用于上肢瘫痪或瘫痪较严重的患者.
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丙型肝炎病毒体外感染正常成人肝细胞的初步研究
一、资料与方法1.正常成人肝组织标本:取意外死亡的3例成年男性,1例成年女性肝脏,均无肝病史.临床生物化学和病理学检查无异常发现.各种肝炎病毒标志物检测均阴性.2.采用体外两步灌流法分离正常成人肝细胞.后用含10%小牛血清1640培养液按细胞密度1.0×106/ml稀释后接种至25 ml培养瓶和加爬片的24孔培养板.置于37℃、5%CO2培养箱孵育,2~3 d更换完全培养液1次,维持培养1月以上.
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小牛血清甘油低温保存菌种方法介绍
目的:寻求一种有效易行的菌种保藏方法,以适用于繁忙的实验室工作.方法:选择1989年6月购自北京中国药品生物制品检定所的真空冷冻干燥菌株28株,用小牛血清甘油液低温保存法与传统的半固体营养琼脂和血琼脂斜面法进行比较.结果:球菌的复苏情况与杆菌相似,保存期12个月复苏良好,生物学性状稳定.比较传统的半固体营养琼脂和血琼脂斜面法,大大延长细菌的保存期,特别是球菌可以从通常的血琼脂斜面液蜡的4个月的37.5%提高到14个月的87.5%,间隔半年时间冻融6次以下对菌株继续低温保存影响不大.基质量少(约0.4ml)冻融时间短,菌体受伤程度低,有利复苏.复苏增菌不需另配营养基质,直接在小牛血清甘油液中进行,污染少,操作简便.结论:小牛血清甘油保存菌种对大部分常用细菌保存期可达12个月以上,而且球菌和杆菌差异不大,非常适合球菌的保存.
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人胸腺细胞与小鼠脾细胞体外共同孵育的MTT比色法测定
为了观察人胸腺细胞与小鼠脾细胞的关系,我们运用了M TT比色法进行体外测定.人胸腺取材于胸外科手术及妇产科手术,年龄在5月-6岁范围内.将胸腺块消毒、剪碎并研磨,尼龙网过滤后进行体外原代细胞培养,T细胞密度与小鼠脾细胞密度均为1x106/ml,培养基为DMEM,添加15%小牛血清、25mM hepes、4mM谷氨酰胺、10μM 2-巯基乙醇、2mM丙酮酸钠、100U/ ml青霉素及100μg/ml链霉素,37℃、5% CO2孵箱孵育1月.60μl 人卵巢癌细胞与60μl人胸腺细胞体外共同孵育作为实验组,60μl DMEM与60 μl人胸腺细胞孵育作为阴性对照.2天后,进行96孔板MTT比色法体外测定T细胞活率 .10μlMTT溶液加入每孔中,将96孔板置于孵箱中,4小时后,100μl 20% SDS加入每孔中,过夜后检测OD值.实验组的OD值(OD=0.0462,平均1 .3287±0.3538)高于阴性对照组(OD=0.045,平均0.5270±0 .0582),P<0.01,说明小鼠脾细胞能促使人T细胞增殖.
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灯盏花单体成分对体外培养大鼠视网膜神经细胞的影响
目的:考察咖啡酸、东莨菪素、野黄芩苷对体外培养视网膜神经细胞存活的影响,探讨灯盏花中具视神经保护作用的有效成分.方法:取18只出生2~3d的大鼠乳鼠断颈处死,无菌条件下摘取眼球,在体式显微镜下沿角膜剪开,钝性分离出视网膜组织.用0.125%的胰蛋白酶37℃下消化,30min后加入纯小牛血清终止消化,用200目无菌钢筛网滤过.
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钙拮抗药对体外培养大鼠视网膜神经细胞的影响
目的:考察以维拉帕米和尼莫地平为代表的钙拮抗药(calcium antagonists)对体外培养大鼠视网膜神经细胞存活的影响.方法:取12只出生2~3d的大鼠乳鼠断颈处死,无菌条件下摘取眼球,在体式显微镜下沿角膜剪开,去除晶状体和玻璃体,钝性分离出视网膜.用0.125%的胰蛋白酶37℃下消化,30min后加入纯小牛血清终止消化,用200目无菌钢筛网滤过.
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一清片的体外抗病毒作用
目的:一清片是由大黄、黄芩、黄连等味中药组方,采用现代制剂工艺进行提取得浸膏制粒压片而成,具有清热燥湿、泻火解毒、化瘀止血之功能,上呼吸道感染是其主治之一, 由于呼吸道多见病毒感染,为此,观察一清片的抗病毒作用.方法:不同浓度的药物与100TCID50的腺病毒3、7型和合胞病毒等容量混合,室温作用1小时,取此混合液0.2ml接种于人胚肺成纤维细胞突变株细胞管中吸附45分钟后,加足2%小牛血清Eagles维持液,37℃温孵培养24小时,移33~35℃旋转培养器培养,逐日观察细胞病变,判断药物抗病毒作用.结果:一清片2.55mg(生药)/ml浓度可抑制腺病毒3型、合胞病毒所致的细胞病变,但此浓度仅部分抑制腺病毒7型所致细胞的病变.结论:一清片对腺病毒3、7型及合胞病毒具有一定的抑制作用.
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血清代用品在羊水细胞培养染色体分析中的应用
细胞培养已从完全使用天然培养基,发展到人工培养液添加血清.血清中含有大量促生长物质,是细胞培养的重要成分.但是,血清中也含有一定的细胞毒性物质和抑制物质,对细胞生长有一定负作用,影响细胞功能的表达[1].近年来,人们试图研制一种去除血清中有害物质的完全培养基,以满足临床科研和实验诊断的需要.法国IBF公司研制了一种Ultroser的血清代用品,可部分代替小牛血清,国内有少数实验室使用过[2,3],但因价格昂贵,不易购得而受到限制.我们研制的血清代用品(serum supplement, SS)用于外周血淋巴细胞培养进行染色体分析[4],达到了较好的效果,现用于羊水细胞培养作染色体检查.
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不同稀释液对酶活力超线性样本血清ALT、AST测定的影响
目的:探讨不同稀释液(纯化水、小牛血清)对酶活力超线性样本血清ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(天门冬氨酸氨基转移酶)测定的影响。方法使用不同稀释液、使用不同稀释倍数稀释酶活力线性范围内样本与酶活力超线性范围样本后,在奥林巴斯AU-640全自动生化分析仪上测定血清ALT、AST。结果酶活力线性范围内样本使用纯化水稀释后血清ALT、AST测定结果较真实值偏高,与未稀释组比较差异有统计学意义(P<0.05)。酶活力线性范围内样本使用小牛血清稀释后血清ALT、AST测定结果更接近真实值,与未稀释组比较差异无统计学意义(P>0.05)。酶活力超线性范围样本使用纯化水稀释后血清ALT、AST测定结果比使用小牛血清稀释后测定结果偏高,差异有统计学意义( P<0.05)。结论不同稀释液由于基质效应的不同,对酶活力超线性样本血清ALT、AST测定结果的影响不同;随着稀释倍数的增加,使用纯化水稀释对血清ALT、AST测定结果的影响越明显;随着稀释倍数的增加,使用小牛血清稀释对血清ALT、AST测定结果无明显影响。
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小牛血清去蛋白提取物联合丁苯酞治疗ICVD疗效分析
目的 探讨小牛血清去蛋白提取物联合丁苯酞对缺血性脑血管病(ICVD)患者的治疗效果.方法 选择医院收治的68例ICVD患者,随机分为对照组与观察组,各34例.对照组在基础治疗上予以丁苯酞治疗,观察组在对照组治疗基础上加用小牛血清去蛋白提取物治疗,两组均治疗21 d.检测患者治疗前后脑血管储备功能(CVR)、颈动脉内-中膜厚度、斑块Crous积分、斑块回声等指标变化,根据NIHSS评估其神经功能症状.结果 治疗后,两组CVR、BHI、MCV均较治疗前明显升高,且观察组上升幅度明显高于对照组(P<0.05);两组IMT、Crous积分及不稳定斑块数目明显低于治疗前,且观察组显著低于对照组(P<0.05);两组NIHSS评分明显降低,而Barthel指数明显升高,且观察组变化幅度均大于对照组(P<0.05);2组不良反应发生率无统计学差异(P>0.05).结论 小牛血清去蛋白提取物联合丁苯酞可显著提高对ICVD的临床疗效,改善缺血缺氧症状,减小颈动脉斑块厚度,促进患者神经功能恢复.
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自制HBsAg质控物及应用
目前临床实验室使用的HBsAg质控物多为商品质控血清,但由于受保存环境、运输条件与供货时间等因素的影响,不仅使HBsAg质控血清质量显著降低,而且常造成室内质控工作中断和困难.为此,我科从实用出发,以卫生部临检中心提供的HBsAg定值控制品为标准,自己制备了HBsAg质控物,经实验应用观察获得满意结果,现总结报告如下.
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小牛血清去蛋白注射液防治鼻咽癌放射性粘膜损伤的临床观察
目的 研究小牛血清去蛋白注射液防治鼻咽癌放疗不良反应的临床疗效.方法 选择经临床病理确诊的鼻咽癌患者48例,随机分成治疗组24例(在常规治疗的基础上给以小牛血清去蛋白注射液10mi(0.4g),加入0.9%氯化钠溶液中静脉滴注,1次/d的治疗方案),对照组24例(抗炎抑酸等常规治疗).结果 治疗组患者的放射性皮肤损伤情况明显好于对照组,皮肤损伤的愈合快于对照组,而且口腔黏膜炎、消化道反应及全身乏力的发生率也少于对照组.
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小牛血清联合鼠神经因子治疗小儿脑性瘫痪的临床观察
目的 探讨鼠神经因子联合小牛血清对小儿脑性瘫痪的临床疗效.方法 选取广元市妇幼保健院2015年1月-2017年6月收治的脑性瘫痪患儿60例,按治疗方法分为对照组、观察组,每组30例.对照组使用20 μg鼠神经生长因子注射液加2mL灭菌注射用水溶解,肌肉注射,隔日1次,10d为1疗程,间隔10d,共3个疗程.观察组在对照组的基础上联合使用20mL小牛血清去蛋白注射液加200~300mL5%葡萄糖,静脉滴注,每天1次,20 d为1疗程,间隔10d,共2个疗程.比较两组患儿治疗前后发育商(DQ)评分的变化及临床疗效.结果 两组患儿治疗前的DQ评分无显著性差异;治疗后,两组患儿的DQ评分均显著提高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且观察组的DQ评分显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).观察组临床疗效的总有效率(86.67%)显著高于对照组(73.33%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 鼠神经因子联合小牛血清对小儿脑性瘫痪的疗效较好,能提高患儿发育商评分,值得临床应用和推广.
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整合素连接激酶对人瘢痕成纤维细胞中创面收缩相关因子mRNA表达的影响
创面愈合后瘢痕形成及挛缩可致各种畸形,造成严重功能障碍.创面收缩主要缘于Fb与胶原以及ECM之间的相互作用[1],创面愈合后这种作用持续存在,导致瘢痕挛缩.整合素连接激酶( integrin-linked kinase,ILK)通过整合素β1通路促进烧伤创面Fb增生,从而加速创面愈合[2].Fb内的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fn)和Ⅰ型胶原等与细胞增殖、分化、表型改变等生物学行为有密切关系,在瘢痕形成过程中亦然[3-5].本研究拟观察ILK对人增生性瘢痕Fb中Fn、α-SMA和Ⅰ型胶原以及细胞超微结构的影响,并探讨其可能机制.1 材料与方法1.1 主要试剂与设备小牛血清(FCS)及DMEM培养液购自美国Gibco公司.
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沙蟾毒精与牛血清蛋白的结合及分子对接研究
目的:研究沙蟾毒精(arenobufagin)与牛血清蛋白的相互作用.方法:采用平衡透析法,高效液相色谱测定沙蟾毒精与小牛血清蛋白的结合率.荧光光谱法研究药物与牛血清白蛋白( BSA)的相互作用.采用同源建模和分子对接技术分析药物相互作用模式.结果:沙蟾毒精(1μg·mL-1)与小牛血清蛋白的佳平衡透析时间为30 h,血清蛋白结合率为(57.9±0.7)%,荧光光谱测得沙蟾毒精与BSA的结合常数为1.02×103 L·moL-1.BSA同源建模和分子对接结果显示:沙蟾毒精能够结合到BSA的Site I.结论:沙蟾毒精与小牛血清发生中等强度的结合,白蛋白是沙蟾毒精的载药蛋白.
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介绍一种简易的成纤维细胞培养方法
在研究人体细胞生物学、体细胞遗传学和疾病诊断方面,成纤维细胞培养日渐成为一种不可缺少的手段.目前,有关成纤维细胞的培养方法不尽相同.笔者经多次实验总结出一种相对简易的成纤维细胞培养方法,供同道们参考.1 材料和方法手术切取成年健康兔全层皮肤0.5cm2~1.0cm2,置盛有含10%~15%小牛血清RPMI1640(Sigma USA)营养液的容器内,在净化工作台下用眼科剪和镊将皮下脂肪组织去除干净,以PBS或Hank's液反复冲洗三次(末次可用RPMI1640液),将其剪成0.5mm3~1mm3的小块,以每块1cm的间距接种在1~2个玻璃或塑料培养瓶中,然后将其翻转倒置(接种面在上)加入适量营养液,在5%CO2孵箱中静置培养3~4h后,再轻轻翻转培养瓶(接种面在下),使组织与营养液充分接触,再置培养箱内继续培养.3d后更换营养液(保留原液体量的1/3),倒置相差显微镜下定期观察细胞的动态变化,及时更换营养液并适时传代.
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小牛血清治疗褥疮的体会
目的:研究骨科患者治疗褥疮的新方法。方法:用碘伏棉球清除患者褥疮部位分泌物后,用5ML 注射器直接抽取5ML 小牛血清均匀滴入创面;对照组用碘伏棉球清除患者褥疮部位分泌物后,给予常规换药法,两组进行对照分析。结果:观察患者褥疮愈合快而有效率达100%,而对照组愈合率慢,有效率为60%。结论:小牛血清促进褥疮面肉芽组织新生,对皮肤黏膜无任何不良反应,病人无疼痛值得临床上推广。