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APA-BCC镇痛微囊在癌痛患者脑脊液中的生物学变化
了解海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC微囊)植入癌痛患者脑脊液中的形态、活率及亮氨酸脑啡肽(L-EK)分泌的变化.将APA-BCC微囊按常规腰穿方法植入癌痛患者蛛网膜下腔.7或8天时采取脑脊液,观察APA-BCC的形态、细胞活率,用放射免疫法测定脑脊液中L-EK的含量.移植7天后,患者视觉模拟疼痛评分(VAS)均值由移植前的8.8降为2.4;脑脊液中APA-BCC微囊形态无明显变化;细胞活率由平均91.2%降为89.1%;L-EK含量较移植前增加了1.65倍.将APA-BCC微囊植入癌痛病人脑脊液中能够保持细胞存活、分泌亮啡肽,并产生镇痛效应.
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无血清培养基培养乳猪肝细胞的效果
目的:比较无血清培养基和含血清培养基培养乳猪肝细胞的效果,以寻找一种用于生物人工肝猪肝细胞无血清培养的良好培养基.方法:采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞.将肝细胞以5×108@L-1分别培养在无血清培养基和含血清培养基中,动态观察培养7 d中肝细胞活率、蛋白质和葡萄糖合成功能、G6-Pase活性、安定转化功能及LDH漏出量.结果:无血清培养的猪肝细胞各项指标除G-6-Pase活性在0,1,2 d较低、葡萄糖合成功能在2,7 d较低外,其余与含血清培养基培养的肝细胞无显著差异.肝细胞活率随着培养时间的延长而下降,但均高于88%;无血清培养的肝细胞的蛋白质合成功能在培养7 d中保持稳定.安定转化功能在培养2,3 d强(安定浓度2d时为75±4pg@eell-1,3 d时为77±5pg@cell-1);葡萄糖合成功能从1 d时1.00±0.15 nmol@cell-1下降到2 d时0.71±0.02nmol@cell-1;G-6-Pase活性从0d时1290±30zmol@cell-1下降到ld时306±38amaol@cell-1,然后维持在较低水平;LDH漏出量在2,3 d较高.结论:无血清培养基可用于生物人工肝中猪肝细胞的培养.
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原代小型猪肝细胞的分离培养及其功能
目的:研究原代小型猪肝细胞的分离、培养及肝细胞的形态学变化及其功能特性.方法:用体外灌流装置,DTA和胶原酶两步灌流法消化分离小型猪肝细胞.在含100 ml/L小牛血清及其附助因子的RPMI 1640培养基中培养.对不同培养时间的肝细胞进行形态学观察.同时测定不同培养时期肝细胞生化合成及生物转化功能.结果:(1)肝细胞产量为6.0×109～8.2×109(7.0 × 109±0.79×109)/每只猪肝;(2)肝细胞活率为90.0～99%(94.4±3.07%);(3)肝细胞具有正常肝细胞的超微结构特征;(4)接种培养后肝细胞增生生长旺盛;(5)接种后20 h内每107个肝细胞尿素及白蛋白的合成量分别为1.21～1.50 mmol/L及0.58～0.80 g/L;(6)肝细胞数在1.25×107个～1.60×107个时,利多卡因的转化率在24 h时均在80%以上,随着时间的延长及肝细胞数的增多,利多卡因的转化率逐渐增加.结论:本方法分离获取的肝细胞产率高、活性高、增生生长旺盛、具有良好的生物合成及生物转化功能,可作为生物人工肝较为理想的细胞来源.
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台盼蓝染色与FDA/PI双染色对检测肝细胞活率的评价
台盼蓝排除试验是常用的检测细胞活率的方法,但有文献报道其并不能准确反映肝细胞的存活情况.分离的肝细胞在用于病人治疗前,必须有1个精确迅速的检测肝细胞活率的方法.我们采用FDA/PI(荧光二乙脂/碘丙啶)双染,应用流式细胞仪,可迅速精确地检测肝细胞活率.
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浙江省2006年医药卫生科研进展
一、基础医学研究1.生物人工肝用细胞源与混合型人工肝的研究:浙江大学医学院附属第一医院为解决生物人工肝的瓶颈即肝细胞源的问题,在国内率先建立四步灌流法分离肝细胞的新方法,使新鲜分离的肝细胞活率和得率得到了显著提高,开辟了为人工肝及细胞生物学研究提供高质量肝细胞的新途径.
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建立活肿瘤组织细胞库的研究
目的 通过对乳腺癌组织进行体外细胞原代培养,观察其生长状况及规律,适时的进行细胞传代及冻存,探讨乳腺癌细胞培养新方法,为后续肿瘤细胞库的建立提供新思路.方法 选取2014年2月至2015年1月期间在我院住院患者52例,所有患者病理学诊断明确,患者及家属签署自愿同意书.术中留取部分癌组织进行处理,对细胞进行培养,定时观察生长状况,定期换液、传代,冻存并对细胞进行纯度及细胞活率检测.结果 (1)培养24 h后,可见大部分细胞呈贴壁状态;48 h后,细胞基本全部呈贴壁生长.培养9～10 d,镜下观察细胞数大量增加.冻存前对细胞行检测活率均高于86％,肿瘤细胞纯度均在75％以上.(2)随培养天数增加,细胞活力下降,传至第五代后,开始出现死亡细胞并伴纤维细胞生长.(3)52例标本,40例成功冻存;8例发生污染;6例未出现增殖.培养成功率为76.92％.结论 (1)乳腺癌细胞可以进行体外选择性原代培养并增殖达到冻存所需细胞数.(2)换液和传代可在一定程度上刺激癌细胞生长及增殖.(3)准确地活率及纯度检测能够为实验提供保障工作.(4)实验的成功能够为肿瘤组织细胞库的建立提供基础保障工作.
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RPMI-1640和DMEM培养基中肝癌细胞系BEL-7402与HepG-2的生长状态比较
背景:DMEM和RPMI-1640是两种常用的商品化培养基,二者对肝癌细胞生长的影响尚未见直接的对比研究.目的:比较两种常用培养基对人肝癌BEL-7402与HepG-2细胞系体外生长和增殖效果的影响,从中选择更适合的培养基.方法:分别应用高糖DMEM与RPMI-1640完全培养液培养BEL-7402和HepG-2细胞,于培养的0,24,48,72,96,120 h用酸性磷酸酶检测法测定细胞生长和增殖速率,并于倒置显微镜下观察细胞的形态.结果与结论:结果发现BEL-7402和HepG-2细胞在RPMI-1640培养基中的生长增殖速率均明显高于DMEM培养基 (P < 0.01).镜下观察证实细胞在RPMI-1640培养基中的黏附和伸展状态更好.因此,建议首选RPMI-1640培养基进行肿瘤细胞体外培养.
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低温制剂保存对脂肪间充质干细胞生物学特性的影响
背景:脂肪干细胞在GMP洁净车间制备完成后需要做成制剂才能给患者输注.低温制剂相比于冻存制剂有很多优势,然而关于低温短期保存对干细胞生物学特性影响的研究较少.目的:评价用含5%人血白蛋白的复方电解质低温保存24 h对脂肪间充质干细胞生物学特性的影响.方法:取第3-6代人脂肪间充质干细胞,以5×109 L-1的细胞浓度重悬在含5%人血白蛋白的复方电解质注射液中,将细胞悬液转移至冻存管中,置于冷链运输箱,2-8℃低温保存24 h.观察低温保存前后的细胞形态、贴壁能力、细胞活率、细胞直径及细胞免疫表型变化.结果与结论:①脂肪间充质干细胞低温保存24 h后,死细胞增多,细胞活率显著下降,但细胞活率仍大于80%,活细胞直径显著增大;②脂肪间充质干细胞低温保存24 h后,少量细胞为圆形,失去贴壁能力,大部分细胞能贴壁生长,形态为梭形,与细胞保存前贴壁形态相似;③脂肪间充质干细胞低温保存24 h后,HLA-DR、CD34和CD45均为阴性表达,阳性率低于2%;CD29、CD73和CD105均为阳性表达,阳性率高于95%,但保存后的细胞显著地由一群分为两群,部分细胞体积增大,向右移动;④结果表明,低温制剂保存未明显影响脂肪间充质干细胞的贴壁生长能力、存活率及免疫表型等干性生物学特性.
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不同处理技术对流式细胞术检测淋巴细胞免疫表型的影响
通过比较全血法和提取单个核细胞法两种不同处理方法对淋巴细胞免疫表型检测结果和细胞活率的影响.证明上述两种方法对免疫表型和细胞活率的影响存在明显差异性,本试验将为正确选择所需试验方法提供理论依据.
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海藻酸微囊在细胞冷冻保存中的研究现状及应用
细胞的冷冻保存是细胞生物学实验中重要的实验技术.长期以来,人们使用冷冻保存液重悬细胞后进行冷冻储存,但是近年来,众多研究者发现传统冷冻方案往往会导致细胞活率大幅下降和细胞功能方面受损,从而很难满足生物医学、组织再生工程、细胞移植技术等高新技术的要求.所以研究者提出利用三维海藻酸微囊包埋细胞后再进行冷冻保存,从而在保证较高细胞活率的同时维持细胞的原有功能,有效的提高细胞的冷冻保存效率.本文概述了海藻酸微囊在细胞冷冻保存过程中的研究现状,同时对其应用进行了展望,以期为后续研究工作提供参考.
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生物人工肝的研究进展
肝移植是治疗急慢性肝功能衰竭有效的方法,但是,由于供肝缺乏,必需寻求终未性肝病替代疗法.其中主要方法之一是体外生物人工肝支持系统,简称生物人工肝(bioartificial liver, BAL),发展至今已有40多年.临床试验证明BAL能促进肝功能衰竭病人的恢复,或过渡到肝移植.生物反应器是BAL的核心部件,生物反应器设计的主要目的在于保持肝细胞活力和功能,且不妨碍肝细胞营养及代谢产物的交换,同时还能起到治疗作用.细胞材料是BAL治疗基础,维持细胞活率和功能对BAL功效有决定性作用.本文就生物人工肝装置在实验和临床试验中的研究进展作一综述.
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流式细胞术在细胞活率检测中的应用
目的探讨流式细胞术在细胞活率检测中的应用.方法测试管中用CD45-PerCP单抗标记动员后采集物中的单个核细胞,用碘化丙锭(PI)染色其中死亡的细胞.对照管中不加PI,其余与测试管相同.结果(1)随着温育时间的延长,PI拒染率逐渐降低,温育时间以15 min为宜.(2)PI拒染率与台盼蓝拒染率呈显著正相关(r=0.998);其精密度优于台盼蓝拒染试验.结论流式细胞术适用于细胞活率的检测.
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大体系冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞免疫表型及细胞杀伤活性的影响
目的 探讨大体系(50 mL)冻存对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞免疫表型及细胞杀伤活性的影响.方法 采集6例健康志愿者的外周血,采用Ficoll法分离得到单个核细胞,用细胞因子诱导培养CIK细胞.收集冻存1个月后复苏的CIK细胞,采用流式细胞术检测其冻存前后的细胞活率和免疫表型;通过与乳腺癌细胞共培养(效靶比10∶1和40∶1)的方法测定其杀伤活性,与新鲜未冻存的细胞杀伤活性进行比较,同时并对不同效靶比冻存前后的细胞杀伤活性进行比较.结果 CIK细胞大体系冻存前平均细胞活率(97.79 ± 1.92)％,显著高于复苏后的(83.61±3.42)％(P＜0.05).复苏后CIK细胞中CD3+、CD3+ CD4+、CD3+ CD8+、CD3+ CD56+表型CIK细胞所占比例虽较冻存前稍有降低,但差异均无统计学意义(P＞0.05).效靶比10∶1、40∶1时冻存前细胞和复苏后细胞杀伤率比较差异均无统计学意义(P＞0.05);效靶比40∶1时冻存前细胞和复苏后细胞杀伤率均显著高于效靶比10∶1时(P＜0.05).结论 大体系(50 mL)冻存对于CIK细胞活率虽有影响,但对免疫表型和细胞活性均未影响.
关键词： 细胞因子诱导的杀伤细胞 细胞冻存 杀伤活性 细胞活率 肿瘤生物治疗 -
人胸腺细胞与小鼠脾细胞体外共同孵育的MTT比色法测定
为了观察人胸腺细胞与小鼠脾细胞的关系,我们运用了M TT比色法进行体外测定.人胸腺取材于胸外科手术及妇产科手术,年龄在5月-6岁范围内.将胸腺块消毒、剪碎并研磨,尼龙网过滤后进行体外原代细胞培养,T细胞密度与小鼠脾细胞密度均为1x106/ml,培养基为DMEM,添加15%小牛血清、25mM hepes、4mM谷氨酰胺、10μM 2-巯基乙醇、2mM丙酮酸钠、100U/ ml青霉素及100μg/ml链霉素,37℃、5% CO2孵箱孵育1月.60μl 人卵巢癌细胞与60μl人胸腺细胞体外共同孵育作为实验组,60μl DMEM与60 μl人胸腺细胞孵育作为阴性对照.2天后,进行96孔板MTT比色法体外测定T细胞活率 .10μlMTT溶液加入每孔中,将96孔板置于孵箱中,4小时后,100μl 20% SDS加入每孔中,过夜后检测OD值.实验组的OD值(OD＝0.0462,平均1 .3287±0.3538)高于阴性对照组(OD＝0.045,平均0.5270±0 .0582),P＜0.01,说明小鼠脾细胞能促使人T细胞增殖.
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麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次对病毒滴度稳定性试验的影响
目的 了解麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次的稳定性范围.方法 用DMEM培养液将Veto细胞137代连续传至173代,检测其细胞活力,并观察Vero细胞的形态,接种麻疹减毒活疫苗参考品进行病毒滴定及热稳定性试验.结果 170代以下Vero细胞形态良好,细胞活力在85％以上,麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验的结果:137～ 169代Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验无统计学差异(P＞0.05),170代以上代次的Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗热稳定性试验有明显统计学差异(P＜O.01).结论 169代以下Vero细胞为检定用麻疹减毒活疫苗佳细胞代次.
