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微透析技术用于江浙蝮蛇毒镇痛组分对中枢内阿片肽调控作用的研究
目的研究江浙蝮蛇毒镇痛C4组分对中枢亮氨酸脑啡肽、β-内啡肽、P物质水平的调节作用.方法采用微透析技术,探针定位于尾状核,以人工脑脊液透析,HPLC检测神经肽的含量,动态监测其变化.结果微透析膜的回收率为18%～43%,大鼠在给予C4组分后,尾状核亮氨酸脑啡肽含量显著增高,亮氨酸脑啡肽含量为可乐定组的1.5倍,并持续作用8h以上,而β-内啡肽、P物质含量变化较小.结论 C4组分主要作用于亮氨酸脑啡肽,通过提高其含量发挥镇痛作用.
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慢性束缚应激大鼠海马CA1区L-ENK的变化及逍遥散的调节作用
目的:研究慢性束缚应激时大鼠海马CA1区L-ENK的变化以及逍遥散的调节作用.方法:用特制束缚架连续束缚7d与21d,每天3h的方法制作大鼠束缚应激模型,用免疫组织化学方法结合图像分析检测中枢(海马CA1区、齿状回、大脑皮层)L-ENK的变化.结果:大鼠海马CA1区L-ENK免疫反应阳性细胞的平均光密度、积分光密度、平均总面积、面密度和数密度等在造模7d时都有不同程度的增强,到造模21d时大鼠海马CA1区L-ENK有极显著性增强;7d与21d两模型组、四君子汤组及金匮肾气丸组大鼠CA1区L-ENK免疫反应积分光密度与逍遥散组比较显著增强,而逍遥散组和正常对照组相比则没有明显差异;可见逍遥散组对大鼠海马CA1区L-ENK的积分光密度有显著的影响.结论:逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸对慢性束缚应激时海马CA1区有不同程度的调节作用,而以逍遥散作用为优.
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APA-BCC镇痛微囊在癌痛患者脑脊液中的生物学变化
了解海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC微囊)植入癌痛患者脑脊液中的形态、活率及亮氨酸脑啡肽(L-EK)分泌的变化.将APA-BCC微囊按常规腰穿方法植入癌痛患者蛛网膜下腔.7或8天时采取脑脊液,观察APA-BCC的形态、细胞活率,用放射免疫法测定脑脊液中L-EK的含量.移植7天后,患者视觉模拟疼痛评分(VAS)均值由移植前的8.8降为2.4;脑脊液中APA-BCC微囊形态无明显变化;细胞活率由平均91.2%降为89.1%;L-EK含量较移植前增加了1.65倍.将APA-BCC微囊植入癌痛病人脑脊液中能够保持细胞存活、分泌亮啡肽,并产生镇痛效应.
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APA微囊包裹对牛肾上腺嗜铬细胞分泌儿茶酚胺和亮氨酸脑啡肽的影响
分析海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊包裹对牛肾上腺嗜铬细胞(BCCs)分泌儿茶酚胺(CA)和亮氨酸脑啡肽(L-EK)的影响. 用APA微囊包裹原代BCCs, 分别用高效液相色谱-电化学法和放射免疫法检测囊化与非囊化的BCCs分泌CA和L-EK的能力. 与非囊化BCCs相比, 囊化BCCs在单位时间内分泌肾上腺素(E)和去甲肾上腺素(NE)的能力并没有大的改变, 而多巴胺(DA)和L-EK的分泌量则在部分时间点有明显下降. APA微囊对牛肾上腺嗜铬细胞分泌E和NE并无显著的影响, 而对DA和L-EK的分泌有一定影响, 这种影响仅在包裹后短期内发生, 对后期的分泌没有影响.
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豚鼠上橄榄核簇L-ENK免疫阳性神经元分布及注射庆大霉素的变化
为探讨豚鼠上橄榄核簇(superior olivary complex, SOC)各亚核亮氨酸脑啡肽(leu-enkephalin, L-ENK)阳性神经元表达和注射庆大霉素(gentamycine, GM)时的变化,本文采用免疫组化ABC法结合图像分析技术研究SOC内L-ENK阳性神经元分布, 并观察阳性细胞形态、灰度值、胞体截面积和在注射GM时细胞数的改变. 结果表明,SOC内L-ENK阳性神经元主要分布在外侧上橄榄核(lateral superior olive, LSO),以小梭形或圆形细胞为主,其他亚核阳性神经元数量较少且分布弥散,以大多极细胞多见.注射GM时LSO与橄榄周核(periolivary nuclei, PON)内L-ENK 阳性细胞的变化较为明显,除形态不规则、突起变短或消失外,其阳性细胞的灰度值呈降低趋势,胞体截面积在GM1d和GM3d组明显增大,细胞数则在GM3w组显著减少(P＜0.05).提示L-ENK参与声信号在脑干水平的传递、整合及GM损害听力的病理过程.
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江浙蝮蛇毒镇痛组分对吗啡依赖大鼠尾状核神经肽的调控作用
目的:研究江浙蝮蛇毒镇痛C4组分对大鼠尾状核中神经肽水平的调控作用.方法:应用微透析技术,探针定位于大鼠尾状体,以人工脑脊液透析,HPLC检测亮氨酸脑啡肽、β-内啡肽和P物质的含量,动态监测其变化.结果:在吗啡依赖大鼠给予C4组分后,尾状核亮氨酸脑啡肽含量显著增高,为可乐定组的1.5倍,并持续作用8h以上,而β-内啡肽和P物质含量变化较小.结论:C4组分主要作用于亮氨酸脑啡肽,通过提高其含量发挥镇痛作用.
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手术方式对创伤性骨折家兔阿片肽含量的影响
目的 观察手术方式对创伤性骨折模型家兔血浆β内啡肽(β-EP)及亮氨酸脑啡肽(Met-ENK)含量的影响,探讨手术方式与疼痛的关系.方法 选取4个月龄健康新西兰大白兔32只,随机分为克氏针内固定组(A组)、钢板内固定组(B组)、模型组(C组)和正常对照组(D组),分别于手术前、手术后1,3,7,14 d分别抽血采用放射免疫法测定β-EP 及Met-ENK的含量.结果 ①C组随着手术后时间的延长β-EP逐渐下降,与手术前比较有统计学意义(P<0.05);②B组随着手术后时间的延长β-EP及Met-ENK含量均逐渐下降,各时间段分别与手术前比较均有统计学意义(P<0.05);③A组随着手术后时间的延长β-EP及Met-ENK含量均逐渐下降,与手术前比较均有统计学意义(P<0.01),且β-EP及Met-ENK含量水平恢复正常时间较B组短(P<0.01).结论 微创内固定可以影响β-EP及Met-ENK的分泌,可能是通过调节血浆中β-EP及Met-ENK的水平而参与镇痛效应.
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脑出血患者血浆β-内啡肽、强啡肽A1-13和亮氨酸脑啡肽的含量变化及纳络酮的影响
目的 探讨脑出血患者血浆β-内啡肽(β-EP)、强啡肽A1-13(DynA1-13)和亮氨酸脑啡肽(L-ENK)的含量变化及纳络酮对其影响.方法 将60例脑出血患者随机分为对照组(n=30)和纳络酮组(n=30).对照组采用常规治疗,纳络酮组在常规治疗基础上加用纳络酮3.0mg/d静脉滴注,两组均治疗14d.采用放射免疫分析法(RIA),检测60例脑出血患者发病当天(治疗前)和治疗3d、7d、10d、14d血浆β-EP、DynA1-13、L-ENK的含量变化,并与正常组比较.观察纳络酮对上述3项指标的影响.结果 (1)脑出血患者发病后血浆β-EP,DynA1-13含量即明显增高,与正常组比较差异有显著性(均P＜0.01);L-ENK含量与正常组比较差异无显著性(P＞0.05);(2)脑出血患者血浆β-EP、DynA1-13和L-ENK含量在发病7d达高峰,14d基本接近正常,治疗结束后两组比较差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论 (1)脑出血后血浆β-EP、DynA1-13、L-ENK含量异常升高;(2)纳络酮能拮抗β-EP、DynA1-1 3、L-ENK的异常升高,具有脑保护作用.
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地塞米松预处理对围手术期内源性阿片肽的影响
目的:探讨不同剂量地塞米松预处理对围手术期内源性阿片肽的影响.方法:选择80例全凭静脉麻醉下行甲状腺手术的女性患者ASA Ⅰ～Ⅱ级.随机分为S0.1、S0.2、So.3、D四组,每组患者20例.麻醉诱导前S0.1、So.2、So3三组分别静脉注射地塞米松0.1 mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg,D组静脉注射等容积的生理盐水.分别于3个时间点:麻醉诱导前10min(T1)、取病理标本时(T2)、拔管后20min(T3)抽取静脉血2mL,采用ELISA法测血浆β-内啡肽(β-EP)、强啡肽A(DynA)、亮氨酸脑啡肽(LEK)的水平.结果:手术开始后血浆β-EP较术前升高(P＜0.01),且对照组高于实验组(P＜0.01),S01高于So.2、So.3(P＜0.05),So.2和S0.3相较无差异(P＞0.05);四组患者DynA和LEK水平在T1和T2时间点各组间、组内比较无差异(P＞0.05),T3时间点明显升高(P＜0.01),各组间比较无差异(P＞0.05).结论:地塞米松预处理可以降低围术期内源性阿片肽水平.0.2mg/kg地塞米松预处理即可达到较为满意的效果.
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脑出血患者血浆和脑脊液中亮氨酸脑啡肽含量及纳络酮的影响
目的: 探讨脑出血患者血浆和脑脊液中亮氨酸脑啡肽(L-ENK)的含量变化以及纳络酮对其影响. 方法: 将60例脑出血(ICH)患者随机分为对照组(n=30)和纳络酮组(n=30).对照组采用常规治疗,纳络酮组在常规治疗基础上加用纳络酮3.0mg/d静脉滴注,两组均治疗14d.采用放射免疫分析法(RIA),检测60例脑出血患者血浆和脑脊液中L-ENK在发病第1天、3天、7天、10天和14天的含量变化,并设立正常对照组,观察纳络酮对L-ENK的影响,并观察不同部位出血时L-ENK的变化. 结果: ①不同部位出血患者之间血浆和脑脊液中L-ENK含量的差别不大,无显著性差异(P>0.05);②脑出血患者血浆和脑脊液中L-ENK含量在发病第7天达高峰,第14天基本接近正常,治疗结束后两组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01);结论: ①L-ENK参与了脑出血的病理生理过程;②纳络酮能拮抗L-ENK所引起的中枢神经系统损伤,具有脑保护作用.
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大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核浅层内GABA样、L-ENK样、GlyT2样阳性末梢与Sindibis病毒转染表达GFP神经元之间的联系
应用GFP基因重组病毒标记技术和免疫荧光组织化学技术,在荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜下观察了大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)浅层内GABA样、L-ENK样、GlyT2样阳性纤维和末梢与Sindibis病毒转染表达GFP神经元之间的联系.结果显示:①将GFP基因重组Sindibis病毒注入一侧Vc浅层后,仅在同侧vc注射部位附近的Ⅰ～Ⅲ层内观察到4～8个逆标的GFP神经元,这些神经元的胞体为小型(直径≤15 μm)圆形、梭形或不规则形;②Vc浅层内均可见大量的GABA样、L-ENK样、GlyT2样阳性纤维和末梢,以Ⅰ和Ⅱ层分布为密集;③GABA样、L-ENK样、GlyT2样阳性纤维和末梢分别聚集于GFP标记神经元的胞体或树突周围,并与之形成密切接触.以上结果表明:Vc浅层内GFP神经元可能与GABA能、L-ENK能、Gly能阳性纤维和末梢形成突触联系并接受这些抑制性神经末梢的调控.
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缓激肽体外诱导牙髓组织甲硫氨酸脑啡肽及亮氨酸脑啡肽产生和释放的实验研究
目的在体外探讨甲硫氨酸脑啡肽(MEK)、亮氨酸脑啡肽(LEK)与缓激肽(BK)的相关性.方法将大鼠牙髓在Hanks液中与不同浓度的BK共同孵化后,测定牙髓组织中及培养液中MEK、LEK的量.结果与对照组相比,牙髓组织中MEK、LEK的量在加入1 μmol/L的BK后显著增加,而加入10 μmol/L和100 μmol/L的BK后无明显变化.从牙髓中释放入培养液的MEK、LEK的量随BK浓度的增加而增加.结论在体外BK对MEK、LEK的产生和释放起调节作用.
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下丘脑脑啡肽及其降解酶含量与电针镇痛有效性的相关性研究
电针疗法是临床镇痛的常用疗法之一,在临床治疗中已被广泛应用.研究表明[1-2],电针的镇痛效应存在明显个体差异性,包括针刺耐受及针刺低敏感性等.以往研究发现,有多种物质参与针刺差异性的产生,如脑啡肽[3]、八肽胆囊收缩素(CCK-8)、神经肽物质[4]等.有学者认为脑啡肽与针刺差异性密切相关[3].Chen等[5]发现电针可激活脑啡肽,通过脑啡肽与μ、6阿片受体的相互作用发挥镇痛效应,证实电针镇痛与脑啡肽密切相关.
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冰茶栓对骨癌痛大鼠不同脑区亮氨酸脑啡肽和β内腓肽含量的影响
目的 通过观察冰茶栓对骨癌痛大鼠不同脑区亮氨酸脑啡肽(leucine enkephalin,L-EK)和β内啡肽(β-endorphin,β-EP)含量的影响,探讨其抗骨癌痛的中枢作用机制.方法 取雌性SD大鼠30只,采用W256癌细胞骨髓腔注入术复制骨癌痛模型.术后7d选取26只骨癌痛大鼠随机分为冰茶栓组和模型组,每组13只,另取同期饲养的10只大鼠为正常对照组.术后15d开始连续10d给予冰茶栓101 mg/kg.分别于手术前后不同时点测量各组大鼠机械痛阈和热痛阈;未次给药后于冰盘取脑,采用放射免疫法检测各组大鼠大脑皮质、丘脑、海马区LEK和β-EP含量.结果 给药后5d和10 d,冰茶栓可显著提高骨癌痛大鼠的机械痛阈和热痛阈(P＜0.05,或P＜0.01).冰茶栓可明显提高骨癌痛大鼠丘脑区L-EK、伊EP含量及海马区L-EK含量(P＜0.05,或P＜0.01).结论 冰茶栓对W256癌细胞诱导的骨癌痛大鼠具有明显镇痛作用,其抗骨癌痛作用的中枢机制可能与其提高部分脑区的L-EK和β-EP有关,丘脑和海马可能是冰茶栓镇痛作用的靶部位.
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眼镜蛇神经毒素配伍咖啡因对疼痛模型大鼠丘脑中神经肽含量的影响
目的:探讨眼镜蛇神经毒素配伍咖啡因的镇痛作用机制.方法:应用放射免疫法测定该药对模型大鼠下丘脑内和血浆中的亮氨酸脑啡肽(L-EK)、P物质(SP)的含量变化.结果:该药可明显提高大鼠下丘脑内L-EK、SP的含量,而对外周血浆中的L-EK、SP的含量影响不大.结论:该药主要是通过调节中枢的L-EK、SP的含量来达到镇痛作用.
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亮氨酸脑啡肽一级结构的电喷雾质谱分析
目的:测定亮氨酸脑啡肽的精确相对分子质量及其一级结构.方法:应用高分辨电喷雾质谱法及碰撞活化解离技术对亮氨酸脑啡肽进行测定,根据典型的碎片离子确证其氨基酸序列及精确相对分子质量.结果:测得亮氨酸脑啡肽的准分子离子峰[M+H]+m/z 556.277 3,[M+Na]+m/z 578.258 7,与理论值相符合.通过适当调整碰撞解离电压,得到一系列典型的y离子、b离子及部分碎片离子,进而确证亮氨酸脑啡肽的完整序列.结论:该方法简单,快速,实用,测试成本低.
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祛风除痒汤治疗原发性肛门瘙痒症的临床疗效及作用机制研究
目的:观察祛风除痒汤治疗原发性肛门瘙痒症的临床疗效及作用机制.方法:将76例原发性肛门瘙痒症患者随机分为治疗组46例、对照组30例,治疗组采用祛风除痒汤坐浴治疗,对照组采用高锰酸钾粉坐浴治疗,2组均以7d为1个疗程,共治疗2个疗程.观察2组肛门瘙痒及皮损积分变化,检测治疗后患者血浆β-内啡肽、亮氨酸脑啡肽的浓度变化.结果:总有效率治疗组为86.96％,对照组为76.67％,2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);2组治疗后肛门瘙痒及皮损面积总积分均较治疗前下降,治疗组改善优于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);治疗组治疗后β-内啡肽水平明显高于对照组(P＜0.05),亮氨酸脑啡肽水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论:祛风除痒汤治疗原发性肛门瘙痒症可取得良好的效果,其作用机制可能与降低血浆β-内啡肽的浓度、减轻中枢性致痒有关.
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创伤性脑损伤患者血浆β-内啡肽、亮氨酸脑啡肽和甲硫氨酸脑啡肽的水平
目的 探讨内源性阿片肽在创伤性脑损伤发病机制中的作用.方法 采用放射免疫分析法(RIA)测定30例全麻颅脑手术患者和30例全麻非颅脑手术患者术前、术后及30例正常人血浆β-内啡肽(β-Endorhin,β-EP)、亮氨酸脑啡肽(leuthine enkephalin,LNK)和甲硫氨酸脑啡肽(mehionine enkephalin,MEK)的含量.结果 (1)60例手术患者术后血浆β-EP含量显著升高(P＜0.01),两组比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)颅脑手术患者术后血浆LNK含量显著高(P<0.01),与非颅脑手术者比较差异有统计学意义(P<0.01);(3)不同部位颅脑手术血浆LNK含量比较差异无统计学意义(P>0.05);(4)60例手术患者术后血浆MEK含量不升高,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);结论内源性阿片肽在创伤性脑损伤的病理生理过程中发挥作用不同.β-内啡肽在机体应激状态普遍升高,血浆中LNK的含量是创伤性脑损伤的特异性指标,LNK含量与脑损伤部位无关,MEK的含量变化与创伤性脑损伤无相关性.
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孕酮对吗啡位置偏爱大鼠相关脑区中亮氨酸脑啡肽水平的影响
目的:观察孕酮对于吗啡所致奖赏效应及相关脑区中亮氨酸脑啡肽水平的影响.方法:将40只SD大鼠随机均分为对照组(环糊精)、吗啡组、孕酮组和孕酮+吗啡组,建立吗啡条件性位置偏爱(CPP)模型,上午各组皮下给予相应药物后放入白室训练45 min;下午各组均皮下和腹腔给予等量的环糊精和生理盐水后放入黑室训练.连续训练10 d后进行CPP测试并处死大鼠取脑组织采用放射免疫法测定大鼠不同脑区中亮氨酸脑啡肽(L-EK)的含量.结果:与对照组比较,吗啡组发生CPP效应,下丘脑、伏隔核和额叶皮质中的L-EK水平显著降低(P<0.05或P<0.01);与吗啡组比较,孕酮+吗啡组CPP效应受到抑制,上述位置中L-EK水平显著升高(P<0.05或P<0.01),而海马和中脑内L-EK水平未见显著性变化.结论:孕酮可以有效抑制吗啡CPP效应,其机制可能与其逆转吗啡诱导的相关脑区中的L-EK水平的变化有关.
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亮氨酸脑啡肽、胆囊收缩素在海洛因戒断、复吸大鼠脑VTA、NAc区神经元的表达
目的:观察海洛因戒断、复吸大鼠脑VTA、NAc内亮氨酸脑啡肽(leucine-enkephalin,Leu-Enk)和胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)的变化,探讨CCK和内源性阿片肽在海洛因戒断、脱毒和复吸过程中的作用及其相互关系.方法:正常雄性SD大鼠63只,随机分为实验组、盐水对照组和正常对照组.实验组大鼠又分海洛因戒断组、美沙酮脱毒组和海洛因复吸组.取实验各组及对照组大鼠脑组织,定位VTA和NAc,用免疫组化SABC法显示VTA,NAc区Leu-Enk,CCK阳性细胞并用图像分析法测定平均光密度值.结果:(1)Leu-Enk在实验各组大鼠VTA和NAc内的表达与对照组比较均显著降低(P＜0.05).(2)与对照组比较,海洛因戒断、复吸组大鼠VTA和NAc中CCK阳性细胞免疫反应增强,差异有显著性(P＜0.05);经美沙酮脱毒后恢复正常.结论:海洛因戒断造成的机体应激及阿片类药物均抑制了VTA和NAc中Leu-Enk的分泌;CCK分泌增加,参与了对脑神经的保护.
