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Wnt-1/β-catenin通路在亚硒酸钠抑制人增生性瘢痕成纤维细胞体外增殖过程中表达研究
目的:研究Wnt-1/β-catenin信号通路在亚硒酸钠抑制人增生性瘢痕(Hypertrophic scar,HS)成纤维细胞(Fibroblasts,FB)体外增殖的过程中的作用.方法:培养HSFB,设置试验组与对照组,试验组分为5组(A、B、C、D、E组),分别加入等量含2.5、5、10、20、40μmol/L浓度的亚硒酸钠10%胎牛血清的培养基,对照组加入等量的10%胎牛血清培养基(即0μmol/L浓度的亚硒酸钠),在24 h后进行细胞免疫组化检测Wnt-1和β-catenin蛋白在不同浓度亚硒酸钠的作用下在FB表达情况.结果:细胞免疫组化显示亚硒酸钠在0~40μmol/L,随着浓度的递增,FB内Wnt-1和β-catenin表达的阳性细胞数逐渐减少(P<0.05).在未加入亚硒酸钠培养的HSFB中Wnt-1和β-catenin蛋白呈现强阳性表达.结论:亚硒酸钠在抑制HSFB的增殖过程中,对Wnt-1/β-catenin信号通路的抑制起到关键性的作用.
关键词: Wnt-1/β-catenin通路 亚硒酸钠 人增生性瘢痕 成纤维细胞 -
苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的体外抑制作用
组织损伤修复是人体自我保护的一个正常病理过程,而过度修复则会出现组织纤维化,影响组织、器官的正常功能,人增生性瘢痕是创伤过度修复的异常结果.苦参碱(matrine,Mat)广泛存在于豆科植物苦参、苦豆子及广豆根中,近年研究发现其具有较强的抗组织纤维化作用[1],目前关于Mat对人增生性瘢痕成纤维细胞(下文简称为成纤维细胞)作用的报道较少.本实验以成纤维细胞为靶细胞观察不同质量浓度的Mat在体外对该细胞增殖的影响,并对其抗纤维化作用机制进行初步研究.
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苦参碱对人增生性瘢痕治疗作用的临床研究
目的研究苦参碱(Matrine,Mat)对人增生性瘢痕治疗中成纤维细胞(fibroblast,FB)增生和凋亡的影响.方法以20例患者深Ⅱ度烧伤创面愈合后增生性瘢痕为研究对象,局部注射Mat后,利用DNA末端标记技术(TdT-mediated dUTP nick-end labeling method,TUNEL),检测其FB的凋亡数量及其标记指数;利用免疫组织化学法检测其FB的增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达和其标记指数.结果增生性瘢痕局部注射Mat后与自身未经Mat治疗的增生性瘢痕对照组比,前者其FB凋亡数量明显增加,凋亡指数14d分别为0.32和0.07,28d分别为0.54和0.11;治疗组PCNA表达明显弱于对照组,PCNA标记指数14d分别为0.28和0.5,28d分别为0.54和0.75.结论Mat明显增加人增生性瘢痕FB的凋亡数量,降低其增殖活性,促进增生性瘢痕FB凋亡,使增生性瘢痕尽早地趋于非增生状态.
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CTGF刺激人增生性瘢痕成纤维细胞STATs蛋白活化的状况
目的:探讨CTGF刺激人增生性瘢痕成纤维细胞STATs蛋白活化的情况.方法:原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,将其分为:①对照组:人增生性瘢痕成纤维细胞组;②增生性瘢痕成纤维细胞外源性重组CTGF刺激组.取0min、5min、10min、20min、30min、45min、60min、90min八个时相点,分别采用MTT检测细胞增殖,WeStern-blot检测各组之间a-平滑肌肌动蛋白(a-smoothmuscle actin,a-SMA)的变化趋势以及各时相点STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5、STAT6蛋白活化(磷酸化)情况.结果:在确定成纤维细胞增殖以及a-SMA表达变化趋势以②-①组顺序递减的前提下(P<0.05),用Western-blot观测两组STATs蛋白活化情况,发现:STAT1蛋白磷酸化水平以②-①组顺序递减(P<0.01);STAT2-6均有不同程度的磷酸化,但不以②-①组顺序递减.结论:STAT1可能在CTGF促进人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和分化过程中可能发挥着重要作用,以上研究结果为抑制瘢痕纤维化及挛缩提供了新的研究方向.
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整合素连接激酶对人瘢痕成纤维细胞中创面收缩相关因子mRNA表达的影响
创面愈合后瘢痕形成及挛缩可致各种畸形,造成严重功能障碍.创面收缩主要缘于Fb与胶原以及ECM之间的相互作用[1],创面愈合后这种作用持续存在,导致瘢痕挛缩.整合素连接激酶( integrin-linked kinase,ILK)通过整合素β1通路促进烧伤创面Fb增生,从而加速创面愈合[2].Fb内的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fn)和Ⅰ型胶原等与细胞增殖、分化、表型改变等生物学行为有密切关系,在瘢痕形成过程中亦然[3-5].本研究拟观察ILK对人增生性瘢痕Fb中Fn、α-SMA和Ⅰ型胶原以及细胞超微结构的影响,并探讨其可能机制.1 材料与方法1.1 主要试剂与设备小牛血清(FCS)及DMEM培养液购自美国Gibco公司.
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小分子RNA干扰Smad3基因对人增生性瘢痕的作用
近年来对于增生性瘢痕形成机制的研究较多,TGF-β信号转导的中介分子Smad家族,位于TGF-β家族配体-受体信号转导系统的下游,通过调控核内靶基因的转录控制创面愈合和病理性瘢痕形成[1-2].本研究中,笔者利用小分子RNA干扰技术特异性抑制Smad 3基因的表达,观察其对瘢痕增生和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成等的影响,为进一步临床应用基因治疗瘢痕提供理论依据和实验基础.
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丹参总酮对体外模拟人增生性瘢痕的作用
增生性瘢痕是创伤及深度烧伤后常见的病理性愈合现象.寻求有效防治增生性瘢痕的方法是创伤修复领域的重要课题.中药治疗增生性瘢痕历史悠久[1],其毒性作用及不良反应轻微,但机制不明.丹参广泛用于心血管疾病、皮肤病及胶原代谢疾病等领域,也常用于治疗或预防增生性瘢痕及瘢痕疙瘩,有文献报道其疗效显著[2].本研究中,笔者选择丹参总酮为研究用药,将其用于体外人增生性瘢痕三维模型,观察其抑制瘢痕增生的效果,以期为临床上防治增生性瘢痕提供实验依据.