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HERG错义突变V630A和N633S引起QT延长综合征的分子机制

佘海茹;滕思勇;浦介麟;尚正录;惠汝太

摘要: 目的HERG基因突变可引起遗传性QT延长综合征(longQT syndroms,LQTS).研究探讨HERG通道孔区的错义突变导致LQTS的分子机制.方法采用Megaprimer方法制备HERGV630A、N633S突变体,并亚克隆到pSP64和pcDNA 3.1表达载体.用T7 RNA聚合酶体外合成cRNA,经Ribogreen荧光定量后,将相应的cRNA注入卵母细胞,在18℃培养箱中培养3 d后,用标准双电极电压钳技术测量卵母细胞的表达电流.所有数据均用pCLAMP软件采集,并应用Kaleidagraph3.5和Igor软件进行数据处理.结果当V630A、N633S分别同HERG野生型在卵母细胞共同表达时,这两种突变体均具有明显的负显性抑制效应,其抑制效应达到50%~70%.同野生型HERG通道相比,这两种异源多聚体的失活显著加快,半失活电压负向偏移.结论该研究首次阐明了两个位于HERG通道孔区外口的错义突变V630A、N633S所引起的通道电生理学功能改变,从分子水平证明HERG通道孔区的错义突变与致命性心律失常的关系.

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