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成人骨髓间充质干细胞体外培养扩增的初步研究
目的:建立成人骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells , MSCs)体外培养和扩增的方法,探讨其生物学特性,建立稳定的 MSCs体外培养扩增体系.方法:取正常成人骨髓,用含 10%新生牛血清的 LG- DMEM培养液培养、扩增后,进行倒置显微镜观察,测定生长曲线,流式细胞仪行细胞表面抗原检测.结果:培养扩增获取的成人骨髓 MSCs形态均一,增殖能力强.所获得细胞 CD44表达阳性, CD19、 CD15、 CD45、 CD34、 CD38、 CD4、 CD8表达阴性.结论:所建立的分离和培养方法可获取骨髓黏附细胞中一组独特的细胞群,具有 MSCs的生物学特性.
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胎盘间充质干细胞治疗大鼠缺氧缺血性脑病的实验研究
目的:探讨胎盘间充质干细胞(PDMSCs)治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIBD)的效果及其机制.方法:Wistar大鼠随机分为对照组、HIBD组、HIBD+PDMSCs组和HIBD+成纤维细胞组.移植后14 d评估各组生长发育情况、神经功能,分别采用RT-PCR法、Western Blot法检测损伤侧海马组织的血红素加氧酶-1(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)的基因和蛋白表达.结果:HIBD+PDMSCs组脑萎缩、神经行为障碍均改善,且体重显著升高,与对照组比较有明显差(P ＜ 0.05).HIBD组HO-1和Nrf2的基因和蛋白表达均高于对照组(P ＜ 0.05),HIBD+PDMSCs组二者含量均较HIBD组明显增加(P ＜ 0.05),HIBD+成纤维细胞组的各项指标与HIBD+PDMSCs组相比均有统计学差异(P ＜ 0.05).结论:PDMSCs移植能够改善新生HIBD大鼠的神经功能和发育,可能是通过部分上调Nrf2/ARE/HO-1通路发挥作用.
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骨髓间充质干细胞对IgA肾病大鼠TGF-β1和MCP-1的影响
目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对于IgA肾病大鼠肾脏中细胞因子TGF-β1和MCP-1的影响.方法:SD大鼠分为MSCs注射组、生理盐水组及正常对照组.前两组以牛血清白蛋白(BSA)+葡萄球菌肠毒素B(SEB)+皮下注射四氯化碳(CCL4)法建立IgA肾病模型.体外连续培养SD大鼠BMSCs.用ELISA法检测尿中的TGF-β1、MCP-1水平,用RT-PCR技术检测肾组织中二者的表达情况,并通过免疫组化法观察两种细胞因子在肾组织中的蛋白表达.结果:移植后1周,检测MSCs组大鼠尿上清细胞因子TGF-β1(5.38±0.99) ng/mL,MCP-1(287.67±17.41)pg/mL; NS组TGF-β1(7.84±0.98) ng/mL,MCP-1(359±10.49)pg/mL.两组相比P＜ 0.05.移植后4周,MSCs组TGF-β1(2.78±0.35)ng/mL,MCP-1(197.83±15.16)pg/mL;NS组TGF-β1(9.18±0.64)ng/mL,MCP-1 (403.5±19.27)pg/mL.两组相比,P＜0.05.且两种细胞因子在两组大鼠肾免疫组化蛋白表达及肾组织中mRNA表达上比较均有统计学意义.结论:静脉输注BMSCs后肾脏内的TGF-β1、MCP-1明显减少,且有延续效应,可能是MSCs修复IgA肾病的重要机制之一.
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蜕皮甾酮联合骨髓间充质干细胞促进烫伤皮肤愈合的实验研究
目的:探讨蜕皮甾酮(EDS)联合骨髓间充质干细胞(MSCs)促进家兔烫伤皮肤愈合的作用及可能的机制.方法:家兔18只,每只4个创面,随机标记设为空白对照组(A组)、EDS组(B组)、MSCs(C组)、EDS+MSCs(D组).烫伤后5、10、15 d各处死6只家兔,计算创面愈合率,观察组织病理学指标.结果:烫伤后5 d,B组创面愈合率显著高于A组,B、D组炎性细胞浸润度显著低于A组.烫伤后10 d,各组创面愈合率、组织病理学评分、炎性细胞浸润度之间差异均无显著性.烫伤后15 d,B、C、D组创面愈合率、组织病理学评分均高于A组.结论:EDS联合MSCs对家兔烫伤皮肤有促愈合作用.
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小肠黏膜下层复合骨髓间充质干细胞修复兔骨缺损的实验研究
目的:探讨猪小肠黏膜下层(SIS)复合兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)在异体兔体内成骨的可行性.方法:选2月龄新西兰大白兔12只,制备双侧桡骨1.5 cm标准骨缺损模型.左侧植入复合BMSCs的SIS(实验组):右侧植入单纯SIS(对照组).术后观察动物一般情况,4周后摄双侧桡骨X线片,并截取骨缺损中段标本行HE染色观察.结果:两组动物术后饮食及日常活动基本正常;伤口无红肿、溢脓.X线片观察,实验组骨缺损处有长条状新生骨形成,密度与正常骨相同,新生骨桥接骨缺损;对照组骨缺损无骨形成征象,骨缺损处密度与周围软组织影相近.组织学观察:实验组骨缺损处有新骨形成,骨组织中可见血管腔及不规则髓腔样结构:对照组骨缺损处仅为胶原瘢痕组织,无骨组织形成.结论:SIS复合BMSCs在同种异体体内修复骨缺损是可行的.
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骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞
目的:探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth ractor,HGF)作为诱导剂,体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,Mscs)分化为心肌细胞的作用.方法:分离培养大鼠MSCs,在第4代MSCs中添加HGF(20 ng/mL)对其进行诱导分化,观察细胞形态学的变化,采用荧光免疫组织化学及RT-PCR方法对分化细胞进行鉴定.结果:大鼠MSCs贴壁呈集落生长,有成纤维细胞样外观.诱导后细胞呈梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成,未观察到转化细胞的自主搏动.Troponin T及Connexin43的表达呈阳性,并可见清晰肌小节.RT-PCR检测MLC-2A、MLC-2V、α-MHc、β-Actin mRNA表达阳性.结论:大鼠MSCs体外在HGF诱导下可定向分化为心肌样细胞.
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超顺磁性氧化铁标记对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
目的:探讨超顺磁性氧化铁(SPIO)标记骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法、效果及其对MSCs生物学特性的影响.方法:用密度梯度离心加贴壁培养法分离、扩增大鼠MSCs.取第4代MSCs,用终浓度为25μg Fe/mL的SPIO-多聚赖氨酸(PLL)复合物进行标记.标记后动态观察MSCs的形态改变,用台盼蓝染色检测细胞的活力,MTT比色法检测细胞增殖能力,普鲁士蓝铁染色证实细胞内铁,分光光度法测定细胞铁含量.结果:MSCs的SPIO-PLL标记阳性率达100%,标记后的MSCs细胞内铁含量为(18.38±2.80)pg/cell,是未标记细胞的76倍.标记细胞的形态、活力、生长增殖能力与未标记细胞相比无明显改变.结论:PLL介导SPIO标记MSCs方法简便、效率高,不影响MSCs的生物学特性,可用于MSCs的标记和示踪.
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超顺磁性氧化铁纳米粒子标记心脏内骨髓间充质干细胞及活体磁共振示踪的实验研究
目的:探讨超顺磁性氧化铁纳米粒子(superparamaganetic iron oxide nanoparticles.SPIO)能否作为示踪剂在磁共振下对移植入梗死边缘区的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)进行体内追踪.方法:体外培养MSCs用SPIO标记后普鲁士蓝染色观察标记率及MTT法观察其对MSCs活性的影响.建立大鼠急性心肌梗死模型,分磁性细胞移植组、非磁性细胞移植组、纳米粒子移植组,分别于梗死心肌边缘区多点注射SPIO标记MSCs、未标记MSCs、SPIO.术后3、7、14、21 d行MRI检查后处死大鼠,进行组织学检查.结果:SPIO标记MSCs阳性率达95%,对MSCs的活性和分化无明显影响.磁性细胞移植组术后3、7、14 d在MR T2像显示的低信号注射点为65.6%、56.3%、18.8%,术后21 d不能显示注射点.随时间的延长,低信号区域边界模糊,范围扩大,信号对比度降低.结论:SPIO可以作为示踪剂在磁共振下对移植入大鼠梗死边缘区的MSCs进行体内追踪,该方法能够作为一种无创的手段来示踪体内千细胞的迁移及转归.
关键词： 骨髓细胞 间质干细胞 磁共振成像 超顺磁性氧化铁纳米粒子 示踪 -
兔骨髓间充质干细胞生物学特性的实验研究
目的:体外优化获取兔骨髓间充质干细胞并对其进行纯化、扩增,同时对其生物学特性进行研究,获得足量细胞用于材料细胞的相容性研究.方法:抽取新西兰大白兔骨髓,采用密度梯度离心法和贴壁筛选法相结合进行分离培养,观察其增殖和生长特性,绘制生长曲线,测定贴壁率.结果:经密度梯度离心法和贴壁筛选法相结合得到的骨髓间充质干细胞纯度高,性状稳定,生长曲线相似,传代后第12小时贴壁率高达90%;Giemsa染色光镜观察免骨髓间充质干细胞为单核细胞,呈梭形或不规则长多边形.结论:建立兔骨髓间充质干细胞体外分离培养的适条件,骨髓间充质干细胞增殖能力强,可作为材料细胞相容性研究的受试细胞,并可作为组织工程的种子细胞.
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血管平滑肌细胞培养液和膀胱匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞的诱导分化
目的:探讨已经分化成熟的平滑肌细胞的培养液和膀胱匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导分化的影响,期望为组织工程膀胱提供种子细胞.方法:分离得到的大鼠MSCs和血管平滑肌细胞在体外扩增、传代.第4代MSCs用10%碱性成纤维生长因子预诱导1d后加入已分化成熟的血管平滑肌细胞的培养液和低糖培养基(1:1)诱导培养2d,然后加入膀胱匀浆上清进行诱导分化7d.以来进行诱导的MSCs为阴性对照组,分化成熟的平滑肌细胞为阳性对照组,观察干细胞形态学的变化并运用免疫细胞化学检测特异性α-平滑肌肌动蛋白抗体的表达.结果:MSCs经诱导分化的细胞形态呈梭形平滑肌样,融合后形成峰谷状排列,并表达平滑肌特异性蛋白标志物α-肌动蛋白.诱导分化率为(25.6±3.5)%,与阴性和阳性对照组相比差异有显著性(P<0.05).结论:MSCs经体外诱导可分化为平滑肌样细胞,可作为膀胱修复的种子细胞进一步研究.
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骨髓间质干细胞体外分化软骨细胞的实验研究
目的:应用转化型生长因子TGF-β1,体外诱导骨髓间质干细胞(MSCs)向成软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性.方法:由大鼠骨髓中分离出MSCs,体外传代培养,取第3代细胞通过TGF-β1、地塞米松和维生素C诱导向软骨细胞分化.诱导后14 d观察细胞形态变化,进行阿辛蓝染色检测软骨基质的分泌、免疫组化检测细胞Ⅱ型胶原的表达,采用Western-blot和RT-PCR检测诱导前后成软骨相关的SOX9、蛋白聚糖与Ⅱ型胶原的表达.结果:诱导后阿辛蓝染色示糖胺聚糖均匀分布于基质中,免疫组化染色示基质中Ⅱ型胶原表达阳性.RT-PCR检测示成软骨相关的SOX9、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达阳性.Western-blot印迹检测示细胞诱导后Ⅱ型胶原蛋白表达阳性.结论:MSCs在特定培养液的诱导下可向软骨细胞表型分化,并能分泌软骨细胞特异性基质,可成为软骨组织工程理想的种子细胞来源.
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人脐带血间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的实验研究
目的:研究人脐带血间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的可行性.方法:由人脐静脉获得间充质干细胞,纯化培养后用不同浓度的 5-氮杂胞苷( 5-azacytidine)诱导,透射电镜、免疫组化及 RT-PCR鉴定诱导后细胞.结果:经 5-氮杂胞苷诱导后的脐带血间充质干细胞在透射电镜下观察到细胞内有明显的肌丝,横纹样结构形成,核呈卵圆形,位于细胞中央位置,胞质中可见富集的糖原颗粒及线粒体结构.免疫组化可见肌钙蛋白Ⅰ 染色阳性. RT-PCR方法显示能表达缝隙连接膜通道蛋白 Connexin-43基因.结论:人脐带血间充质干细胞可在体外经 5-氮杂胞苷诱导分化为具有典型结构的心肌细胞.
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鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化肝干细胞的研究
目的:探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)定向分化为肝干细胞的可行性.方法:采用全骨髓培养法体外培养rBMSCs,设实验组及对照组,应用肝细胞生长因子(HGF)诱导分化,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,免疫组化检测CK18、CK19及波形蛋白Vimentin;ELASA等方法检测甲胎蛋白,白蛋白及碱性磷酸酶.结果:rBMSCs经体外培养诱导后呈多角形、卵圆形改变,白蛋白,AFP,CK18、CK19表达阳性,碱性磷酸酶出现明显改变.结论:rBMSCs体外经HGF诱导下,具有向肝干细胞分化的能力,可成为肝组织工程主要种子细胞来源.
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胃肠道间质瘤的研究进展概述
胃肠道间质瘤(Gastrointestinal stromal tumors,GIST)是消化道常见的间叶源性肿瘤.1983年Mazur首先提出GIST的概念.随着科学技术的发展,1999年人们认识到GIST起源于肠道间质干细胞-Cajal(interstitial cells of Cajal,ICC).
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骨髓间充质干细胞的二维及三维培养实验研究
目的 在二维、三维培养体系中探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)分裂、增殖的特性,为构建组织工程提供足够的种子细胞.方法 密度梯度离心结合全骨髓贴壁法培养BMSCs,采用流式细胞仪检测细胞表面标志;将壳聚糖、β-甘油磷酸钠及羟乙基纤维素按比例混合制备三维支架.选取第3代骨髓间充质干细胞分别在传统二维培养体系以及在三维支架上接种培养2周.倒置相差显微镜下连续观察细胞形态变化的特征,收集细胞支架复合物行苏木精-伊红染色,并通过扫描电镜观察BMSCs的超微结构.结果 传统二维条件下BMSCs培养2d,贴壁细胞开始展开,呈长梭形,3d后细胞以集落样方式分布,出现许多圆、亮的细胞,呈“放气球样”黏附于表面.在三维培养体系中,扫描电镜可观察BMSCs呈球形,细胞贴附于支架纤维上生长;HE染色可见大量圆形的细胞沿着支架纤维生长.结论 在三维培养体系中,支架、胶冻状物质、BMSCs、相关的细胞因子共同构成三维培养体系的微环境,与BMSCs共培养具良好的组织相容性,BMSCs表现出活跃的增殖能力.
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人脐血间充质干细胞分离培养及向成骨细胞分化的研究
目的 拟建立一套较为简便、有效和实用的人脐血间充质干细胞(MSCs)体外分离培养体系,探讨其向成骨细胞分化的可行性.方法 由人脐静脉血获得MSCs,纯化培养后用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的培养液诱导,通过倒置显微镜观察、碱性磷酸酶染色检测诱导后细胞.结果 来源于脐血的单个核细胞经体外培养贴壁后出现形态学上可见间充质样的细胞,间充质样细胞为类似成纤维细胞样的细胞形态.诱导培养的细胞碱性磷酸酶染色呈阳性.结论 人脐血MSCs经合理的体外诱导培养后,可以分化为成骨细胞.
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体外诱导人脐带血间充质干细胞为软骨细胞的初步研究
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)体外诱导人脐带血间充质干细胞(MSCs)向软骨细胞分化的可能性.方法 由人脐静脉获得MSCs,纯化培养后用含100ng/ml IGF-1的培养基诱导,扫描电镜鉴定诱导后细胞.结果 来源于脐血的单个核细胞经体外培养贴壁后出现形态学上可见间充质样的细胞,间充质样细胞为类似成纤维样的细胞形态.IGF-1诱导16天后,MSCs开始呈现软骨细胞特点.结论 人脐带血MSCs可在体外经IGF-1诱导为软骨细胞.
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糖尿病肾病的干细胞治疗研究进展
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病严重的慢性并发症之一,也是糖尿病患者肾衰竭的主要原因.目前对于DN的治疗缺乏有效手段,常用方法有改变生活方式、控制血糖、改善血压、纠正血脂紊乱和透析治疗,有时也应用中药治疗降低尿蛋白,但这些治疗效果并不显著.有条件者可行肾脏移植,但费用昂贵,给家庭、社会带来沉重的经济负担.近年来,随着干细胞技术的发展,干细胞移植已成为治疗许多疾病的有效手段,以干细胞为基础的再生医学已尝试应用于DN的治疗.本文就近些年关于DN的干细胞治疗研究进展进行综述.
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人脐带间充质干细胞不同培养方案的比较与优化
目的:目前人脐带间充质干细胞已广泛的应用于各种基础研究以及治疗疾病的临床实验,但目前各个实验室所选取的培养方案各异,培养效果并不稳定.本实验旨在选择一种稳定可靠的人脐带间充质干细胞培养方案.方法:从脐带中分离间充质干细胞,采用组织贴壁法将其培养于8组不同配方的培养基中,通过比较间充质干细胞从组织中游出的时间,生长状态,细胞数量,表面抗原的表达等,选出较优的人脐带间充质干细胞培养方案.结果:从细胞生长状态比较, 达优MSC基础培养基-血清替代物组(F组)、X-VIVOTM15-胎牛血清组(B组)、X-VIVOTM15-胎牛血清+血清替代物组(C组)、迈键医药的干细胞无血清基础培养基-无血清替代物组(G组)所培养的间充质干细胞从脐带游出时间较早且细胞融合率达到80%~90%时间较其他组短;达优MSC基础培养基-血清替代物组人脐带间充质干细胞生长增殖快(P<0.05).选取生长较快的B、C、F、G组进行免疫表型分析,发现达优MSC基础培养基-血清替代物组(F组)所培养的间充质干细胞表面抗原CD73,CD90表达均在90%以上,而其他组CD90和CD73的表达都在90%以下(P<0.05),各组造血细胞表面抗原CD34,CD45表达均呈低表达.结论:达优MSC基础培养基-血清替代物组为较优的人脐带间充质干细胞培养方案.
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嗅鞘细胞和间质干细胞用于治疗脊髓损伤的研究进展
脊髓损伤(SCI)的临床治疗主要以手术结合免疫治疗为主,但是往往不能收到良好的效果.干细胞能发挥神经保护和促进神经再生的特点,因而近年干细胞治疗SCI成为研究的热点之一,并在基础和临床研究中均获取得一定的进展.本文就嗅鞘细胞和间质干细胞用于治疗SCI的研究做一简要综述.
