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2型糖尿病性腹泻与肠神经系统病变关系的探讨
目的 探讨2型糖尿病患者腹泻与肠神经系统病变的关系.方法 选取因2型糖尿病性腹泻而行结肠镜检查的患者14例为糖尿病腹泻组,以其他原因进行结肠镜检查而结肠正常的非糖尿病患者10例为对照组.电镜下观察肠黏膜神经丛超微结构的变化,并结合蛋白基因产物9.5(PGP9.5)的免疫组织化学染色方法,观察肠神经丛形态、结构改变.结果 电镜检查显示,糖尿病腹泻组结肠黏膜层神经纤维束轴索腔空化、雪旺细胞胞质基质呈低电子密度、无髓神经纤维外基膜增厚等改变；对照组则无明显改变.应用PGP9.5标记结肠黏膜层神经纤维后,糖尿病组肠黏膜PGP9.5阳性面积占上皮间质总面积的平均百分比显著高于对照组[(4.13±1.12)％vs(2.18±1.01)％,P＜0.01)].结论 2型糖尿病腹泻可能与肠黏膜神经丛超微结构的变化有关；肠黏膜神经丛内肠神经纤维数量的改变可能参与了2型糖尿病患者腹泻症状的产生过程.
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不同类型无神经节细胞巨结肠乳鼠模型的建立与鉴定
目的 建立不同类型无神经节细胞巨结肠乳鼠实验动物模型,为进一步研究该病的发病机制及相关分子生物学机制提供可靠模型.方法 将6～8日龄SD大鼠4窝(每窝10只乳鼠)随机分为实验组(包括短段型组、常见型组、长段型组)及对照组.对照组乳鼠经肛门推注9 g/L盐水,实验组分别采用经肛门置入不同长度的导管,推注不同剂量、不同浓度苯扎氯铵(BAC)的方法进行处理.分别于处理后2、4、6、8周行大体观察,取全段结肠及直肠,固定、包埋、切片后行HE染色,通过免疫组织化学染色检测蛋白基因产物9.5(PGP9.5)的表达以鉴定模型建立成功与否,确定病变累及肠管的范围.通过免疫荧光技术观察狭窄肠段与相应部位正常肠段c-kit标记的Cajal间质细胞(ICC)的表达.结果 实验组大鼠处理后4周逐渐出现腹胀,粪便颗粒变小.8周处死后解剖发现肠管出现痉挛狭窄,狭窄近端粪便潴留；组织学检查可见处理段肠管肠神经节细胞基本消失,且不同的实验处理方法造成病变累及的肠段明显不同.对照组无上述改变.与对照组相比,实验组c-kit标志的ICC在狭窄段的表达明显减少.结论 经肛门灌注不同浓度、不同剂量BAC的方法成功建立了短段型、常见型、长段型3种类型无神经节细胞巨结肠的乳鼠实验模型,该方法建立的模型稳定、可重复性好,为深入研究先天性巨结肠的发病机制提供了一个可靠的模型基础.
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半夏泻心汤对糖尿病大鼠小肠运动的影响及其作用机制研究
目的 初步研究半夏泻心汤对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠小肠运动的影响及其作用机制.方法 将SD大鼠分为对照组、DM组、DM+半夏泻心汤组(DM+ BX组)、DM+多潘立酮组(DM+ Dom组).半固体营养糊灌胃测定小肠推进率,免疫组化和图像分析对突触素(Syn)、蛋白基因产物9.5 (PGP9.5)和c-kit的表达进行比较.结果 DM+ BX组、DM+ Dom组的小肠推进率较DM组明显提高(P＜0.05),但仍低于对照组(P＜0.05).DM+ BX组、DM+ Dom组的Syn、PGP9.5、c-Kit阳性产物面积和平均光密度值与DM模型组相比均有提升.结论 半夏泻心汤可能对受损的DM大鼠小肠肌间神经丛及ICCs有部分恢复作用从而改善糖尿病大鼠的小肠动力障碍.
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便塞通合剂对便秘模型大鼠PGP9.5及SS在结肠组织中表达的影响
[目的]观察便塞通合剂对实验性便秘大鼠PGP9.5、SS的影响及其效果差异.[方法]将80只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、麻仁丸组、便塞通合剂组,每组20只,采用改良复方地芬诺酯法制作大鼠实验性便秘模型,除空白对照组和模型组不进行药物治疗外,麻仁丸组和便塞通合剂组分别给予麻仁丸0.3 g· kg-1·d-1灌胃,便塞通合剂7.5 g· kg-1·d-1灌胃.14 d后处死全部大鼠,观察大鼠结肠组织病理学改变,采用免疫组织化学法检测结肠组织中PGP9.5、SS的表达水平.[结果]HE染色空白对照组大鼠结肠黏膜正常,模型组大鼠结肠黏膜有炎性细胞浸润,肌间神经丛神经细胞减少,可见空泡变性.通塞便合剂治疗后,近端结肠黏膜未见炎性细胞浸润,肌间神经纤维未见空泡变性.与对照组比较,模型组SS表达显著增加(P＜0.05),PGP9.5表达显著减少(P＜0.05);麻仁丸组和便塞通组均表现为下调SS的高表达状态,明显低于模型组(P＜0.05),上调PGP9.5,明显高于模型组(P＜0.05);而便塞通合剂组对其表达影响明显优于麻仁丸组(P＜0.05).[结论]便塞通合剂对便秘大鼠有较好的疗效,主要表现在控制黏膜炎症反应、降低组织中SS的表达水平,上调PGP9.5表达.
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直肠黏膜活检组织行钙视网膜蛋白、S100及PGP9.5联合染色对先天性巨结肠症的诊断价值
目的 评估直肠黏膜负压吸引活检组织行钙视网膜蛋白(CR)、S100蛋白(S100)及蛋白基因产物9.5 (PGP9.5)染色诊断先天性巨结肠症(HD)的准确性.方法 2014年6月至2017年1月,华中科技大学同济医学院附属协和医院就诊的疑似HD患儿318例,在进行详细的病史调查及体检后行直肠黏膜负压吸引活检,取得的标本进行CR、S100、PGP9.5免疫组织化学染色,观察是否有神经节细胞及粗大增生的神经纤维来诊断HD,并与术后病理检查结果比较,评估其诊断HD的准确性.结果 318例患者进行该诊断方法,其中219(69％)例显示有神经节细胞,99例(31％)缺乏神经节细胞,在这99例中,S-100蛋白及PGP9.5染色分别显示有92％和93％的患儿含有黏膜下粗大的神经纤维.132例患者终行结肠切除术,其中,99例术后病检证实了HD.该方法的准确性和特异性分别为97.0％ [95％可信区间(CI):88.0％ ～99.0％]和100.0％ (95％ CI:97.0％～100.0％),阳性预测值为94.3％ (95％ CI:87.0％ ～ 99.0％),阴性预测值为99.1％ (95％ CI:95.0％～100.0％).结论 CR、S-100和PGP9.5染色之间能通过优势互补,提高直肠黏膜负压吸引活检诊断HD的精准性.
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泛素羧基末端水解酶-1的研究进展
泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1),又名蛋白基因产物9.5,是泛素.蛋白酶体系统中的重要成员,它除了去泛素化作用外,还具有泛素连接酶和稳定细胞内泛素单体的功能.UCH-L1通过泛素相关途径调节细胞的增生、分化和凋亡,并可能参与与之相关的神经退行性疾病、肿瘤等的发生发展过程.近UCH-L1的特异性底物的发现为探讨其作用的具体机制开辟了新的途径.
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神经纤维在子宫内膜异位症患者在位及异立内膜的分布
目的 探讨子宫内膜异位症患者在位及异位内膜神经纤维的表达,并观察其与内异症疼痛症状的关系.方法 选取2013年4月至2014年5月就诊于深圳市妇幼保健院,并通过腹腔镜手术确诊的子宫内膜异位症患者55例作为患病组,根据VAS评分分为疼痛组(38例)和无痛组(17例),同期因子宫肌瘤或CINⅢ级行全子宫切除并否认有痛经史的患者30例作为对照组,通过蛋白基因产物9.5免疫组化法比较内异症患者的在位内膜、异位内膜及对照组患者的在位内膜中神经纤维的表达.结果 子宫内膜异位症患者的在位及异位内膜的神经纤维表达均高于对照组(t=9.62,P＜0.05;t=8.92,P＜0.05),疼痛组在位及异位内膜的神经纤维表达均高于无痛组(t=8.09,P＜0.05;t=4.96,P＜0.05),并且异位内膜中神经纤维的表达与痛经的严重程度有关(r=0.546,P=0.000).结论 神经纤维在子宫内膜异位症患者在位及异位内膜的表达增高,并与痛经的严重程度有一定的相关性.
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蛋白基因产物9．5与宫颈癌临床病理表现的关系及其作用机制的实验研究
目的：研究蛋白基因产物9．5（PGP9．5）在宫颈癌病理标本中的表达与宫颈癌临床病理特征及预后的关系，并初步探讨利用PGP9．5－siRNA靶向治疗宫颈癌的潜在价值。方法：回顾性分析2008年1月～2015年6月在天津市第五中心医院妇科及天津市中心妇产科医院接受手术治疗并经病理确诊的180例宫颈癌患者临床资料。所有患者宫颈癌病理标本制作病理切片并进行SP法免疫组化染色。以PGP9．5染色后评分为依据将患者分为PGP9．5高表达组和PGP9．5低表达组。观察2组患者年龄、HPV感染、病理分级、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度、累及脉管和临床分期等临床病理学参数的关系。采用Kaplan－Meier法和log－rank检验进行生存分析。采用PGP9．5－siRNA、NC－siRNA、PGP9．5真核表达质粒和对照空质粒按照脂质体载体试剂说明书转染SiHa细胞，设立si－PGP9．5组、NC组、PGP9．5组和vector组。同时设立SiHa细胞空白对照（ control）组。分别采用Western blot 实验、平板克隆形成实验和Transwell实验分析5组细胞PGP9．5蛋白的表达水平、克隆形成能力和侵袭能力。结果：2组患者病理分级、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度、累及脉管和临床分期等临床病理参数与PGP9．5表达水平有关。 PGP9．5高表达组患者3、5年总体生存率明显低于PGP9．5低表达组患者。与control组相比，si－PGP9．5组Si－Ha细胞中PGP9．5蛋白的表达量明显降低，克隆形成数量明显减少，过膜细胞数量明显减少；PGP9．5组SiHa细胞中PGP9．5蛋白的表达量明显升高，克隆形成数量明显增多，过膜细胞数量明显增加。结论： PGP9．5蛋白高表达预示宫颈癌患者预后不良，可能成为预测宫颈癌患者预后的良好指标，对其表达进行抑制可能实现对宫颈癌的有效基因治疗。
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Calretinin和PGP9.5在先天性巨结肠诊断中的应用
目的:探讨Calretinin和PGP9.5在先天性巨结肠(HD)临床病理诊断中的应用.方法:将2015年1月至2017年12月在广东省妇幼保健院确诊的48例HD患者和20例非HD患者作为研究对象,分别在扩张段HD和狭窄段HD、非HD组织中行Calretinin和PGP9.5免疫组化染色.结果:48例HD扩张段中,40例可见成熟神经节细胞,8例见不成熟神经节细胞,Calretinin和PGP9.5均表达阳性.HD狭窄段Calretinin阳性1例,阴性47例;PGP9.5显示增粗神经纤维46例,无增粗2例.20例非HD中Calretinin表达阳性19例,1例神经纤维阳性,未见神经节细胞;PGP9.5均呈阳性表达.狭窄段HD与非HD中Calretinin阳性率、PGP9.5标记的增粗神经纤维比较,差异有统计学意义(P<0.05).初始诊断灵敏度和特异度分别为95.65％(95％CI,0.84-0.99)和95％(95％CI,0.73-0.997).结论:病理形态学诊断联合Calretinin和PGP9.5检测对于HD的诊断和鉴别诊断更加准确.
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ret和ednrb在先天性巨结肠症及巨结肠类源病肠壁表达的研究
目的:通过探讨ret、ednrb基因在先天性巨结肠症(Hirschsprung disease,HD)及巨结肠类缘病(Hirschsprung allied disease,HAD)患者肠壁的表达分布情况,旨在进一步了解HD与HAD发病机制的异同,为HD与HAD的诊断及治疗提供新的研究方向.同时通过常规HE染色与免疫组化标记时HD与HAD诊断的比较,深入了解免疫组化标记技术在HD和HAD诊断中的临床价值.方法:复习巨结肠术后病例HE切片,结合先镜下肠壁的形态特征,初步诊断分组.应用蛋白基因产物9.5(Protein gene product 9.5,PGP9.5)和神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)免疫组化技术对经HE染色病理初步诊断为HD,HAD和不明确组的病变肠段再次诊断分组.HD肠段分别取狭窄段和扩张段与10例正常结肠行RET抗体、EDNRB抗体免疫组化染色,比较RET和EDNRB的染色结果和分布特点.结果:HE染色8例诊断不明确者,经免疫组化标记后诊断明确;RET在HD狭窄段中表达较HAD和正常对照组减少(P＜0.05);EDNRB在HD狭窄段中表达较HAD和正常对照组减少(P＜0.05);HD和HAD扩张段与正常组的RET与EDNRB表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:免疫组化染色有助于HD和HAD的诊断;RET和EDNRB在HD狭窄段中表达有异常,提示RET和EDNRB与HD的发生可能有关.
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人胃癌PGP9.5的表达及其临床意义
目的 研究蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)在人胃癌组织中的表达,并探讨其与胃肿瘤的发生、发展和侵袭、转移的关系.方法 采用免疫组织化学SP法和Western blot法检测80例胃癌及8例正常胃组织中PGP9.5的表达.结果 在80例胃癌组织中有56例(70.0%)表达PGP9.5,而正常胃上皮细胞中无PGP9.5表达;Western blot检测结果与免疫组化结果一致.SP法显示PGP9.5的表达和胃癌的浸润深度、分化程度及有无淋巴结转移有关(P＜0.05),与患者年龄、性别、胃癌的组织学类型及TNM分期无关(P＞0.05).结论 PGP9.5在胃癌侵袭及转移过程中可能发挥重要作用,检测PGP9.5表达可作为肿瘤组织侵袭胃的一个分子标志物.
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人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠压力性尿失禁
目的 探讨人脐带间充质干细胞(HUMSCs)移植治疗大鼠压力性尿失禁(SUI)的作用机制及有效性和可行性.方法 建立SUI大鼠模型,模型大鼠分为HUMSCs治疗组8只(A组,大鼠尿道周围注射HUMSCs约1×107个细胞)和实验对照组8只(B组,相同部位注射等量生理盐水),另取6只正常大鼠作为正常对照组(C组).建模后4周,将HUMSCs移植注射于大鼠尿道周围,在移植注射前1周及移植注射后6周分别测量所有大鼠大膀胱容量(MBC)和漏尿点压力(LPP);行免疫组织化学检查,分析大鼠尿道括约肌中结蛋白、重链肌球蛋白(MHC)和蛋白基因产物9.5 (PGP9.5)的表达.结果 HUMSCs治疗组大鼠MBC、LPP测量值均较移植治疗前明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01);与实验对照组的MBC、LPP测量值相比显著增加,差异有统计学意义(P＜0.01).免疫组织化学检查显示HUMSCs治疗组大鼠尿道括约肌中结蛋白、MHC、PGP9.5含量均较实验对照组明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HUMSCs移植治疗SUI大鼠有效、可行,HUMSCs通过修复损伤的大鼠尿道括约肌和周围神经来提高控尿功能.
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子宫内膜异位症病灶神经纤维分布的研究
目的:探讨子宫内膜异位症病灶中神经纤维分布的特点及与疼痛的相关性.方法:用免疫组化法检测不同内异症组织中有髓和无髓神经纤维的分布,分析不同内异症病灶神经数目的差异及这种差异性和疼痛症状及临床分期的相关性.结果:内异症腹膜和宫骶韧带病灶中无髓神经纤维数目高于正常腹膜(P＜0.05)和正常宫骶韧带组织(P＜0.05).卵巢内膜异位症囊肿壁中神经纤维无表达或仅少量表达.不同内异症组织中无髓神经纤维数目有明显差异:宫骶韧带内异症组织中无髓纤维数目明显高于腹膜内异症及卵巢内异症病灶.有髓神经纤维数目各组间比较无显著差异.不同内异症组织中无髓神经纤维数目与临床分期无相关性.结论:内异症组织中无髓神经纤维数目增加,并且不同内异症组织中无髓神经纤维的数目有显著差异,这种差异与盆腔疼痛有不同程度的相关性,而与临床分期无关,从神经解剖学机制方面解释了内异症疼痛为何与盆腔病灶分布密切相关的问题.
