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青蒿对鼻咽癌细胞CNE-2、5-8F生长的影响
目的 研究青蒿含药血清对鼻咽癌细胞系CNE-2、5-8F的生长的影响.方法 ⑴采用血清药理学的方法 提取中草药青蒿的含药血清;⑵采用MTT法检测青蒿含药血清对鼻咽癌CNE-2、5-8F细胞生长的影响.结果 MTT法显示青蒿含药血清对鼻咽癌CNE-2、5-8F细胞生长有抑制,但无剂量-效应关系和时间效应关系.结论 青蒿含药血清对CNE-2、5-8F细胞的生长有抑制作用,但不成时间-效应关系.
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抑制Polo样激酶1对鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2辐射敏感性的影响
目的 分析讨论Polo样激酶1(PLK1)抑制后对鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2辐射敏感性的具体影响.方法 30只荷瘤小鼠,随机分为对照组、观察1组和观察2组,各10只.对照组荷瘤小鼠不做任何处理,观察1组荷瘤小鼠采用放射治疗,观察2组荷瘤小鼠采用放射治疗.对比三组荷瘤小鼠Polo样激酶1和肿瘤生长情况,分析Polo样激酶1和肿瘤生长相关性.结果 观察2组Polo样激酶1(0.9±0.2)μg/ml和肿瘤生长(0.4±0.1)cm低于对照组的(2.5±0.4)μg/ml、(1.0±0.2)cm和观察1组的(1.4±0.5)μg/ml、(0.7±0.2)cm,差异有统计学意义(P<0.05).Polo样激酶1和肿瘤生长呈正相关(r=0.836,P<0.05).结论 采用剂量3 Gy/次,1次/3 d的放射治疗能显著降低小鼠Polo样激酶1水平,并限制肿瘤生长,并且可以发现肿瘤生长与Polo样激酶1呈正相关.
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白黎芦醇对鼻咽癌CNE-2细胞自噬的影响及机制
目的：观察白藜芦醇（RES）对鼻咽癌CNE-2细胞自噬活性及自噬流的影响，并探讨其作用机制。方法取人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2，分为对照组、RES干预组，对照组置于37℃培养箱中培养，不作处理；RES干预组加入40μmol/L RES，置37℃培养箱中培养。采用Western blot法检测2组自噬微管相关蛋白轻链3B（LC3B）、p62、Beclin-1及mTOR通路蛋白p-mTOR、p-S6表达水平，腺病毒GFP-mRFP-LC3荧光瞬时转染技术通过不同颜色斑点检测自噬流表达。结果（1）RES干预组LC3B蛋白表达水平明显高于对照组，p62蛋白表达水平低于对照组（均P＜0.05）。2组Beclin-1蛋白表达差异无统计学意义。（2）RES干预组p-mTOR和p-S6蛋白表达水平明显低于对照组（均P＜0.05）。（3）RES干预组的mRFP荧光点数（红点）多于对照组，GFP荧光点数（黄点）则少于对照组（均P＜0.05）。结论 RES能够促进鼻咽癌CNE-2细胞自噬流，其机制可能与促进mTOR信号通路中的相关蛋白表达有关。
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60Co分割放射对鼻咽癌CNE-2株细胞动力学改变
目的:研究高剂量60Coγ射线对鼻咽癌细胞株(CNE-2)细胞周期和细胞周期素(cyclin) D1、B1和细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin dependent kinase,CDK)1、4的影响,为肿瘤大分割放疗方案的制定提供基础资料.方法:采用PI单染,用流式细胞术检测细胞周期;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)结合半定量分析方法测定cyclin D1、cyclin B1、CDK4、CDK1各mRNA的转录情况.结果:4.0～8.0Gy γ射线分割照射CNE-2细胞首先表现为明显的G2M期阻滞,随着剂量的增加,G1期阻滞作用增强,而后表现为各期细胞均受阻,但其剂量依赖性不明显.4.0～8.0Gy γ射线照射使CNE-2细胞cyclin D1、cyclin B1各mRNA转录受抑制(P<0.05), CDK4 mRNA转录较对照组无差异(P>0.05);而CDK1 mRNA在所有照射组中均不转录.结论:4.0～8.0Gy γ射线分割照射CNE-2细胞导致G1期、S期和G2M期阻滞,但其剂量依赖性不明显;剂量在4.0～8.0Gy引起的G1期阻滞主要是cyclin D1活性受抑,而G2M期阻滞则主要与cyclin B1/CDK1的活性相关.
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莪术油对鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡及放疗增敏机制的影响
目的 探讨莪术油、莪术油联合γ-射线照射对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2的增殖抑制和诱导凋亡作用;分析莪术油是否具有放疗增敏的作用,并研究其机制.方法 体外培养CNE-2细胞,莪术油以体外直接加药的方式作用于CNE-2细胞,采用MTT、流式细胞术、电镜等分子生物学手段,检测莪术油单用或联合γ-射线对CNE-2的诱导凋亡作用、放疗增敏作用.结果 莪术油单独使用,对CNE-2细胞有确切的增殖抑制及诱导凋亡作用,并与常规化疗药物5-Fu有相近的抑制作用(P>0.05).莪术油的药物抑制作用呈现浓度依赖性,低起效浓度为10μg/ml,佳作用时间为48小时;5μg/ml、100μg/ml、300μg/ml的莪术油联合100 cGy的γ-射线作用2天后凋亡率由0.5%、2.15%、10.2%显著提高到8.6%、14%和26%,细胞的死亡率均在5%以下有明显的协同增效作用(P<0.01);联合作用96h后试验组的细胞主要以死亡为主,凋亡较少;500μg/ml的莪术油主要导致细胞死亡,有明显的细胞毒性.流式细胞仪结果显示较高浓度时,莪术油使CNE-2细胞阻滞在G1期.电子显微镜观察细胞凋亡的超微结构可以看到凋亡小体.结论 莪术油可以抑制鼻咽癌细胞CNE-2的增殖并诱导其凋亡;莪术油和100 cGy的γ-射线联合作用有明显的增敏作用;其作用机制与诱导肿瘤细胞发生凋亡及影响细胞生长周期有关.
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EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2及相关基因表达的影响
目的:研究EGCG对鼻咽癌细胞系CNE-2的增殖与凋亡作用,探讨其对细胞增殖与凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法:应用MTT实验、流式细胞仪检测细胞的增殖与周期；Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡；RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase-3表达.结果:EGCG明显抑制CNE-2细胞的增殖,诱导其凋亡,该作用具有剂量-效应关系.EGCG抑制CNE-2细胞Bcl-2表达,诱导CNE-2细胞Bax、Caspase-3表达.结论:EGCG在体外具有抗鼻咽癌细胞的作用,此作用可能是通过调节细胞增殖与凋亡基因的表达实现的.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 鼻咽肿瘤 CNE-2 -
干扰TCAB1基因表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响
目的:探讨siRNA抑制TCAB1表达对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响及分子机制.方法:构建靶向抑制TCAB1的siRNA干扰质粒及阴性对照质粒,转染至CNE-2细胞,RT-PCR和Western-blot检测TCAB1表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性参数D0、SF2等;QPCR检测转染前后CNE-2细胞端粒的相对长度变化.结果:成功构建CNE-2/phTCAB1-siRNA干扰质粒,转染后RT-PCR和Western-blot分析表明TCAB1 mRNA和蛋白表达均受到明显抑制,干扰组细胞D0和SF2值分别为2.490和0.460,明显低于空白对照组(D0和SF2值分别为3.186和0.607),P＜0.01;QPCR检测端粒相对长度发现干扰组T/S值(0.19±0.01)均小于正常细胞(0.52±0.06)和转染阴性质粒细胞(0.42±0.01),P＜0.05,而正常细胞组和转染阴性质粒细胞T/S值比较差异没有统计学意义(P＞0.05).结论:抑制TCAB1表达可以通过影响端粒长度增加鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性,TCAB1有望成为一种新的肿瘤放射增敏靶点.
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田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2生长和凋亡的影响
目的 探讨田基黄对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制和凋亡作用,为其临床应用提供实验依据.方法 SRB法检测田基黄对CNE-2细胞生长的抑制作用,PI分析细胞周期的变化、Annexin V检测细胞凋亡的发生.结果 田基黄抑制CNE-2细胞的生长,引起细胞死亡;田基黄诱导CNE-2细胞发生凋亡和坏死;田基黄作用人鼻咽癌细胞后S期细胞的比例增加,G2/M期细胞的比例减少.结论 一定浓度的田基黄可明显抑制人鼻咽癌细胞CNE-2生长,并诱导其凋亡,机制可能与阻滞细胞停留在S期有关.
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小干扰RNA抑制鼻咽癌细胞hTERT基因表达的实验研究
目的观察鼻咽癌细胞中的RNA干扰效应,确定hTERT基因RNA干扰的有效作用位点,探讨RNA干扰在鼻咽癌基因治疗中的应用前景.方法利用体外合成法合成针对hTERT基因的小干扰RNA(siRNA)序列,脂质体转染鼻咽癌CNE-2细胞,逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)检测转染细胞中hTERT基因的mRNA水平,Western Blot观察siRNA干扰后hTERT蛋白表达水平,噻唑蓝法检测siRNA对细胞生长抑制作用,流式细胞学检测siRNA诱导细胞凋亡的作用.结果在siRNA转染CNE-2细胞后,hTERT的mRNA表达水平分别下调10%～70%,蛋白表达水平不同程度降低,细胞周期在G0～G1期受阻,并不同程度诱导细胞凋亡.结论 siRNA可在鼻咽癌中有效发挥RNA干扰效应,下调hTERT基因mRNA及蛋白表达水平,降低端粒酶活性,抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡,为鼻咽癌基因治疗研究奠定了一定的基础.
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山奈酚抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究
目的 探讨山奈酚(Kaempferol)体外对人鼻咽癌细胞株CNE-2增殖和凋亡的影响.方法 以不同浓度的山奈酚作用于体外培养的CNE-2细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测IC50,用流式细胞仪、Hoechest33258染色及DNA片段化检测细胞凋亡.结果 山奈酚对鼻咽癌CNE-2细胞株的生长抑制作用随着其作用时间的延长和浓度的增加而明显增强,不同浓度山奈酚分别处理细胞24、48和72h后,其IC50值分别为(184.1±10.1)、(53.9±3.1)及(27.5±1.8)μmol/L,各IC50值间比较差异有显著性(P＜0.01)；荧光显微镜下可见到典型的细胞凋亡形态学改变；流式细胞术显示,经不同浓度山奈酚作用72h后细胞凋亡率均增加,以80μmol/L显著(P＜0.01);60、80和100μmol/L山奈酚处理组可见明显的DNA梯带.结论 山奈酚可通过抑制CNE-2细胞株的增殖而诱导其凋亡.
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改性载顺铂磁性纳米药物靶向治疗鼻咽癌的实验研究
目的 研究改性载顺铂磁性纳米药物(CDDP-MNP)靶向治疗鼻咽癌的疗效.方法 分别以浓度不同的载顺铂磁性纳米药物作用于体外培养的CNE-2细胞不同的时间,并以单纯顺铂做对照,用MTT方法定量检测CNE-2细胞在2种药物处理前后细胞凋亡的情况.同步进行体外抑瘤实验,将20只BALB/c雌性裸鼠接种CNE-2细胞建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,按照肿瘤体积随机分成单纯移植瘤对照组、顺铂治疗组、改性载顺铂磁性纳米药物治疗组、改性载顺铂磁性纳米药物联合靶向治疗组,分别用相应药物干预.治疗前后称体重、测量肿瘤大小、处死后称量瘤体重量.同时取移植瘤组织进行病理检查.结果 改性栽顺铂磁性纳米药物对CNE2细胞的杀伤作用呈明显量效和时效关系.与顺铂比较差异无显著性(P＞0.05).在体内抑瘤实验中,给予顺铂及改性栽顺铂磁性纳米药物治疗后,裸鼠体重明显减轻,肿瘤增长明显减慢.改性载顺铂磁性纳米药物治疗组与顺铂治疗组疗效比较差异无显著性(P＞0.05);但改性载顺铂磁性纳米药物联合磁靶向治疗组,鼻咽癌裸鼠移植瘤的抑瘤率明显高于顺铂治疗组及改性载顺铂磁性纳米药物治疗组(P＜0.05).结论 改性栽顺铂磁性纳米药物联合磁靶向治疗鼻咽癌有良好的疗效.
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Survivin基因沉默对鼻咽癌CNE-2细胞株恶性表型的影响
目的:探讨RNA干扰技术沉默Survivin基因对鼻咽癌细胞CNE-2恶性表型的影响.方法:设计、合成针对Survivin基因的干扰序列,并将干扰序列构建至pGCsi/U6/GFP载体,稳定转染CNE-2细胞；逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot鉴定干扰效果；经四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、平板克隆形成实验分析沉默Survivin基因后,CNE-2细胞生长速度、细胞周期及恶性表型的改变.结果:沉默Survivin基因后,CNE-2细胞Survivin mRNA、蛋白质表达水平均明显下调；细胞生长速度下降,G1期细胞增多,S期细胞减少,克隆形成能力明显减弱.结论:Survivin基因在CNE-2细胞生长、细胞周期及恶性表型等方面都起着重要的作用.
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姜黄素和穿心莲内酯对鼻咽癌细胞CNE-2的作用及机制
目的 研究姜黄素和穿心莲内酯对人鼻咽癌细胞CNE-2体外抗癌的联合作用,并探讨其可能抗癌分子机制.方法 MTS法检测穿心莲内酯(Andro)单独作用以及与姜黄素(Cur)的联合作用(DMSO、Andro 5.0μmol/L、Andro 10.0 μmol/L、Cur 10.0μmol/L、Andro 5.0 μmol/L+ Cur 10.0 μmol/L、Andro 10.0μmol/L+ Cur 10.0μmol/L)对不同肿瘤细胞增殖的影响;流式细胞术分析姜黄素和穿心莲内酯联合作用对CNE-2和HeLa细胞周期影响;Wes-tern blot分析姜黄素和穿心莲内酯联合作用对CNE-2细胞的NF-κB家族相关蛋白P50和P65蛋白的表达.结果 穿心莲内酯单独作用时在10 μmol/L以下浓度对各肿瘤细胞无显著抑制作用,而10 μmol/L姜黄素联合穿心莲内酯处理CNE-2和HeLa细胞48 h能使细胞存活率显著降低以及使细胞发生明显的G2/M期阻滞;Western blot结果显示两者联合作用能够协同抑制NF-κB家族相关蛋白P50和P65以及NF-κB调控蛋白c-Myc的表达.结论 姜黄素和穿心莲内酯协同作用于NF-κB信号通路发挥抗肿瘤作用.
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125I低剂量率照射对鼻咽癌细胞CNE-2的杀伤效应
目的 探讨125I低剂量率照射对鼻咽癌细胞CNE-2的杀伤效应.方法 用冷光源为对照,125I粒子照射鼻咽癌CNE-2细胞,MTT、流式细胞术和细胞迁移体系观察细胞的增殖、凋亡、细胞周期和迁移的变化.结果 照射后细胞增殖能力逐渐下降,其中24 h与对照组差异有统计学意义(P<0.05),48 h较6 h和12 h差异有统计学意义(P<0.05);照射后细胞凋亡逐渐增加,24 h后接近半数,72 h后达70%以上;照射后处于G1期的细胞逐渐减少,12 h与对照组差异有统计学意义(P<0.05),且较6 h明显减少(P<0.05);处于G2/M期的细胞逐渐增加,12 h较对照组差异有统计学意义(P<0.05),且较6 h增加明显(P<0.05);处于S期的细胞比例相对稳定.照射后细胞的迁移逐渐减少,照射后24 h较对照组减少明显(P<0.05),之后数量稳定,照射后24 h较6 h时减少明显(P<0.05).结论 125I低剂量率照射在体外能有效杀伤鼻咽癌细胞CNE-2,并抑制其迁移.
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60Coγ射线对CNE-2细胞周期素B1和增殖细胞核抗原表达的影响
目的研究60Coγ射线分割照射对CNE-2周期素B1(cyclin B1)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达和细胞周期分布的影响.方法采用PI单染,用流式细胞术检测细胞周期;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)结合半定量分析方法测定cyclin B1和PCNA mRNA的表达水平.结果 4.0、6.0、8.0 Gy60Coγ射线分割照射CNE-2细胞不同时间可发生G1、S和G2期细胞比例增多.4.0、6.0、8.0 Gy照射第1天PCNA表达水平较对照组下降(P＜0.05),第3、5天PCNA表达水平较对照组无明显变化(P＞0.05).照射后cyclin B1表达水平较对照组下降(P＜0.05),但各照射组间cyclin B1表达水平无差别(P＞0.05).结论 60Coγ射线分割照射CNE-2细胞可诱发G1、S、G2期阻滞和抑制PCNA和cyclin B1的表达,但其抑制效应无剂量依赖性.
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白藜芦醇影响CNE-2细胞生长的端粒酶机制研究
目的 观察不同浓度白藜芦醇对鼻咽癌CNE-2细胞生长及对细胞内端粒酶活性的影响.方法 不同浓度白藜芦醇处理体外培养鼻咽癌CNE-2细胞48 h后,噻唑蓝(MTT)法检测药物对细胞增殖的抑制作用.流式细胞术检测白藜芦醇对细胞凋亡的影响.TRAP荧光定量PCR检测不同浓度药物处理后,CNE-2细胞内端粒酶活性的改变.结果 0.025,0.050,0.100,0.200 mmol/L的白藜芦醇作用48 h后,白藜芦醇呈浓度依赖性抑制CNE-2细胞增殖,抑制率分别为(1.16±2.95)%,(7.51±2.77)%,(20.12±6.01)%,(54.82±8.66)%;流式细胞仪分析结果 表明,CNE-2细胞凋亡率上升,且呈浓度依赖性;药物处理后,细胞内端粒酶活性均降低,其中0.100 mmol/L组和0.200 mmol/L组活性降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 白藜芦醇呈浓度依赖性抑制鼻咽癌CNE-2细胞生长,促进其凋亡,并可降低细胞内端粒酶活性.
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PI3K/Akt/FoxO3a信号通路对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨FoxO3a对体外培养的人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞增殖及凋亡的影响是否是通过PI3K/Akt信号通路.方法 通过使用LY294002特异性抑制PI3K的活性,免疫印迹法检测FoxO3a及p-Akt蛋白在人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞的表达,免疫荧光化学检测FoxO3a在鼻咽癌细胞中的亚细胞定位,实时荧光定量PCR检测FoxO3a的mRNA表达水平,MTT法检测鼻咽癌细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测鼻咽癌细胞的凋亡率.结果 通过使用PI3K特异性抑制剂LY294002,FoxO3a在实验组人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞中的蛋白和mRNA表达水平均高于对照组(P＜0.05),且在CNE-1 (P =0.004)、CNE-2(P =0.001)细胞核内的表达量高于对照组,FoxO3a的上调可抑制人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞的增殖(P＜0.05),促进其凋亡(P＜0.01).结论 通过抑制PI3K/Akt信号通路的活性可上调人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞FoxO3a基因的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与其对FoxO3a的调控有关.
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不同照射模式对人鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2放射敏感性的影响研究
目的:探索不同照射模式对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)放射敏感性的影响.方法:运用克隆形成实验(courtenay assay),检测不同照射模式下CNE-2细胞的存活分数(SF),拟合细胞存活曲线.并运用四氮唑蓝法(MTT)进一步验证克隆形成实验的结果.结果:分别给予CNE-2细胞 0、1、2、4、6、8 Gy的照射后,CNE-2细胞的SF值随照射剂量增加逐渐下降,并且在相同的剂量点,模拟调强照射(IMRT)组的SF均高于常规照射组;根据线性二次方程拟合CNE-2细胞存活曲线,α常规＞αImrt,β常规＞βImrt,N常规
