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二咖啡酰奎宁酸抗肝纤维化及脂质过氧化作用的实验研究
目的:观察二咖啡酰奎宁酸抗复合因素致大鼠肝纤维化及脂质过氧化作用.方法:采用复合因素复制大鼠肝纤维化模型,以血清层连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量、肝组织光镜、电镜下形态学改变为观察内容,探讨二咖啡酰奎宁酸的治疗作用.结果:二咖啡酰奎宁酸能够显著降低血清LN,HA,MDA,NO含量,明显改善肝组织炎症及纤维化状态.结论:二咖啡酰奎宁酸具有一定的抗肝纤维化及脂质过氧化作用.
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二咖啡酰奎宁酸对小鼠肺纤维化的早期防治作用
目的探讨二咖啡酰奎宁酸(IBE5)对博莱霉素诱导的C57小鼠肺纤维化的防治作用及其机制.方法分别进行羟脯氨酸(Hyp)检测、图像分析、Ⅰ和Ⅲ型胶原测定、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和基质溶解素(MMP-7)免疫组织化学检测.结果①IBE5能降低纤维化肺组织内Hyp含量(P＜0.05);②BLM组肺泡明显减少,间隔增宽,肺内胶原沉积和纤维化.IBE5能减轻肺泡破坏和纤维化(P＜0.05);③BLM组肺间质合成大量Ⅰ、Ⅲ型胶原,IBE5治疗后胶原减少(P＜0.05);④BLM组α-SMA增加,位于纤维化区的肌成纤维细胞中;MMP-7免疫组织化学检测显示肌成纤维细胞阳性.应用IBE5后α-SMA、MMP-7减少(P＜0.05).结论IBE5通过抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞转化和MMP-7表达对肺纤维化具有防治作用.
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二咖啡酰奎宁酸对大鼠肝原代细胞保护作用的研究
目的采用肝原代细胞培养及四氯化碳损伤法,观察1,5-二-O-二咖啡酰奎宁酸对肝细胞的保护作用,并通过体外实验初步探讨二咖啡酰奎宁酸保护肝细胞的作用机制.方法采用肝细胞消化酶两步灌注法,肝细胞消化液消化肝细胞,梯度离心分离肝细胞,细胞获得量为(1-10)×107·ml-1,肝细胞活力在90%以上,以此为靶细胞.并利用四氯化碳损伤方法制造肝细胞损伤模型.分别采用3H-胸腺嘧啶(3H-TdR),3H-脯氨酸(3H-Pro)掺入,流式细胞术等方法,观察二咖啡酰奎宁酸对肝细胞的增殖、活力、凋亡及细胞周期等的影响,并测定天门冬氨酸转移酶活性.结果二咖啡酰奎宁酸在7.8～250mg·L-1浓度对肝细胞无明显毒性作用,能促进正常及四氯化碳损伤的肝细胞增殖及增强细胞活力,降低细胞上清的天门冬氨酸转移酶(AST)活性,抑制四氯化碳引起的肝细胞凋亡以及改变受损细胞周期.结论二咖啡酰奎宁酸具有显著的肝细胞保护作用,其作用机制为促进肝细胞的增殖及活力,抑制受损肝细胞的凋亡,并可明显降低天门冬氨酸转移酶水平.
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关于灯盏细辛注射液总咖啡酸酯测定方法的建议
灯盏细辛注射液收载于《中国药典》2005年版一部,含量测定项有HPLC法测定野黄芩苷的含量及紫外-可见分光光度法测定总咖啡酸酯的含量.其中紫外-可见分光光度法测定是以1.3-0-二咖啡酰奎宁酸为对照品,对照品溶液配制的溶剂为0.1mol/L碳酸氢钠溶液,我所在监督抽样检验时发现该对照品溶液欠稳定,影响测定的准确性和结果的判断,因此,对该质量标准项下的方法,以不同溶剂进行了测定结果比较并进行稳定性试验,结果显示以水或50%甲醇作为溶剂,无论是对照品溶液或供试品溶液至少在40分钟内吸光度是稳定的.
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二咖啡酰奎宁酸药理实验研究进展
二咖啡酰奎宁酸(dicaffeoylquinic acids,DCQ)是一类由奎宁酸(quinc acid)与数目不等的咖啡酸(caffeic acid)通过酯化反应缩合而成的酚酸类天然成分,广泛存在于植物界如金银花、旋覆花、苍耳等中药及茶叶、山楂等果树中.近20年来,国内外学者就DCQ的植物化学和药理进行了深入研究,发现了其具有一些重要生物活性,极具临床价值.国外许多研究成果已申请发明专利.现仅就DCQ的抗氧化、抗炎、抗病毒、抗纤维化、抑制平滑肌收缩、降血脂等诸多作用简述如下.
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一测多评法测定艾叶中6个有机酸类成分的含量
目的:建立同时测定艾叶中6个有机酸类成分含量的一测多评法.方法:采用Thermo Syncronis C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速0.8 mL· min-1,检测波长325 nm,柱温30℃.以绿原酸为内参物,分别计算与新绿原酸、隐绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的相对校正因子,实现一测多评.同时利用外标法和一测多评法测定6个有机酸类成分的含量.比较2种方法的测定结果是否存在差异.结果:一测多评法与外标法测定结果无显著差异.实验所测得的相对校正因子重复性良好.6批不同产地艾叶样品中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量范围分别为0.15～0.58、0.50～2.65、0.27～0.89、0.62～4.29、1.18～10.72、0.99～6.69 mg·g-1.结论:一测多评法可以用于艾叶中6个有机酸类成分的含量测定,且具有可行性与经济性.
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大菟丝子生品和盐炙品HPLC-UV特征图谱及7个有机酸含量变化研究
目的:建立大菟丝子生品和盐炙品的特征图谱,探讨大菟丝子炮制前后化学成分的变化规律,对其中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸7个有机酸类成分进行定量分析比较.方法:采用HPLC-UV法,选用Odyssil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.05％磷酸溶液(B),梯度洗脱(0 ～5 min,5％ A→13％A;5～20 min,13％ A→13％A;20 ～ 25 min,13％A→20％A;25 ～45 min,20％A→40％A),流速1 mL·min-,检测波长325 nm,柱温35℃;用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A”处理分析.结果:指标性成分在测定范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9970);不同来源的大菟丝子生品或盐炙品间的特征图谱相似度较高,但炮制前后指标性成分含量差异显著,呈现炮制后新绿原酸、隐绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸呈倍数增长,而绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸呈倍数下降的趋势.指纹图谱评价生品(S1～S8)、盐炙品(S9 ～S16)、药房样品(S17 ～ S25)特征图谱相似度发现生品与盐炙品间差异相对较大,而盐炙品与药房样品的相似度小.结论:采用特征图谱结合7个有机酸指标性成分含量测定的方法可以较好地控制大菟丝子生品、盐炙品的质量,并可用于生、盐炙品的区分.
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HPLC同时测定口炎清颗粒中7个有机酸的含量
目的:建立HPLC同时测定口炎清颗粒中7个有机酸(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸及4,5-二咖啡酰奎宁酸)含量的方法.方法:采用AkzoNobel Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温30℃,以乙腈-0.1％磷酸水溶液进行梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长326 nm.结果:7个成分的线性关系良好,精密度、稳定性、重复性的RSD均低于3％,加样回收率为97.75％ ～99.33％.结论:该方法可用于口炎清颗粒多指标质量控制.
