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3,5-二硝基水杨酸法测定灵芝多糖的含量
目的 建立3,5-二硝基水杨酸法(简称DNS法)测定灵芝多糖的含量.方法 在氢氧化钠和丙三醇的存在下,还原糖能将3,5-二硝基水杨酸(DNS)中的硝基还原成氨基,生成氨基化合物,此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色,在一定波长下具有大吸收,吸光度与还原糖含量有线性关系.因此可利用吸光度测定多糖含量.结果 半乳糖浓度在0.15～0.41mg/ml范围内,与吸收度值呈良好的线性关系,灵芝总糖供试液和单糖供试液平均回收率分别为97.3％和99.4％,精密度、回收率RSD％均小于3％.结论 DNS法测定灵芝多糖的含量结果准确、可靠,重现性好.
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灵芝多糖对H22肝癌小鼠肠道黏膜免疫功能的影响作用
目的:探讨灵芝多糖对H22肝癌小鼠肠道黏膜免疫功能的影响作用. 方法:制备模型、给药、小肠粘膜分离纯化.结果:在小肠粘膜淋巴细胞提取中,消化液中淋巴细胞LEL、LEP基本消失,消化所得为LPL. 淋巴细胞活力>95%. 与对照组相比,模型组CD4 +T淋巴细胞、CD4 + / CD8 +值增大,P<0. 01,CTX组明显下降, P<0. 05, GLP组、CTX+GLP组基本没有变化.CTX组、GLP组、CTX+GLP组和模型组相比, CD4 + / CD8 +淋巴细胞亚群比较没有统计学意义;CTX 组、GLP组能让 IEL中的CD4 + / CD8 +比值、CD4 +T淋巴细胞减少,P<0. 01,虽然可以提升CD4 +T淋巴细胞减少量,没有统计学意义. 结论:灵芝多糖对H22肝癌小鼠肠道黏膜免疫功能的影响巨大,值得临床应用.
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灵芝多糖对小鼠肿瘤的抑制作用及免疫指标的观察
目的:观察灵芝多糖的抑瘤作用及对小鼠免疫系统的影响.方法:MTT法测定灵芝多糖的细胞毒作用.小鼠荷瘤建立动物模型,观察灵芝多糖对荷瘤小鼠的存活期、抑瘤率和免疫系统的影响.结果:灵芝多糖对肿瘤细胞无直接杀伤作用(P＜0.005),体内可延长荷瘤小鼠的存活期;治疗组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞转化率、血清中TNF-α均有显著提高.结论:灵芝多糖抗肿瘤作用是通过机体的免疫系统介导的.
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灵芝多糖对顺铂抑制荷膀胱癌T24细胞裸鼠肿瘤生长及血管生成作用的影响
目的 探讨灵芝多糖对膀胱癌的化疗增敏效应和对肿瘤血管生成的抑制作用.方法 应用MTS法测定灵芝多糖联合顺铂对人膀胱癌T24细胞体外增殖的影响.采用Chou-Talalay联合指数法(即中效原理)判定两药合用时的相互作用关系.建立T24荷瘤裸鼠模型,观察灵芝多糖和顺铂的联合治疗效应,采用免疫组化染色检测荷瘤裸鼠肿瘤组织的微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法和Western blotting检测荷瘤裸鼠肿瘤组织中VEGF和bFGF的表达情况.结果 灵芝多糖在体外能有效抑制T24细胞的增殖,且与顺铂联用具有协同效应(CI＜1).免疫组化染色显示,灵芝多糖可显著增强顺铂对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用(P＜0.05),并可抑制肿瘤组织的血管生成及VEGF、bFGF的表达.实时荧光定量PCR和Westernblotting检测也显示与单用顺铂比较,灵芝多糖联合顺铂治疗后荷瘤裸鼠肿瘤组织中VEGF和bFGF的表达显著下降.结论 灵芝多糖和顺铂能协同抑制T24细胞的体外增殖;灵芝多糖可增强顺铂对T24荷瘤裸鼠肿瘤生长及血管生成的抑制作用,其机制可能与下调VEGF和bFGF的表达有关.
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灵芝多糖对长期大强度运动小鼠巨噬细胞活性及功能的影响
目的:研究灵芝多糖(GLP)对长期大强度运动小鼠巨噬细胞活性及功能的影响.方法:实验小鼠50只随机分为盐水+对照组、盐水+运动组、低剂量GLP+运动组、中剂量GLP+运动组、高剂量GLP+运动组,每组10只.3个GLP组每天分别按50 mg/kg/日GLP(低剂量)、100 mg/kg/日GLP(中剂量)、200 mg/kg/日GLP(高剂量)灌胃.盐水+对照组和盐水+运动组每天灌胃等体积生理盐水,共4周.对照组不运动,4个运动组小鼠每天进行1次45 min负重5%游泳训练,每周6次,为期4周.测定4周后各组小鼠巨噬细胞分泌的NO、IL-1β水平和细胞内GSH及吞噬率、吞噬指数.结果:4周运动后盐水+运动组小鼠腹腔巨噬细胞分泌的NO、IL-1β水平显著下降.盐水+运动组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率显著下降.盐水+运动组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数呈现下降趋势.中剂量GLP+运动组小鼠腹腔巨噬细胞分泌的NO、IL-1β水平显著高于盐水+运动组,高剂量GLP+运动组显著高于盐水+运动组和低剂量GLP+运动组,中、高剂量GLP+运动组小鼠细胞内GSH水平显著低于盐水+运动组和低剂量GLP+运动组,随GLP剂量增加GSH逐渐下降.低、中、高剂量GLP+运动组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率显著高于盐水+运动组,随GLP剂量增加巨噬细胞吞噬率逐渐提高.中剂量GLP+运动组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数显著高于盐水+运动组和低剂量GLP+运动组.结论:GLP对大强度运动小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及分泌IL-1β、NO具有明显的促进作用.
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灵芝多糖对小鼠T细胞IL-2 IL-3 mRNA表达的影响
目的研究灵芝多糖GLB7对小鼠T细胞IL-2,IL-3 mRNA表达的影响,进一步探讨灵芝多糖免疫调节作用的机制.方法培养开始时加入不同浓度的GLB7(5、10、20、40mg*L-1),培养一定时间后,以RT-PCR和凝胶图像吸收度分析系统检测灵芝多糖(GLB7)与小鼠脾脏T细胞IL-2,IL-3 mRNA表达之间的量效关系.结果 GLB7能剂量依赖性增强静息T细胞中IL-2和IL-3 mRNA的表达,分别于11h和20h达到高峰,而对活化的T细胞则不产生影响,此时培养上清中IL-2和IL-3活性与对照组比较亦有明显升高,并具有一定的剂量依赖关系.结论灵芝多糖免疫增强和抗肿瘤作用的基础与其在转录水平促进T细胞中IL-2和IL-3 mRNA的表达有关.
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灵芝免疫药理研究进展
目的综述灵芝免疫药理学方面的研究进展,为对灵芝免疫调节作用进一步深入研究和开拓其应用范围提供参考依据.方法以近年来国内大量有代表性的文献为基础,并参阅国外相关资料,进行分析、整理和归纳,按照其药用部位,主要成分分别评述.结果灵芝水煎提取制剂、灵芝发酵液、灵芝孢子粉、灵芝多糖及某些灵芝蛋白等均具有显著的免疫增强作用和免疫恢复作用,同时也有一定的免疫抑制作用.其中,对灵芝多糖的研究较多,尤其是对其细胞及细胞因子的免疫作用研究较为深入,基本上阐明了灵芝免疫调节作用的机理,揭示出灵芝"滋补强壮、扶正固本"的原因.结论灵芝这味珍奇老药在提高机体免疫功能、抑制免疫损伤、增强体质、防治疾病方面,具有广阔的研究与开发应用前景.
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段木栽培及袋栽灵芝多糖对体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖活性的比较
目的比较段木栽培灵芝多糖(wood-cultured Ganoderma lucidum polysaccharides, Gl-PS-WC) 及袋栽灵芝多糖(bag-cultured Ganoderma lucidum polysaccharides, Gl-PS-BC)对体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,探讨袋栽灵芝多糖替代段木栽培灵芝多糖的可能性. 方法检测两种灵芝多糖对混合淋巴细胞培养(MLC)反应的影响;观察对刀豆蛋白A (Con A)、细菌脂多糖(LPS)诱导淋巴细胞增殖的影响以及对环孢素A (CsA)、丝裂霉素C(Mit C)、足叶乙苷(VP-16) 等抑制MLC反应的影响.结果当质量浓度为0.2～12.8 mg*L-1时,两种灵芝多糖均可促进MLC反应,增强Con A或LPS诱导的淋巴细胞增殖,并拮抗CsA, Mit C或VP-16对MLC反应的抑制作用.未发现两种多糖之间有显著性差异.结论 Gl-PS-WC及Gl-PS-BC对体外培养脾淋巴细胞的增殖活性有类似作用.
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正交法优选夜宁胶囊中灵芝镇静成分提取工艺的研究
目的 用正交试验研究中药灵芝中镇静成分的提取工艺.方法 采用四因素三水平的正交实验设计,以出膏率和灵芝多糖及总糖含量为指标,用紫外分光光度计测定浸膏中灵芝多糖及总糖含量,筛选佳工艺条件.结果 40倍量的60%乙醇,80℃回流2 h,即保持沸腾状态2 h为佳工艺.结论 以正交试验法优选的灵芝镇静成分提取工艺方法简单,结果 稳定,效果满意,从而确保质量.
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灵芝多糖对斑马鱼存活、发育和衰老的影响
目的：观察灵芝多糖对斑马鱼存活、发育和衰老的影响。方法取正常受精的斑马鱼卵，在其单细胞发育期注射二胺吗啉代寡核苷酸（mO），制备 p53基因敲除斑马鱼模型。正常斑马鱼卵和 p53基因敲除斑马鱼卵孵育8 h 后，分别加入灵芝多糖1，2和3 g·L-1于28℃继续培养3 d，测定斑马鱼存活率和畸形率，并用衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gaI）染色法分析斑马鱼细胞 SA-β-gaI 染色阳性率，用逆转录 PCR 检测衰老相关基因端粒酶逆转录酶基因（ TERT）、抑癌基因 p53、小鼠双微体基因（ mdm2）和 p21基因表达。结果灵芝多糖1和2 g·L-1培养3 d 对野生型斑马鱼的发育无明显影响，3 g·L-1时大部分野生型斑马鱼胚胎细胞表现为畸形，并且存活率仅为48.6%；灵芝多糖1~3 g·L-1对 p53基因敲除斑马鱼的存活和发育无明显影响。灵芝多糖2 g·L-1处理3 d，野生型斑马鱼 SA-β-gaI 染色阳性率与对照组相比明显降低（ P﹤0.01），p53基因敲除斑马鱼 SA-β-gaI 染色阳性率无明显变化。逆转录 PCR 结果表明，灵芝多糖2 g·L-1可降低野生型斑马鱼细胞 p21和 p53基因表达（P﹤0.05，P﹤0.01），对 TERT和 mdm2基因表达无明显影响；对 p53基因敲除斑马鱼 TERT，mdm2，p21和 p53基因表达均无明显影响。结论灵芝多糖2 g·L-1对野生型斑马鱼胚胎细胞复制性衰老具有改善作用，≥3 g·L-1时可导致野生型斑马鱼幼胚发育畸形和死亡。灵芝多糖对斑马鱼衰老的改善作用可能与其降低 p21和 p53基因表达有关。
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灵芝滴丸中灵芝多糖的含量测定
目的:探讨灵芝滴丸中灵芝多糠的含量测定方法.方法:采用紫外分光光度法,检测波长为625nm.结果:线性范围为20.8～208.0 μg/ml(r=0.9976),平均回收率为99.56%,RSD为1.52%.结论:本法简便快捷,准确度高,重复性好,可作为本刺剂的质控方法.
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灵芝多糖对IEC-6细胞促增殖、迁移与分化作用
目的 通过灵芝多糖作用于体外培养的大鼠小肠隐窝细胞株IEC-6细胞,观察灵芝多糖对IEC-6细胞增殖、迁移与分化的影响.方法 不同浓度的灵芝多糖作用于正常IEC-6细胞44 h后,用噻唑蓝(MTT)法测细胞的增殖.灵芝多糖预作用IEC-6细胞46 h后,用500 μmol·L-1H2O2刺激IEC-6细胞40 min,以MTT法测细胞的增殖变化.采用IEC-6单层肠上皮细胞损伤重建模型,检测灵芝多糖对IEC-6细胞迁移的影响,并用ELISA方法检测培养细胞上清中TGF-β的含量以探讨迁移途径.对细胞进行HE染色来观察IEC-6细胞的分化情况.结果 灵芝多糖对正常及受H2O2损伤后的IEC-6细胞均有促增殖作用,并呈量效关系;10 mg·L-1灵芝多糖可促进受损IEC-6细胞的迁移,但对细胞上清中TGF β含量无影响.在10mg·L-1灵芝多糖作用下,IEC-6细胞分化程度增高.结论 灵芝多糖可以促进IEC-6细胞增殖、迁移与分化.其促迁移作用是非依赖TGF β途径的.
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植物多糖的结构分析及药理活性研究进展
目的 对植物多糖的结构分析方法及部分药理活性的近年研究进展进行综述.方法 对近年来国内外相关研究文献进行分析和归纳.结果与结论 植物多糖结构分析的主要方法包括气相色谱法(GC)、液相色谱法( HPLC)、红外光谱法(IR)、拉曼光谱法、核磁共振光谱法(NMR)和质谱法(MS)等仪器分析方法,以及Smith降解和甲基化等化学分析方法.植物多糖具有多种重要的生物活性和药理作用,如抗癌、抗氧化、抗衰老、降低血糖和提高免疫力等,已被广泛研究和应用于食品、保健品和药品.先进分析方法的应用必将使植物多糖的研究更加深入,许多新的植物多糖及其药理功能也将被发现和应用.
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灵芝抗肿瘤作用机制的研究概述
目的 对近年来关于灵芝抗肿瘤作用机制的研究做整理分析.方法 查阅近年的国内外文献,进行全面综合、整理和归纳.结果 综述了灵芝抗肿瘤的作用机制,重点阐述其在抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞死亡、抑制肿瘤细胞的侵袭和转移以及免疫调节等多个方面的研究现状.结论 灵芝具有潜在的抗肿瘤作用,但作用机制复杂,亟待进一步研究.
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灵芝多糖抗肿瘤机制研究进展
目的 综述灵芝多糖抗肿瘤机制研究进展.方法 在总结国内外文献基础上,对灵芝多糖不同种类抗肿瘤作用机制进行综合与归纳.结果与结论 目前多糖类药物作为抗肿瘤免疫调节剂成为一大研究热点,笔者主要从其提高宿主免疫功能、抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤转移、抗氧化、清除氧自由基、提高肿瘤细胞MHC及共刺激分子表达、诱导肿瘤细胞分化等作用进行综述.并对灵芝多糖研究目前存在的问题进行评述.
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灵芝多糖对小鼠T细胞三磷酸肌醇和二酰基甘油体外作用的研究
目的研究灵芝多糖(GLB7)对小鼠T细胞三磷酸肌醇(IP3)和二酰基甘油(DAG)的作用,确定其对T细胞信号转导途径.方法采用细胞培养、放射免疫分析、离子交换层析和薄层色谱法测定小鼠脾脏T细胞中IP3和DAG的变化.结果 GLB7引起小鼠T细胞中IP3和DAG浓度升高.IP3的达峰时间为30 s,百日咳毒素(PTX)对此现象有抑制作用;DAG的合成出现两个峰,第一个峰迅速短暂,峰值位于30 s,第二个峰是持续时间较长的迟发峰.GlB7对活化的T细胞中IP3和DAG未产生明显影响.结论 IP3/Ca2+和DAG/PKC两条信息途径均参与了灵芝多糖对T细胞的免疫调节.
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灵芝多糖诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的研究
目的:研究灵芝多糖(GLPS)与化疗药氟尿嘧啶联合使用诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用.方法:MTT法测定细胞毒作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定Caspase-3、Caspase-8酶活性,Western-Blotting法检测细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达情况.结果:灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用具有显著的细胞毒作用;流式细胞术检测,随着GLPS浓度增加,细胞凋亡率升高,Caspase-3、Caspase-8酶活性亦增强;Western-Blotting检测发现GLPS作用后细胞色素C、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达不同程度增加.结论:灵芝多糖与氟尿嘧啶联合使用可通过引起细胞色素C的释放,活化Caspase诱导肝癌细胞凋亡.
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灵芝多糖的急性毒性和抗肿瘤作用
目的:探讨灵芝多糖的急性毒性和抗肿瘤作用.方法:观察灵芝多糖的LD50及对S180小鼠肉瘤细胞的抑制作用.结果:灵芝多糖的LD50远大于国家标准15g/kg,属无毒级别.同时当灵芝多糖的剂量为250 mg/kg时,对S180小鼠肉瘤细胞的抑瘤率为43.44％.结论:灵芝多糖有很好的抗肿瘤作用,同时无急性毒性,值得推广应用.
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灵芝多糖抗肿瘤免疫机制的研究进展
灵芝多糖因其免疫调节功能、抑制肿瘤生长且无不良反应等特点,被认为是通过调节机体免疫功能达到抗肿瘤目的的一味良好的药物. 其抗肿瘤作用可能通过抑制肿瘤细胞增殖并诱导凋亡、抑制肿瘤血管新生、调节机体免疫等途径实现,其中调节细胞因子、机体固有免疫系统、T/B淋巴细胞及黏膜免疫系统等的免疫机制可能是其发挥抗肿瘤作用的主要机制.
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灵芝多糖心血管作用研究进展
灵芝多糖对缺血/再灌注器官、血管内皮细胞株ECV304、原代培养的脐静脉血管内皮及乳鼠心肌细胞的氧化损伤具有保护作用.灵芝多糖可改善小鼠2型糖尿病模型的血流动力学指标,改善心肌超微结构;可使2型糖尿病大鼠胸主动脉糖基化终末产物及其受体蛋白表达抑制;还可降低高脂大鼠的血脂.灵芝多糖的心血管作用多数与其抗氧化作用有关,可能与其增加血浆及组织中的抗氧化酶活性,减少脂质氧化代谢产物,清除自由基有关.
