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Gli抑制剂GANT61对食管鳞癌细胞生长抑制作用的研究
目的 Hedgehog信号通路的异常活化与多种肿瘤的发生、发展关系密切,Gli是该通路的重要组成部分.本研究分析Gli抑制剂GANT61对人食管鳞癌细胞OE21和KYSE-30生长抑制作用,并探讨其抗肿瘤作用机制.方法 采用不同浓度GANT61处理OE21和KYSE-30细胞,MTS法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测GANT61作用于OE21和KYSE 30细胞后对Gli1和Gli2 mRNA的影响;蛋白质印迹法观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达的影响.Transwell侵袭实验观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对侵袭能力的影响.结果 GANT61对OE21和KYSE-30细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性,MTS显示GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞72 h的IC50值分别为4.7和8.2 μmol/L.GANT61可显著下调OE21细胞Gli1(z=-1.98,P=0.04)和Gli2(z=-1.99,P=0.04)mRNA以及Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达.GANT61可显著下调KYSE-30细胞Gli1(z=-3,58,P＜0.001)和Gli2(z=-2.282,P=0.004)mRNA以及Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达.Transwell侵袭实验显示,OE21细胞GANT61组穿膜细胞数为53±6.78,较DMSO组的140±11.02减少,t=12.888,P＜0.001;KYSE-30细胞GANT61组穿膜细胞数为58.2±7.59,较DMSO组的133.4±9.37减少,t=11.452,P＜0.001.结论 GANT61可以通过下调Gli1和Gli2的表达显著抑制OE21和KYSE-30细胞的细胞生长和侵袭能力,Gli可能成为抑制食管鳞癌细胞增殖和转移的新的分子靶点.
关键词： 食管鳞癌 Hedgehog信号通路 GANT61 Gli -
Gli1在髓母细胞瘤中的表达及其靶向抑制的研究
目的 研究Gli1在髓母细胞瘤(MB)中的表达和作用.方法 用不同浓度(正常对照组、10μmol/L组、20 μmol/L组、40 μmol/L组)的Gli1特异性抑制剂GANT61作用Daoy细胞,采用细胞增殖法检测Daoy细胞在GANT61作用下的增殖活性的变化;Real-time PCR法和Western blot法分别检测不同组Daoy细胞中Gli1和Bcl-2 mRNA表达量和蛋白表达量的差异.结果 GANT61作用细胞后,细胞间隙增大,异常突起增多,细胞增殖活性明显下降,与对照组相比,GANT61作用组的Daoy细胞增殖数显著降低(P＜0.05),并且随着浓度的增加,增殖数显著降低(P＜0.05),提示具有浓度依赖性;不同浓度GANT61组的Gli1和Bcl-2 mRNA表达量均较对照组明显下降(P＜0.05),下降程度随着GNAT61浓度的增加而增加(P＜0.05);不同浓度GANT61组的Gli1和Bcl-2蛋白表达水平较对照组明显下降(P＜0.05),下降程度随着GANT61浓度的增加而增加(P＜0.05).结论 GANT61能通过抑制Gli1的表达,进而下调下游靶基因Bcl-2的表达,从而明显抑制MB细胞的增殖活性,达到促进MB细胞凋亡的作用.
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Gli抑制剂GANT61对食管腺癌细胞生长和转移抑制作用的研究
目的：研究Gli抑制剂GANT61对人食管腺癌细胞OE19和OE33的生长抑制作用及其可能作用机制。方法常规培养OE19和OE33细胞。MTS法检测不同浓度GANT61（30、20、13.3333、8.8888、5.9259、3.9506、2.6337、1.7558、1.1705μmol/L）对OE19和OE33细胞活力的影响，以半数抑制浓度（IC50）表示。OE19和OE33细胞分别设治疗组（10μmol/L GANT61处理）和DMSO组（常规DMSO处理）。实时荧光定量PCR检测2组OE19和OE33细胞中Gli1和Gli2 mRNA的表达。Western blot法检测2组OE19和OE33细胞的Gli1、Gli2和CyclinD1蛋白表达量的变化。Transwell侵袭实验观察2组OE19和OE33细胞24 h侵袭能力的变化。结果 GANT61作用于OE19和OE33细胞72 h的IC50值分别是8.08和9.65μmol/L。治疗组OE19和OE33细胞的Gli1、Gli2 mRNA和蛋白表达水平均低于DMSO组，CyclinD1蛋白表达水平较DMSO组亦显著降低（P＜0.05）。治疗组在OE19和OE33细胞中的穿膜细胞数较DMSO组明显减少（P＜0.01）。结论 GANT61可以通过下调Gli1和Gli2 mRNA及蛋白水平的表达，抑制食管腺癌细胞的生长和侵袭；Hedgehog信号转导通路异常活化和食管腺癌的发生和发展有关。
关键词： 食管肿瘤 腺癌 Hedgehog信号通路 Gli GANT61 -
PI3K/AKT途径在Gli诱导的肺鳞癌SK-MES-1细胞上皮-间质转化中的作用
目的 研究Gli与磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)诱导的肺鳞癌SK-MES-1细胞上皮-间质转化之间的关系.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法观察GANT61处理SK-MES-1细胞24h后对Gli1、Gli2、波形蛋白(Vimentin)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)mRNA表达的影响;Western blot试验观察GANT61和N-Shh分别处理SK-MES-1细胞24h后对Gli1、Gli2、p-AKT、AKT、Vimentin和E-cadherin蛋白表达的影响;侵袭实验观察对肺鳞癌细胞迁移侵袭能力的影响.结果 GANT61与二甲基亚砜(DMSO)相比可以显著下调肺鳞癌SK-MES-1细胞的Gli1、Gli2、Vimentin mRNA表达,上调E-cadherin mRNA的表达(P均<0.01);Western blot显示GANT61可以下调SK-MES-1的Gli1、Gli2、p-AKT、Vimentin蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达(P值均<0.01).侵袭实验显示GANT61可以显著抑制SK-MES-1细胞的侵袭能力(P<0.01).应用N-Shh可以显著上调Gli1、Gli2、Vimentin mRNA及蛋白表达以及p-AKT蛋白表达,下调E-cadherin mRNA和蛋白的表达,同时促进肿瘤细胞的侵袭能力.结论 Gli1和Gli2表达下调可以抑制肺鳞癌细胞的侵袭转移,可能与Gli通过PI3K/AKT途径促进上皮-间质转化有关.
关键词： 肺鳞癌 Hedgehog/Gli PI3K/AKT GANT61 上皮-间质转化 -
姜黄素对人早幼粒白血病细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究
目的：研究姜黄素对人早幼粒白血病细胞HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法将HL-60细胞设立实验组、阴性对照组、空白对照组，实验组分姜黄素（0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol／L）单独亚组和姜黄素（0、5.0、10.0、20.0μmol／L＋30μmol／L GANT61）联合亚组，于作用24、48 h时观察。采用CCK-8法检测HL-60细胞增殖，计算细胞增殖抑制率；并评价体外联合应用药物对细胞毒性作用是否有协同作用；采用AnnexinⅤ-FITC／PI双染检测细胞凋亡率。结果姜黄素单独亚组和姜黄素联合亚组在24、48 h对HL-60细胞的抑制率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；培养至24、48 h时，5.0、10.0、20.0μmol／L姜黄素联合亚组分别与5.0、10.0、20.0μmol／L单独亚组对HL-60增殖抑制率比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）；培养至24、48 h时，10.0、20.0μmol／L姜黄素联合亚组与0μmol／L姜黄素联合亚组对HL-60增殖抑制率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。培养至24 h时，5.0μmol／L姜黄素与30μmol／L GANT61对HL-60细胞的增殖抑制率呈拮抗作用，培养至48 h时，呈单纯相加作用；24、48 h时，10.0、20.0μmol／L姜黄素与30μmol／L GANT61联合用药对HL-60细胞的增殖抑制率均呈增强作用。培养至24、48 h时，姜黄素、 GANT61和姜黄素＋GANT61对HL-60细胞凋亡率比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）；其中，培养至24 h 时，10.0、20.0μmol／L姜黄素联合用药分别与10.0、20.0μmol／L姜黄素单独用药对HL-60细胞凋亡率比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）；培养至48 h时，5.0、10.0、20.0μmol／L姜黄素联合用药分别与5.0、10.0、20.0μmol／L姜黄素单独用药对HL-60细胞凋亡率比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）；5.0、10.0、20.0μmol／L姜黄素联合用药与GANT61单独用药对HL-60细胞凋亡率比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论姜黄素和GANT61联合用药对HL-60细胞增殖具有协同抑制作用，显著促进HL-60细胞凋亡，而且与浓度和时间有关，姜黄素可能通过抑制Hedgehog信号通路而起作用。
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Hedgehog/Gli和PI3K/AKT信号通路的串话促进胃癌AZ521细胞上皮—间质转化
目的 探讨Hedgehog/Gli促进胃癌AZ521细胞上皮-间质转化(EMT)的肿瘤分子学机制.方法 GANT61处理AZ521细胞24 h后,用实时荧光定量PCR法观察GANT61对Gli1、Gli2、N-cadherin和E-cadherin mRNA表达的影响;用Western blotting观察 GANT61对Gli1、Gli2、p-AKT、AKT、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达的影响;用侵袭实验观察GANT61对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响;同时,应用N-Shh刺激Hedgehog通路观察相应指标的变化.结果 与对照组相比,GANT61组胃癌AZ521细胞的Gli1、 Gli2、N-cadherin mRNA表达显著下调,E-cadherin mRNA表达上调;Western blotting结果显示GANT61可以下调AZ521的Gli1、Gli2、 p-AKT、N-cadherin蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达.侵袭实验结果显示GANT61可以显著抑制AZ521细胞的侵袭能力.应用 N-Shh可以显著上调Gli1、Gli2、N-cadherin mRNA和蛋白表达以及p-AKT蛋白表达,下调E-cadherin mRNA及蛋白表达,促进肿瘤细胞侵袭转移. 结论 Gli1和Gli2表达下调可以抑制胃癌细胞的侵袭转移,可能与Gli通过PI3K/AKT途径促进EMT有关.
关键词： 胃癌 Hedgehog/Gli PI3K/AKT GANT61 上皮-间质转化 -
Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨以Gli为靶点的hedgehog信号通路抑制剂GANT61对人急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60增殖和凋亡的作用及机制.方法:采用CCK-8法观察不同浓度GANT61对HL-60细胞生长增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染检测GANT61对HL-60细胞凋亡的影响;RT-PCR检测48h时HL-60细胞中gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;免疫荧光检测48h时HL-60细胞中Gli1蛋白表达.结果:GANT61呈时间和浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖;GANT61呈浓度和时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡;GANT61呈浓度依赖性抑制gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;GANT61呈浓度依赖性抑制Gli1蛋白表达.结论:GANT61通过抑制Hedgehog-gli信号通路进而下调bcl-2和bcl-xl基因的表达,对人急性髓系白血病细胞HL-60起抑制增殖,并诱导其凋亡作用.
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激活Sonic hedgehog通路改善缺血缺氧心肌细胞DNA损伤
目的 探究 Sonic hedgehog 通路在糖氧剥夺( oxygen and glucose deprivation, OGD)诱导的乳鼠心肌细胞DNA损伤和细胞凋亡中的作用及机制.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,建立OGD的缺血缺氧模型,分别给予Sonic hedgehog通路激动剂 SAG1.3 (0.002 μmol·L-1)、抑制剂 GANT61 (0.005 μmol·L-1)处理6、12 h,MTT法检测细胞生存率;Western blot 检测DNA损伤标志物 γH2AX、DNA损伤反应蛋白ATM、ATR,以及细胞凋亡相关蛋白 p53、凋亡标志物cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax表达;免疫荧光检测 γH2AX表达.结果 与正常组相比,OGD组心肌细胞γH2AX、p-ATM表达呈时间依赖性增加, OGD 6 h达到高峰,OGD 12 h后表达逐渐下降;p-p53、cleaved-caspase-3表达增加,Bcl-2/Bax比例下降;与OGD 6 h、OGD 12 h组相比,给予SAG1.3组OGD心肌细胞γH2AX、p-ATM表达明显下降,心肌细胞存活率上升,p-p53、cleaved-caspase-3表达下降, Bcl-2/Bax比例上升;GANT61组OGD心肌细胞较OGD组γH2AX、p-ATM表达明显上升,细胞存活率下降, p-p53、 cleaved-caspase-3 表达上升, Bcl-2/Bax比例下降.结论 激活 Sonic hedgehog 通路可以通过抑制ATM磷酸化,减少γH2AX表达,改善缺血缺氧诱导的心肌细胞DNA损伤,抑制细胞凋亡.
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Gli通过PI3K/AKT促进食管鳞癌KYSE-30上皮-间质转化研究
目的 探讨Gli调节食管鳞癌KYSE-30细胞上皮-间质转化(EMT)的机制.方法 通过应用实时荧光定量PCR技术检测GANT61处理过的食管鳞癌KYSE-30细胞中Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin mRNA的表达;通过Western blot法检测 GANT61 处理的食管鳞癌 KYSE-30 细胞中 Gli1、Gli2、p-AKT、AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表达;再通过侵袭实验检测GANT61处理过的食管鳞癌细胞KYSE-30侵袭能力的变化;应用N-Shh刺激Hedgehog通路,后同时应用GANT61和 N-Shh 刺激 Hedgehog 通路.结果 GANT61与对照组DMSO相比可以显著下调食管鳞癌KYSE-30细胞相应mRNA指标表达( P＜0. 001);同时Western blot检测显示GANT61 可以下调 KYSE-30 的相应蛋白表达( P ＜0. 001).侵袭实验显示经 GANT61 处理后显著抑制了KYSE-30细胞的侵袭能力(P＜0. 001).应用N-Shh可以显著上调相应mRNA及蛋白的表达,同时可以促进肿瘤细胞的侵袭能力(P＜0. 001). GANT61&N-Shh组相比 GANT61组得到了部分恢复.结论 Gli1、 Gli2 表达下调可能通过PI3K/AKT途径抑制细胞的EMT过程而抑制食管鳞癌细胞的侵袭转移. Gli有望成为抑制食管肿瘤转移的有效靶点.
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Gli抑制剂GANT61对食管腺癌OE33细胞凋亡的诱导作用
目的 观察Gli抑制剂GANT61对食管腺癌OE33细胞凋亡的诱导作用,并探讨其机制.方法 培养人食管腺癌OE33,将细胞分为对照组、实验一组、实验二组,分别用0、10、20 μμmol/L浓度的GANT61处理24h.采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率,并采用Western blotting检测各组细胞Gli1、Gli2、Bcl-2、c-myc蛋白表达.结果 实验一组、实验二组、对照组细胞凋亡率分别为16.12％±1.52％、25.62％ ±0.93％、2.74％±0.34％,两两相比P均＜0.01.与对照组相比,实验一组、实验二组细胞Glil、Gli2、c-myc、Bcl-2蛋白表达低,且实验二组较实验一组表达低(P均＜0.05).结论 Gli抑制剂GANT61对食管腺癌OE33细胞凋亡具有诱导作用;GANT61可能是通过特异性抑制Gli1、Gli2蛋白表达从而调节细胞中Bcl-2和c-myc蛋白表达进而促进肿瘤细胞凋亡.
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抑制Hedgehog信号通路对肝细胞癌细胞生长和迁移的影响
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞中的作用及其机制.方法 选取2株HCC细胞系HepG2和Hep3B分成6组,分别为HepG2空白对照组、HepG2/GDC 0449组、HepG2/GANT61组、Hep3B空白对照组、Hep3B/GDC-0449组、Hep3B/GANT61组.HepG2/GDC-0449组、Hep3B/GDC-0449组采用GDC-0449(靶向SMO),HepG2/GANT61组、Hep3B/GANT61组采用GANT61(靶向GLI1/2)Hh信号通路抑制剂处理.采用实时PCR检测HCC细胞Patched1、Smoothened、Glioma1、vimentin和E cadherin mRNA表达水平,采用Western blot实验检测Patched1、Smoothened、Glioma1蛋白表达水平,采用克隆形成实验观察存活克隆计数与死亡细胞计数.结果 HepG2/GDC 0449组和HepG2/GANT61组与HepG2空白对照组比较,Hep3B/GDC-0449组和Hep3B/GANT61组与Hep3B空白对照组比较,Patched1、Smoothened和Glioma1 mRNA及蛋白表达均下调,存活克隆计数减少,死亡细胞计数增多,E-cadherin mRNA表达水平增高,vimentin mRNA表达水平降低(P＜0.05);HepG2/GANT61组较HepG2/GDC-0449组抑制作用更明显,Hep3B/GANT61组较Hep3B/GDC 0449组抑制作用更明显(P＜0.05).结论 GDC-0449和GANT61 2种抑制剂均可有效抑制HepG2和Hep3B细胞增殖、迁移和上皮间叶细胞转化,增加细胞凋亡,其中GANT61抑制作用更明显.抑制Hh信号通路可有效影响HCC细胞的生长和迁移.
关键词： 肝细胞癌 Hedgehog信号通路 GDC-0449 GANT61 -
GANT61通过自噬性细胞死亡抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖
目的 观察Hedgehog通路抑制剂GANT61对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用.方法 GANT61作用MCF-7细胞后,通过流式细胞术检测细胞死亡;提取处理细胞总RNA和蛋白.分别采用Real-time PCR和Westem blot检测Hedgehog通路SHH、Gli1、Gli2及自噬标志物LC3-Ⅱ表达;处理细胞固定后通过电子显微镜观察GANT61诱导的自噬体形态;自噬抑制剂3-MA处理细胞或自噬相关基因atg5 siRNA转染细胞后再用GANT61作用,流式细胞术检测细胞死亡数量.结果 GANT61能明显诱导MCF-7死亡,降低Hedgeho g通路SHH、Gli1、Gli2表达水平,提高LC3-Ⅱ蛋白表达,并可诱导MCF-7细胞产生自噬体.3-MA及atg5 siRNA可减弱GANT61诱导的细胞死亡.结论 GANT61通过诱导自噬性细胞死亡机制发挥抗乳腺癌细胞活性.
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GANT61诱导食管鳞癌细胞凋亡的作用及其机制
目的 研究Gli抑制剂GANT61诱导人食管鳞癌细胞OE21和KYSE-30凋亡的机制.方法 应用不同浓度(0、10、15 μmol/L)的GANT61处理OE21和KYSE-30细胞24 h后,Western blot观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1、Gli2、Fas和Bcl-2蛋白表达的影响.流式细胞术观察细胞凋亡及Fas、Bcl-2蛋白的表达.结果 Westemblot显示GANT61可以剂量依赖性显著下调OE21和KYSE-30细胞Gli1、Gli2和Bcl-2蛋白表达,增加Fas蛋白表达.流式细胞术检测显示不同浓度GANT61作用24 h后,OE21和KYSE-30细胞表现出不同程度的细胞凋亡并且呈药物剂量依赖性,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P=0.000);与空白对照组相比,OE21和KYSE-30细胞中Bcl-2蛋白表达水平显著降低且呈药物剂量依赖性,差异均有统计学意义(P=0.000);Fas蛋白表达水平显著增加且呈药物剂量依赖性,差异均有统计学意义(P=0.000).结论 GANT61明显诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其通过特异性抑制OE21和KYSE-30细胞中Gli1、Gli2表达从而调节Fas和Bcl-2蛋白表达有关.
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Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞生长的抑制作用
目的 研究GANT61对人肺癌细胞H1703和A549生长抑制作用,并探讨其作用机制.方法 培养H1703和A549细胞,加入不同浓度GANT61 72 h后MTS法检测药物对细胞生长的抑制率;Western blot法观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对Gli1和Gli2蛋白表达的影响.Transwell侵袭实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对侵袭能力的影响.结果 MTS显示GANT61作用于H1703和A549的IG50值分别是8.6μmol/L和8.2μmol/L,GANT61对H1703和A549细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性.Western blot显示GANT61可显著下调H1703和A549细胞Glil和Gli2蛋白的表达.Transwell侵袭实验显示GANT61处理组H1703和A549细胞的侵袭能力均明显下降.结论 GANT61可以明显抑制H1703和A549的细胞活力和侵袭能力,这表明Hedgehog通路的Glil和Gli2在肺癌的发生和发展中起着重要作用,Gli有望成为新的抗肿瘤靶点.
关键词： 肺癌 Hedgehog信号通路 GANT61 Gli-1蛋白 Gli-2蛋白 -
GANT61对Hela细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响
目的:研究Gli抑制剂GANT61作用于Hela细胞后Gli1、FoxM1及Cyclin D1的表达变化及细胞的增殖活力与侵袭迁移能力的影响,并分析其相关分子机制,以期为宫颈癌的治疗提供新的靶点.方法:采用CCK-8法检测不同浓度GANT61对Hela细胞增殖活力的影响;流式细胞仪检测Hela细胞的细胞周期的分布变化;RT-PCR、Western Blot分别检测Gli1、FoxM1、Cyclin D1相应的mRNA水平及蛋白表达水平;Transwell小室模型及Matrigel基质胶实验分别检测Hela细胞的迁移与侵袭能力.结果:①GANT61可剂量依赖性的降低Hela细胞的增殖活力,其抑制Hela细胞的IC50值约为36.337 μmol/L,且细胞周期主要被阻滞在G2/M期(P＜0.01);②随着GANT61浓度的增加,Gli1、Cyclin D1、FoxM1相应mRNA的表达水平逐渐降低(P＜0.01),其相应蛋白的表达水平也降低;③Transwell实验显示,实验组Hela细胞穿膜数量明显低于对照组(P＜0.01).结论:①GANT61可抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、侵袭及迁移能力,且该作用是通过抑制Gli1的表达,进而影响FoxM1的转录活性从而阻断细胞周期的进展来实现的;②FoxM1很可能是Gli1下游的直接作用靶点.
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Hedgehog通路阻滞剂GANT61对胰腺癌细胞株的抑制作用
目的:探讨Hedgehog信号通路特异性阻滞剂GANT61抑制本通路在胰腺癌细胞株中的表达,观察胰腺癌细胞株增殖、迁移等能力的改变,为胰腺癌的治疗提供基础实验数据.方法:采用多株胰腺癌细胞,半定量RT-PCR法从中检测出Hedgehog通路表达相对活跃的细胞株,采用不同浓度的GANT61处理细胞株后,MTT法检测细胞株增殖活力改变,细胞划痕实验检测细胞迁移能力改变.结果:采用GANT61处理后,随着浓度的增加,胰腺癌细胞株增殖活力下降,迁移能力降低.结论:GANT61可通过抑制Hedgehog信号通路的表达,有效抑制胰腺癌细胞株的增殖、迁移等,为GNAT61药物在临床治疗胰腺癌提供扎实的理论基础.
关键词： 胰腺癌 Hedgehog通路 GANT61 -
Gli抑制剂诱导胃癌细胞凋亡作用的研究
目的 研究Gli抑制剂GANT61对人胃癌细胞AZ521和AGS凋亡的作用.方法 应用不同浓度(0、10、20μmol/L)的GANT61处理AZ521和AGS细胞24 h后,蛋白免疫印迹法(Western blot)观察GANT61作用于AZ521和AGS细胞后对Gli-1、Gli-2、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响.流式细胞术观察细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果 Western blot结果显示GANT61可以剂量依赖性显著下调AZ521和AGS细胞Gli-1、Gli-2和Bcl-2蛋白表达和增加Caspase-3蛋白表达.流式细胞术检测显示10 μmol/L GANT61作用AZ521,AGS细胞后凋亡率为(19.37±0.81)％和(16.1±0.26)％,显著高于0 μmol/L GANT61凋亡率(4.23±0.35)％和(6.00±0.87)％(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GAN761的AZ521细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为355.33±10.12、312.67±7.37,与0μmol/L GANT61 423.33±11.37相比显著降低(P＜0.05);10μmol/L和20 μmol/L GAN761的AGS细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为306.67±4.16、273.33±8.02,与0 μmol/L GANT61388.33±11.06相比显著降低(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AZ521细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为305±9.64、360.24±8.54,与0 μmol/L GANT61 261.12±11.53相比显著增高(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AGS细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为255.00±6.56、310.67±8.50,与0μmol/L GANT61 198.33±2.50相比显著增高(P＜0.05).结论 GANT61通过特异性抑制Gli-1,Gli-2蛋白表达从而调节AZ521和AGS细胞中Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平,诱导细胞凋亡.
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Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞上皮-间质转化作用的研究
目的：研究GANT61对人肺癌细胞 H1703和 A549的上皮‐间质转化（EMT）的影响，并初步探讨其作用机制。方法以二甲基亚砜（DMSO）作为对照（DMSO组），用GANT61处理H1703和A549细胞24 h后，采用实时荧光定量PCR法检测Gli‐1、Gli‐2、E‐cadherin和Vimentin基因变化；蛋白质印迹法（Western blotting）观察GANT61作用于 H1703和A549细胞后对E‐cadherin和Vimentin蛋白表达的影响，划痕愈合实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果与DMSO组比较，实时荧光定量PCR结果显示GANT61可下调H1703和A549细胞Gli‐1、Gli‐2及Vimentin mRNA的表达，升高E‐cadherin mRNA的表达（P＜0．01）；Western blotting显示，GANT61可以下调H1703和A549细胞Vimentin蛋白表达，升高E‐cadherin蛋白表达（P＜0．01）；划痕愈合实验显示，GANT61处理组 H1703和A549细胞的侵袭能力明显下降（P＜0．01）。结论肺癌的EMT与 Hedgehog信号转导通路中Gli‐1和Gli‐2的异常激活有关，GANT61通过下调Gli‐1和Gli‐2的表达影响肺癌细胞的EM T能力，Gli可能成为抑制肺癌细胞转移的新的分子靶点。
关键词： 肺癌 Hedgehog信号通路 GANT61 Gli蛋白 上皮-间质转化 -
Wortmannin和LiCl对AML细胞系Hedgehog/gli通路的调节作用
目的:研究通路阻断剂Wortmannin和LiCl对急性髓细胞白血病细胞系Hedgehog/gli通路的调节作用.方法:选取HL-60和K562细胞系,采用Western blot方法检测gli1和gli2蛋白表达,定量PCR检测gli1和gli2 mRNA的变化,WST-1检测不同通路阻断剂联合对细胞增殖的抑制作用.结果:Wortmannin和LiCl均可以上调两细胞系中gli蛋白和mRNA的表达,并可减弱gli阻断剂GANT61对AML细胞系的毒性作用.结论:Wortmannin和LiCl可以上调AML细胞系中Hedgehog通路的表达.
关键词： 急性髓细胞白血病 Hedgehog Wortmannin 氯化锂 GANT61
