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NF-кB与P-gp在肝细胞肝癌组织中的表达
目的 探讨核转录因子(NF-кB)与P糖蛋白(P-gp)在肝细胞肝癌(HCC)及癌旁肝组织的表达及其相互关系.方法 采用免疫组织化学S-P法检测30例HCC中NF-кB、P-gp的表达情况,以30例相应癌旁肝组织作为对照组,所得结果用统计学卡方检验及列联表等相关分析进行比较.结果 NF-кB蛋白在HCC、癌旁肝组织中阳性表达率分别为63.3%(19/30)、16.7%(5/30),HCC与癌旁肝组织中NF-кB蛋白表达差异有显著性(P＜0.05);P-gp蛋白在HCC、癌旁肝组织中阳性表达率分别为83.3%(25/30)、30%(9/30),HCC与癌旁肝组织表达差异有显著性(P＜0.05).NF-кB蛋白的表达与P-gp蛋白的表达呈正相关(r=0.89,P＜0.05).结论 NF-кB和P-gp在HCC中的表达提示其可能参加了HCC和多药耐药的发生.NF-кB与P-gp在HCC表达中呈正相关,提示NF-кB与P-gp可能介导的多药耐药,共同参与了HCC多药耐药机制.
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单次地塞米松治疗对实验性脑出血后肺、脑组织的保护作用及机制
目的 研究单次地塞米松(Dex)治疗对脑出血(ICH)后肺、脑组织的保护作用及可能机制.方法 采用立体定向技术自体血尾状核注入法制备SD大鼠ICH模型,将大鼠分为假手术组、ICH模型组和Dex治疗组.采用HE染色观察血肿周围组织与肺组织的炎症反应情况,采用透射电镜观察各组肺组织超微结构变化.采用RT-PCR法半定量检测NF-кB p65 mRNA及糖皮质激素受体α(GRα)mRNA在脑与肺中的表达情况.结果 (1)ICH模型组脑水肿明显,血肿周围炎症反应重,肺组织损伤以间质性肺炎表现为主,肺泡结构破坏;Dex治疗组脑水肿较ICH模型组明显减轻,肺组织炎性反应减少.(2)NF-кB p65 mRNA表达,ICH模型组脑出血后血肿周围脑组织(0.44±0.08)和肺组织(0.69±0.16)均较假手术组(分别为0.27±0.05和0.26±0.04)增高(P<0.01),Dex治疗组脑(0.17±0.14)及肺(0.17±0.03)组织中NF-кB p65 mRNA均明显低于ICH模型组和假手术组(P<0.01);ICH模型组GRα mRNA表达水平,无论在脑组织(0.47±0.07)还是在肺组织(0.49±0.07)均低于假手术组(分别为0.64±0.03和0.65±0.13)(P<0.01),Dex治疗组脑组织(1.01±0.09)和肺组织(0.89±0.08)GRα mRNA表达较ICH模型组和假手术组均明显增强(P<0.01).结论 ICH后早期、单次给予Dex治疗可减轻脑组织损害,亦可明显改善继发肺损害,其可能作用机制为Dex提高了GRα mRNA水平并抑制NF-кB p65 mRNA表达.
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核转录因子-кB对过氧化物酶增殖体激活受体γ调控作用的体外研究
目的 观察脂多糖(LPS)作用下小鼠巨噬细胞(Ana-1)过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)的表达,并通过调控核转录因子-кB(NF-кB)表达观察PPART相应的变化情况.方法 将体外培养的Ana-1细胞按随机数字表法分为对照组,0.1 mg/L LPS作用1、2、4、8 h组,50 mg/L SN50作用4 h组(SN50组),NF-кB高表达质粒转染组.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PPARγ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α蛋白表达.构建NF-кB高表达质粒,利用脂质体转染巨噬细胞并通过G418筛选出稳定表达株,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测LPS、SN50作用后及质粒转染后细胞核内PPARγ表达和NF-кB p65亚基核移位情况.结果 在致炎因子LPS作用下,PPARγ的mRNA和蛋白表达均下降.这一变化伴随p65核移位增加和炎症因子TNF-α的升高(P均＜0.05).成功构建了NF-кB p65亚基高表达质粒并将其转染到巨噬细胞中实现了p65高表达.LPS刺激和NF-кB p65亚基高表达质粒转染Ana-1细胞造成p65表达升高时,核内PPARγ表达减少(r=-0.913,P＜0.05);而使用NF-кB抑制剂SN50作用Ana-1细胞抑制p65表达后,核内PPARγ表达升高(r=-0.959,P＜0.05),二者具有良好的负相关性.结论 在LPS作用下,Ana-1细胞内PPARγ表达降低,而这一变化与NF-кB活化相关,调节NF-кB p65亚基表达,PPARγ会向p65改变的相反方向变化.
关键词： 过氧化物酶增殖体激活受体γ 核转录因子-кB 巨噬细胞 调控 -
胃癌中NF-кB与COX-2表达的研究
目的 探讨NF-кB、COX-2的表达与胃癌的关系及临床意义.方法 采用免疫组织化学方法(S-P法)对胃癌组织、正常胃黏膜中NF-кB p65及COX-2蛋白表达进行检测.结果 NF-кB p65蛋白和COX-2蛋白在胃癌组织中的阳性表达率分别为67%和60%,正常胃黏膜中的阳性表达率分别为21%和18%,2者比较均有显著性差异(P均<0 01).在低分化组的阳性表达率分别为79%和72%,高/中分化组的阳性表达率分别为53%和47%,2者比较均有显著性差异(P均<0.05);在浸润深度为T3+T4组的阳性表达率分别为73%和66%,T1+T2组的阳性表达率分别为22%和22%,2者比较均有显著性差异(P<0.01);在临床Ⅲ~Ⅳ期组的阳性表达率分别为78%和74%,Ⅰ~Ⅱ期组的阳性表达率分别为48%和37%,2者比较均有显著性差异(P均<0.01).不同性别、年龄、肿瘤部位及大体分型胃癌组织中NF-кB p65和COX-2蛋白的表达无显著性差异(P均>0.05).胃癌组织中 NF-кB p65和COX-2蛋白的表达呈明显正相关(rs=0.539,P<0.01).结论 胃癌组织中的NF-кB和COX-2表达增高,提示其与胃癌的发生、发展、侵袭、淋巴转移密切相关.
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产前应激子代大鼠海马核转录因子-кB表达的性别差异
本研究采用免疫组织化学和Western blot检测NF-кB p65/p50在产前应激子代海马的表达,并探讨其表达是否存在性别差异.研究结果显示,在雌性子代,中、晚期应激组海马齿状回p65表达显著低于对照组(P＜0.01),而海马各区p50表达均显著高于对照组(P＜0.01),中、晚期应激组间p65和p50表达均有显著差异(P＜0.01).在雄性子代,中、晚期应激组海马齿状回p65表达显著高于对照组(P＜0.01),晚期应激组海马各区p50表达均显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),中、晚期应激组间p65和p50表达均有显著差异(P＜0.01).雌、雄子代比较,对照组雌、雄p65表达差异极显著(P＜0.01),p50仅在海马CA1区表达差异极显著(P＜0.01);中期应激组雌、雄子代大鼠海马p65/p50表达无显著差异;晚期应激组雌、雄海马p65/p50表达均有极显著差异(P＜0.01).Western blot与免疫组织化学结果基本一致.结果表明,产前不同时期的应激显著影响子代海马NF-кB p65和p50表达,且有性别差异,这可能是产前应激对子代雌、雄大鼠学习记忆能力影响差异的机制之一.
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肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中核因子-кB活化及单核细胞趋化蛋白-1表达
目的:探讨核因子-кB(NF-кB)活化在肾毒血清性肾炎发病机制中的作用.方法:肾毒血清肾炎应用兔抗鼠肾小球基底膜肾毒血清制备.应用凝胶电泳迁移率检测肾组织中NF-кB活化;采用免疫组化及彩色病理图文分析系统观察肾小球及肾小管中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达,并分析其与蛋白尿和肾小球细胞数之间的关系.结果:模型组肾组织中NF-кB活化较正常对照组显著上调;肾小球及肾小管中MCP-1表达分别为(24.37±7.06)个/肾小球横切面(gcs)和(54.78±11.49)%,较正常对照组显著升高(P＜0.01),肾组织中NF-кB活化和MCP-1表达与单核细胞浸润和蛋白尿密切相关.结论:NF-кB活化在肾小球肾炎发病机制中发挥重要作用.
关键词： 核转录因子-кB 肾小球肾炎 单核细胞趋化蛋白-1 -
NF-кB抑制剂PDTC联合阿霉素对肝癌HepG2细胞增殖的影响
目的 探讨核转录因子-кB ( NF-кB)抑制剂毗咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)与阿霉素(ADM)联合应用对抑制HepG-2 细胞增殖的效应及其机制.方法 培养人肝癌HepG-2 细胞株,分为空白组,ADM组、PDTC组、PDTC+ADM组,观察HepG-2 细胞的生长情况,MTT比色法检测细胞增殖,利用中效原理判定药物合用的效果,免疫组化检测NFкB P65表达情况.结果 ADM及PDTC均可有效抑制细胞的生长,联合用药的中效浓度比单用时减少明显.阿霉素和PDTC两药小剂量合用时可产生协同作用C1<1.PDTC +ADM组NFкBp65 表达显著低于正常肝癌细胞组(P<0.05).结论 PDTC和ADM均可抑制肝癌细胞的生长,小剂量合用产生协同作用,其协同机制可能与PDTC抑制阿霉素对 NF кB的激活有关.
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脂多糖对正常人肝内胆管上皮细胞TLR4-NF-кB通路的影响
目的：探讨脂多糖( LPS)对正常人肝内胆管上皮细胞( HiBECs)中TLR4-NF-кB通路的影响。方法 HiBECs常规细胞培养后,加入不同浓度的LPS(0．1、1、4、8、10μg/mL),刺激不同时间(3、6、9、12、24 h),用Realtime RT-PCR分析细胞内TLR4和NF-κB mRNA表达水平。结果 LPS刺激HiBECs后TLR4和NF-κB mRNA表达水平均增加,HiBECs在受到LPS(4μg/mL)刺激后TLR4和NF-κB mRNA表达水平随时间延长而增加,于6小时达高峰,之后下降。以相同时间(6 h)刺激HiBECs后,TLR4和NF-κB mRNA表达水平随LPS浓度增高而增加,LPS浓度为4μg/mL时达高峰,之后下降。结论 LPS可以激活HiBECs中的TLR4-NF-кB通路,并且有时效和量效依赖关系。
关键词： 人正常肝内胆管上皮细胞 脂多糖 Toll样受体4 核转录因子-кB -
肝细胞癌变过程中核转录因子-кB表达的基础与临床研究
目的 观察肝细胞癌(HCC)形成过程中核转录因子-кB(NF-кB)动态改变及临床价值.方法 雄性SD大鼠以2-乙酰氨基芴(2-FAA)制备肝癌模型,经病理组织学分析肝细胞形态学变化,定量观察NF-кB动态变化.并以自身配对法收集经手术切除后的肝癌及其痛周组织,定量分析肝癌组织中NF-кB表达及病理学特征.结果 诱癌后肝细胞发生颗粒样变性、不典型增生、到高分化肝细胞癌形成;在此过程中,NF-кB表达呈梯度增加.NF-кB阳性表达呈棕黄色颗粒状染色,癌组织NF-кB点灶状表达,定位于胞浆和细胞核;癌周组织NF-кB主要定位于胞浆,未见细胞核阳性.人肝癌组NF-кB明显高于癌周组织(P<0.01),癌组织NF-кB表达阳性率为100%,癌周组织为68.6%(x2=13.1,P<0.01).其表达与分化程度、肿瘤数目和肿瘤直径无关.结论 NF-кB表达参与肝癌的发生、发展,活性抑制可能是肝癌基因治疗的新靶点.
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美托洛尔对扩张型心肌病患者外周血单个核细胞炎性细胞因子表达和核转录因子κB/p65活化的影响
目的:观察美托洛尔对扩张型心肌病(DCM)心力衰竭患者外周血单个核细胞(PBMCs)炎性细胞因子表达和核转录因子κB/p65(NF-κB/p65)活化的影响.方法:选取心功能Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级DCM心力衰竭患者35例,清晨采外周静脉血并分离出PBMCs,加入细胞因子刺激剂脂多糖(LPS)和不同浓度(0、2.5、5及10 μmol/L)的美托洛尔,经体外培养24 h,离心后提取上清液并采用放射免疫法检测细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并将细胞悬液固定后采用免疫组织化学染色法,进行NF-κB染色,测定NF-κB阳性细胞率,分析二者相关性.结果:不同剂量美托洛尔对DCM患者IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-кB/p65的水平均有抑制作用(均P＜0.01);2.5、5及10 μmol/L的美托洛尔组IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB/p65的水平均明显低于0 μmol/L组(均P＜0.05);10 μ mo]/L美托洛尔组IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB/p65的水平均明显低于2.5、5 μmol/L组(均P＜0.05),而2.5、5μmol/L组IL-1β、IL-6、TNF-α和NF-κB/p65的水平差异无统计学意义(均P＞0.05);在不同浓度美托洛尔组NF-κB/p65水平和IL-1β、IL6、TNF-α水平均有明显正相关性(相关系数r值分别为0.592、0.528、0.486,P＜0.01和P＜0.05).结论:在DCM心力衰竭患者中,美托洛尔可呈剂量依赖性抑制LPS诱导的PBMCs炎性细胞因子表达增加,可能是通过下调NF-κB/p65活化水平来实现的.这可能是其改善DCM心力衰竭患者心功能的作用机制之一.
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胃癌组织中β-Catenin与NF-кB的表达及其对预后的影响
采用S-P免疫组织化学方法检测56例胃癌组织(胃癌组)及22例良性疾病胃组织(对照组)中β-Cat和NF-кB的表达情况,分析其与胃癌的临床特征和预后的关系.结果示,β-Cat和NF-кB在胃癌组中的表达阳性率明显高于对照组 (P＜0.05) ,分别为69.64%和66.07%.β-Cat的表达与肿瘤病理分化程度、有无淋巴结转移、病理分型及浸润深度有关(P＜0.05) .NF-кB的表达与肿瘤大小、有无淋巴结转移、病理分型及浸润深度有关(P＜0.05) .β-Cat,NF-кB在胃癌组织中的表达密切相关(rS=0.541, P＜0.01) .β-Cat和NF-kB的过表达与胃癌患者的5年生存率有关.它们是患者预后的独立影响因素.提示:β-Cat和NF-кB有可能在胃癌的发生、发展中发挥重要作用.
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葛根素对糖尿病大鼠心肌损伤的影响
目的:探讨葛根素对糖尿病大鼠心肌的形态结构、功能及NF-кB表达的影响.方法:以45mg/kg剂量一次性尾静脉注射链脲佐茵素建立SD大鼠实验性糖尿病模型.应用葛根素(40mg/kg·d、80mg/kg·d)腹腔注射治疗8周后,测定各组大鼠血糖、血清LDH、CK含量及心肌组织SOD活性、MDA含量,检测心功能,应用光镜、电镜观察大鼠心肌形态结构,免疫组化方法观察心肌组织NF-кB表达情况.结果:与糖尿病模型组比较,葛根素治疗组大鼠血糖水平稍降,血清LDH、CK含量及心肌组织MDA含量显著降低,而高剂量组SOD活性明显增强,左心室功能、心肌形态结构尤其是超微结构明显改善,心肌组织NF-кB阳性表达明显减少.结论:葛根素对糖尿病大鼠心肌具有一定的保护作用,能明显改善心功能和心肌超微结构,可能与其减弱糖尿病大鼠心肌过氧化损伤及减少心肌组织NF-кB阳性表达有关.
