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Kindlin-2对血管平滑肌细胞迁移和黏附的影响及其机制的实验研究
目的 探讨Kindlin-2 RNA干扰对血管平滑肌细胞(VSMC)迁移、黏附以及β1整合素的影响,并进一步探讨Kindlin-2与β1整合素之间的关系.方法 构建Kindlin-2小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体感染原代培养的VSMC.实验分为空白对照组、阴性对照组和Kindlin-2 siRNA组.通过Transwell和细胞划痕实验检测VSMC的迁移能力.细胞基质黏附实验检测VSMC黏附细胞外基质的能力.实时定量PCR和Western blot分别检测Kindlin-2与β1整合素的mRNA和蛋白表达水平.流式细胞技术检测VSMC表面总β1整合素和激活β1整合素的表达.结果 Kindlin-2siRNA慢病毒感染VSMC的效率达90％以上.Kindlin-2 siRNA组VSMC迁移数量低于空白对照组和阴性对照组(P均＜0.05),且VSMC迁移的距离较空白对照组和阴性对照组短(P均＜0.05).Kindlin-2 siRNA组VSMC黏附胶原Ⅰ的数量较空白对照组和阴性对照组少(P均＜0.05),另外A590nm也较空白对照组和阴性对照组低(P均＜0.05).Kindlin-2 siRNA组Kindlin-2 mRNA表达水平较空白对照组低了47％ (P＜0.05),但β1整合素mRNA表达水平与空白对照组比较差异无统计学意义.Kindlin-2 siRNA组Kindlin-2蛋白表达水平较空白对照组和阴性对照组低(P均＜0.05),3组间β1整合素蛋白表达水平差异无统计学意义.Kindlin-2 siRNA组VSMC表面激活β1整合素表达水平低于空白对照组和阴性对照组(P均＜0.05),而细胞表面总β1整合素表达水平与空白对照组和阴性对照组比较差异均无统计学意义.结论 Kindlin-2可以调节VSMC的迁移和黏附,激活VSMC表面β1整合素.
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Kindlin-2诱导胆囊癌细胞上皮间质转化促进其侵袭转移的实验研究
目的 探讨黏着斑蛋白Kindlin-2对胆囊癌细胞生物学行为的影响及相关分子机制.方法 收集2012年9月至2013年5月在郑州大学第一附属医院肝胆胰外科接受手术切除的30例胆囊癌组织和癌旁组织标本.使用real-time PCR和免疫组化方法检测胆囊癌组织和癌旁组织标本中Kindlin-2表达水平;通过构建质粒和转染使胆囊癌细胞株GBC-SD、SGC-996过表达Kindlin-2,应用细胞黏附实验观察胆囊癌细胞与胞外基质的黏附能力,通过Transwell侵袭实验及细胞划痕实验观察胆囊癌细胞的侵袭迁移能力改变;采用免疫印迹法检测过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞上皮间质转化相关标记蛋白的变化.分别使用t检验和 χ2检验对计量资料和计数资料进行统计学分析.结果real-time PCR和免疫组化检测结果显示,Kindlin-2在人胆囊癌组织中表达水平高于癌旁组织(t=4.372,P=0.001;t=7.477,P=0.000),肿瘤组织Kindlin-2表达水平与Nevin分期密切相关(χ2=5.932,P=0.035);细胞黏附实验结果显示,过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株GBC-SD、SGC-996与细胞外基质分子纤连蛋白Fibronectin的黏附能力较对照组增强(1.66±0.03比1.07±0.22,t=2.710,P=0.041;2.66±0.24比1.03±0.02,t=6.610,P=0.020);Transwell侵袭实验结果显示,过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株GBC-SD、SGC-996穿过Transwell小室基质的细胞数较对照组明显增多(116.1±13.9比54.7±8.4,t=3.781,P=0.0194;136.3±7.5比64.3±6.4,t=7.302,P=0.002);细胞划痕实验结果显示,过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株GBC-SD 12 h和24 h划痕修复率高于对照组[(42.9±2.2)％比(29.7±1.7)％,t=4.690,P=0.009;(65.0±2.4)％比(40.4±2.0)％,t=7.945,P=0.001],过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞株SGC-99612 h和24 h划痕修复率高于对照组[(32.9±1.3)％ 比(24.1±1.5)％,t=4.518,P=0.011;(51.3±1.1)％ 比(39.2±1.1)％,t=8.001,P=0.001];免疫印迹法检测结果显示,过表达Kindlin-2后胆囊癌细胞间质化表型神经钙黏素、波形蛋白表达上调而上皮化表型上皮钙黏素表达降低.结论 Kindlin-2在胆囊癌组织中表达水平升高,且可通过诱导上皮细胞间质转化促进胆囊癌细胞与胞外基质黏附、侵袭迁移等恶性行为.
关键词： 胆囊肿瘤 上皮细胞-间充质细胞转换 Kindlin-2 -
乳腺浸润性微乳头状癌组织整合素β1和Kindlin-2表达的研究
目的 探讨整合素β1和Kindlin-2在乳腺浸润性微乳头状癌(invasive micropapillary carcinoma,IMPC)组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学方法检测天津医科大学肿瘤医院2005-01-01-2008-12-31收治的99例乳腺IMPC病例中整合素β1和Kindlin-2的表达,并选取该院同期诊断的132例乳腺浸润性导管癌非特殊型(invasive ductal carcinoma,not otherwise specified,IDC-NOS)病例作为对照,分析两种蛋白间及其与临床病理学特征之间的关系.结果 IMPC组织中整合素β1阳性表达率为30.3％(30/99),明显高于IDC-NOS组织的16.7％(22/132),差异有统计学意义,x2＝6.031,P=0.014;而Kindlin-2在IMPC组织中阳性表达率为64.6％(64/99),也明显高于IDC-NOS组织中的50.8％(67/132),差异也有统计学意义,x2=4.445,P=0.035.且IMPC组织中两种蛋白的表达呈低度正相关性,r=0.212,P=0.035.IMPC组织中整合素β1的表达与HER-2(r=0.426,P＜0.001)、E-CD(r=0.217,P=0.031)及淋巴结转移(r=0.207,P=0.040)呈明显的正相关,与pTNM分期无相关性(P＞0.05),而Kindlin-2的表达则与HER-2(r=0.212,P=0.035)、E-CD(r=0.218,P=0.030)、淋巴结转移(r=0.294,P=0.003)以及pTNM分期(r=0.245,P=0.015)均呈正相关性;整合素β1和Kindlin-2的表达与其他临床病理学特征均无明显相关性,P＞0.05.生存分析发现,IMPC组织中整合素β1阳性表达患者的无病生存期(x2 =3.982,P=0.046)和总生存期(x2=5.407,P=0.020)均明显低于整合素β1阴性表达的患者,而Kindlin-2的表达水平与患者生存之间则无相关性,P＞0.05.结论 整合素β1和Kindlin-2在乳腺IMPC组织中高表达,且可能与IMPC极性倒转、集团性侵袭和高淋巴结转移密切相关,为深入探讨乳腺IMPC的发病机制和预测预后提供了新思路.
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结直肠癌术后组织中Kindlin-2、整合素β1和VEGF蛋白的表达及意义
结直肠癌是一种具有高度侵袭性的肿瘤,其发生发展的分子生物学机制复杂.Kindlin-2作为黏着斑蛋白家族的重要成员,对黏附细胞可以形成有效的调节,进而对肿瘤的进展形成有效的促进[1,2].整合素β1是重要的黏附分子,与Kindlin-2可能在黏附分子调节的角度有共同作用,同时整合素β1还可以调节基质降解和信号转导,在肿瘤形成、生长、分化、血管形成和转移中起重要的作用[3].血管内皮生长因子(VEGF)对血管生成的促进作用明显,Kindlin-2和整合素β1可能和VEGF有关联.本研究采用流式细胞技术,检测结直肠癌及正常结肠组织中Kindlin-2、整合素β1和VEGF蛋白表达情况,探讨Kindlin-2、整合素β1和VEGF表达的关系.
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原发性肝癌中Kindlin-2蛋白对血管生成的作用
目的 检测原发性肝癌中Kindlin-2蛋白对血管生成的作用,探讨其在不同临床特征中的表达差别.方法 以97例原发性肝癌标本为观察组,60例正常肝组织为对照组,采用流式细胞技术,分别检测两组中Kindlin-2、血管内皮生长因子(VEGF)和CD34表达.结果 Kindlin-2、VEGF和CD34蛋白在原发性肝癌中高表达,Kindlin-2、VEGF和CD34表达与肿瘤体积、转移及Ki67增殖指数有关；相关性分析显示Kindlin-2、VEGF和CD34之间均呈正相关性.结论 Kindlin-2、VEGF和CD34高表达对原发性肝癌进展有重要促进作用,Kindlin-2可能介导VEGF分泌增强而诱导CD34阳性的肿瘤血管生成.
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非小细胞肺癌组织中Kindlin-2与Kiss-1表达的关系
目的 观察非小细胞肺癌组织中Kindlin-2与Kiss-1的表达及相关性,关注其表达在不同临床病理特征中的差别.方法 收集89例非小细胞肺癌标本作为观察组,53例正常肺组织作为对照组,采用流式细胞术检测二组中Kindlin-2与Kiss-1的表达,分析其在不同临床特征中的表达差别.结果 观察组中Kindlin-2的表达量明显高于对照组,而观察组中Kiss-1的表达量明显低于对照组,非小细胞肺癌中Kindlin-2与Kiss-1的表达与肿瘤的淋巴结转移、胸膜侵犯及Ki67的表达密切相关.线性相关分析显示观察组中Kindlin-2与Kiss-1的表达呈负相关性.结论 非小细胞肺癌中Kindlin-2与Kiss-1的表达具有协同作用,共同促进肿瘤的进展.术后联合检测Kindlin-2与Kiss-1的表达可能对判断预后有一定帮助.
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喉鳞状细胞癌患者癌组织Kindlin-2与整合素β表达的关系
目的 观察喉鳞状细胞癌组织中Kindlin-2与整合素β蛋白的表达及其临床意义,以指导预后判断及临床治疗.方法 收集85例喉鳞状细胞癌标本为观察组,60例正常喉黏膜为对照组,应用免疫组织化学技术检测两组Kindlin-2与整合素β蛋白表达.结果 喉鳞状细胞癌Kindlin-2与整合素β表达阳性率明显高于正常喉黏膜组织,Kindlin-2与整合素β表达与TNM分期、Ki67表达及淋巴结转移密切相关,喉鳞状细胞癌Kindlin-2与整合素β表达与患者生存密切相关.结论 Kindlin-2与整合素β在喉鳞状细胞癌发生发展中具有重要作用,联合检测Kindlin-2与整合素β可能与喉鳞状细胞癌预后密切相关.
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老年骨肉瘤患者术后组织中Kindlin－2、furin和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因的表达及意义
目的：检测老年骨肉瘤患者术后组织中Kindlin－2蛋白（Kindlin－2）、弗林蛋白酶（Furin）和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（ PTEN）的表达，分析三者的关系及临床价值。方法78例骨肉瘤术后组织作为观察组，选择60例骨样骨瘤术后组织作为对照组，应用免疫组化方法检测两组中Kindlin－2、Furin和PTEN的表达。结果两组中Kindlin－2、Furin和PTEN表达的阳性率差别有统计学意义。观察组中三种蛋白表达的阳性率均与肿瘤的大径线、有无软组织浸润及不同 Ennecking分期相关。观察组中 Kindlin－2和 PTEN、Furin和 PTEN的表达均呈负相关性。结论老年骨肉瘤患者术后组织Kindlin－2和Furin高表达，PTEN低表达，不仅促进肿瘤的发生，还促进肿瘤的进展。 Kindlin－2和 Furin 对骨肉瘤的作用可能与其下调PTEN的表达有关。
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PTEN、Kindlin-2和DcR3在老年结直肠癌的表达及其对预后的判断价值
目的：探讨PTEN、Kindlin-2和DcR3在老年结直肠癌的表达及其对预后的判断价值。方法选取80例健康对照者为对照组，80例结直肠癌患者为观察组，应用流式细胞术检测结肠黏膜组织PTEN、Kindlin-2和DcR3蛋白的表达。比较各组PTEN、Kindlin-2和DcR3表达情况及其与结直肠癌患者不同临床特征的关系，PTEN、Kindlin-2和DcR3蛋白表达量与患者生存的关系。结果相比于对照组，观察组 PTEN蛋白表达量明显下降（P＜0.05）；观察组Kindlin-2蛋白表达量明显上升（P＜0.05）；观察组DcR3蛋白表达量明显上升（P＜0.05）。 PTEN、Kindlin-2和 DcR3的表达与结直肠癌的淋巴结转移、Dukes分期及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达密切相关（P＜0.05）。结直肠癌患者PTEN（χ2＝12.23，P＝0.031），Kindlin-2（χ2＝7.23，P＝0.042）与DcR3（χ2＝14.35，P＝0.021）与生存密切相关，PTEN蛋白表达阴性、Kindlin-2蛋白表达阳性、DcR3蛋白表达阳性的患者预后较差。结论结直肠癌中PTEN、Kindlin-2和DcR3异常表达对肿瘤的进展有重要意义，联合检测三者表达可能有助于预后判断。
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Kindlin-2介导足细胞损伤在局灶节段肾小球硬化症模型小鼠发病中的作用研究
目的 探讨Kindlin-2介导足细胞损伤在局灶节段肾小球硬化症模型小鼠发病中的作用.方法 8周龄雄性BALB/C小鼠分为正常对照组和模型组,各18只.模型组小鼠注射阿霉素(ADR,浓度2mg/mL,剂量10mg/kg鼠重)造模,正常对照组小鼠给予等量的生理盐水,于第4、8、12周每组各处死6只小鼠,检测24h尿蛋白定量、血清白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC),光镜观察肾脏组织病理学改变,免疫组织化学技术检测足细胞数量,RT-qPCR技术检测肾脏组织Kindlin-2、肾病蛋白(Nephrin)及Podocin mRNA表达水平.结果 与正常对照组比较,模型组4、8、12周24h尿蛋白定量、血总胆固醇(TC)均增加[24h尿蛋白定量:(5.66±1.06)mg/24h比(1.72±0.62)mg/24h、(4.63±1.16)mg/24h比(1.77±0.63)mg/24h、(4.78 ±0.87)mg/24h比(1.69±0.49)mg/24h;血TC:(8.84±1.30) mmol/L比(2.01 ±0.49) mmol/L、(7.45±1.27)mmol/L比(2.06±0.49)mmol/L、(6.79±1.38)mmol/L比(2.10±0.54)mmol/L,P均＜0.05];血ALB水平降低[(11.98±1.33)g/L比(22.27±1.41)g/L、(12.78±1.47)g/L比(22.65±1.49)g/L、(12.99±1.38)g/L比(23.31±1.49)g/L,P均＜0.05];模型组第4周可见部分肾小球出现局灶、节段硬化,伴有足细胞肿胀;第8周部分肾小球出现球性硬化,伴有明显的足细胞增生和肥大;第12周弥漫性肾小球出现球形硬化.模型组足细胞数量随着时间的进展逐渐减少[(77.40±7.56)个/肾小球比(104.00±10.05)个/肾小球,(63.27±8.51)个/肾小球比(103.80±12.23)个/肾小球,(53.15±8.23)个/肾小球比(98.86±8.89)个/肾小球,P均＜0.05].模型组第4周开始Kindlin-2 mRNA水平明显上调[(1.14±0.06)、(1.13±0.08)、(1.45±0.10)比(0.82±0.07),P均＜0.05],Podocin mRNA水平明显下调[(1.79±0.08)、(1.64±0.06)、(1.45±0.07)比(2.05 ±0.05),P均＜0.05],第8周开始Nephrin mRNA水平明显下调[(1.42±0.13)、(1.17±0.11)比(2.06±0.20),P均＜0.05].Kindlin-2 mRNA水平与足细胞数量(r=-0.02,P＜0.01)、Nephrin mRNA水平(r=-0.8,P＜0.01)、Podocin mRNA水平(r=-0.9,P＜0.01)呈显著负相关.结论 Kindlin-2可能通过介导足细胞损伤参与小鼠局灶节段肾小球硬化症的发病过程.
关键词： 小鼠 Kindlin-2 足细胞损伤 局灶节段肾小球硬化症 -
结直肠癌组织中Kindlin-2、E-cadherin和MMP-9表达研究
目的:观察结肠癌术后组织中Kindlin-2、E-cadherin和MMP-9的表达及对预后的判断价值.方法:应用流式细胞术探讨结肠癌和正常结肠粘膜组织中Kindlin-2、E-cadherin和MMP-9蛋白的表达及临床意义.结果:结直肠癌中Kindlin-2和MMP-9的表达量明显高于对照组,E-cadherin的表达量明显低于对照组,结直肠癌中Kindlin-2、E-cadherin和MMP-9的表达量与Dukes分期、淋巴结转移、Ki67的表达密切相关.结论:结直肠癌中Kindlin-2、E-cadherin和MMP-9异常表达对肿瘤的进展有重要意义.
关键词： 结直肠癌 Kindlin-2 E-cadherin MMP-9 预后 -
Kindlin-2在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系
目的探讨黏着斑蛋白(Kindlin-2)在肝细胞癌(简称肝癌)中表达的临床意义及其与肝癌血管生成的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)方法检测12例原发性肝癌及癌旁配对组织和6例正常肝组织中Kindlin-2基因的表达水平。采用免疫组化方法检测69例原发性肝癌患者癌组织及癌旁组织中Kindlin-2蛋白的表达情况,以及肝癌组织中血管内皮生长因子( VEGF)和CD34的表达量。结果Kindlin-2在肝癌组织中的表达明显高于癌旁及正常肝组织；Kindlin-2的表达与肿瘤直径(P=0.010)、门静脉侵犯(P=0.025)相关；肝癌组织中 Kindlin-2表达与 VEGF表达呈正相关(r=0.401, P=0.001),且Kindlin-2阳性者微血管密度(MVD)值高于阴性者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论肝癌组织中异常表达增高的Kindlin-2与肿瘤微血管生呈正相关,提示Kindlin-2可能成为肝癌抗血管治疗的潜在靶点。
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Kindlin-2RNA干扰减轻大鼠颈动脉内膜增生
目的 观察Kindlin-2 RNA干扰对球囊损伤的大鼠颈动脉内膜增生的影响.方法 构建并制备Kindlin-2 siRNA和阴性对照慢病毒载体并感染球囊损伤的大鼠颈动脉,1周和4周后取损伤的颈动脉,实时定量PCR检测Kindlin-2 mRNA的表达,HE染色评估术后4周颈动脉内膜增生情况,并行免疫荧光或免疫组化检测颈动脉中Kindlin-2、α-actin、PCNA和β1整合素的表达,Masson染色了解颈动脉中胶原纤维合成情况.结果 Kindlin-2RNA干扰能明显降低1周时颈动脉中Kindlin-2 mRNA的表达水平(P＜0.05),并显著抑制4周后颈动脉的内膜增生(P＜0.05).与阴性对照组相比,Kindlin-2 siRNA组术后4周颈动脉中Kindlin-2、α-actin、PCNA和β1整合素的表达水平均明显降低,颈动脉内膜和中膜胶原纤维的合成也减少.结论 Kindlin-2 RNA干扰可能通过抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质合成减轻血管内膜增生.
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结直肠癌组织中Kindlin-2和E-钙黏蛋白的表达及对预后判断的价值
目的 观察结肠癌组织中Kindlin-2和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达及对预后的判断价值.方法 收集96例结直肠癌标本和70例正常结肠黏膜组织,应用免疫组织化学技术检测两组织中Kindlin-2和E-cadherin蛋白的表达,探讨其表达关系及临床意义.结果 结直肠癌中Kindlin-2表达的阳性率明显高于正常结肠黏膜,结直肠癌中E-cadherin表达的阳性率明显低于正常结肠黏膜,结直肠癌中Kindlin-2与E-cadherin表达的阳性率与Dukes分期、淋巴结转移、PCNA的表达密切相关.相关分析显示结直肠癌中Kindlin-2与E-cadherin的表达呈负相关.生存分析显示结直肠癌中Kindlin-2和E-cadherin的表达均与患者的预后相关.结论 结直肠癌中Kindlin-2和E-cadherin异常表达对肿瘤的进展有重要意义,联合检测肿瘤中Kindlin-2和E-cadherin的表达可能有助于预后判断.
关键词： 结直肠癌 Kindlin-2 E-cadherin 免疫组织化学 预后 -
子宫内膜样腺癌中基质金属蛋白酶-7、Kindlin-2蛋白和转移相关基因-2的表达及意义
目的:检测子宫内膜样癌中基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、Kindlin-2蛋白(Kindlin-2)和转移相关基因基因-2(MTA2)的表达特征,探讨MMP-7、Kind-lin-2和MTA2的关系及临床意义.方法:选择98例子宫内膜样腺癌术后留取的蜡块及患者的临床资料作为观察组,70例增生期子宫内膜作为对照组,应用免疫组化方法检测二组中MMP-7、Kindlin-2和MTA2的表达,探讨MMP-7、Kindlin-2和MTA2在不同临床病理特征中的表达差别,关注其表达的相关性.结果:观察组中MMP-7、Kindlin-2和MTA2蛋白表达的阳性率明显高于对照组,观察组中MMP-7、Kindlin-2和MTA2的表达与肿瘤的肌层浸润深度、临床分期、淋巴结转移、脉管浸润密切相关;观察组中MMP-7、Kindlin-2和MTA2的表达具有正相关性.结论:子宫内膜样腺癌中MMP-7、Kindlin-2和MTA2高表达,三者具有协同正向作用,对病变的进展具有重要作用.
