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小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型的建立
目的用小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus, MCMV)K181株建立BALB/c小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型.方法 25只健康纯系5周龄BALB/c小鼠腹腔接种MCMV K181病毒悬液(1×104PFU/只),观察小鼠血清cTnI浓度变化和心肌组织MCMV病毒滴度及病理改变.结果小鼠腹腔接种病毒悬液后第3天即可在心肌组织中检测到低滴度MCMV,第5～7天达高峰,随后迅速下降,第10天时已不能检测到MCMV;小鼠心肌组织病理改变出现在MCMV感染后第3天,7～10天达高峰,随后逐渐减轻,病变可持续到病毒感染后3～4个月;血清cTnI水平在MCMV感染后第3天即有升高,7～10天达高峰,14天仍维持较高水平.结论成功建立小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型,可为巨细胞病毒性心肌炎的治疗、药物筛选、疾病发病机制以及疾病预后评估提供一个良好研究平台.
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白细胞介素-35在新生小鼠巨细胞病毒感染中的作用
目的 探讨白细胞介素-35(interleukin-35,IL-35)在鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染新生小鼠肝脏中的表达及其作用.方法 将新生仔鼠按窝随机分为空白对照组、更昔洛韦组及病毒组,每组6只.病毒组和更昔洛韦组分别于仔鼠出生4～6 h内腹腔接种致半数细胞感染量为104.31 U/0.1 ml的MCMV病毒悬液20μl,建立MCMV感染小鼠模型,更昔洛韦组在接种病毒悬液24 h后腹腔注射更昔洛韦50 mg/kg,每日1次,连续14d.然后处死仔鼠,采用逆转录聚合酶链反应技术检测肝脏组织IL-35的亚基——EB病毒诱导基因3(Epstein Barr virus induced gene 3,EBi3)和p35 mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测血清中IL 35含量.多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用q检验.结果 (1) MCMV感染后病毒组小鼠出现食欲差、活动少、皮毛稀松、对刺激反应迟钝、生长迟缓、体重不增等表现.(2)病毒组肝脏组织有MCMV DNA表达,更昔洛韦组亦有表达,但弱于病毒组.(3)病毒组血清IL-35水平[(63.02±14.13) ng/L]较空白对照组[(126.04±16.00) ng/L]及更昔洛韦组[(118.97±35.50) ng/L]明显减低,差异有统计学意义(q分别为4.560和4.033,P均＜0.05).(4)病毒组EBi3 mRNA表达水平(0.675±0.232)较空白对照组(1.367±0.178)及更昔洛韦组(1.513±0.170)明显减低,差异有统计学意义(q分别为4.895和4.617,P均＜0.05).病毒组p35 mRNA表达水平(0.567±0.099)较空白对照组(1.411±0.384)及更昔洛韦组(1.499±0.217)亦明显减低,差异有统计学意义(q分别为4.752和4.381,P均＜0.05).(5)更昔洛韦组小鼠体重、血清IL 35、肝脏组织EBi3和p35 mRNA与空白对照组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-35做为一种抑制性细胞因子,在MCMV感染急性期,可以抑制其炎症反应；而在MCMV急性感染后所导致的持续病理损伤过程中发挥着重要的保护作用.
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小鼠睾丸巨细胞病毒感染对精子顶体反应与膜功能的影响
目的探讨小鼠睾丸巨细胞病毒(MCMV)感染对附睾尾部精子顶体反应与膜功能的影响.方法随机选择无MCMV感染史的BALB/c雄性小鼠48只作为实验组,睾丸直接接种MCMV,分别于感染后第1、2、4、6、9、14天处死小鼠,用地高辛标记的MCMV M83 mRNA寡核苷酸探针对睾丸组织进行原位杂交,检测睾丸MCMV感染情况,同时取附睾尾部成熟精子进行精子顶体反应与精子膜低渗肿胀功能检测.另设平行对照组雄性小鼠30只(同法随机选择),睾丸接种不含MCMV的细胞培养液,其他处理方法同实验组.结果实验组48只雄性小鼠睾丸组织间质及(或)生精细胞中均出现原位杂交阳性信号.实验组精子顶体反应与膜功能在接种病毒后的第2天、第4天,精子顶体反应率(58%±9%、56%±9%)低于平行对照组(71%±6%、70%±7%)(P均<0.05),精子膜尾部低渗肿胀率(48%±9%、38%±8%)低于平行对照组(60%±7%、50%±4%)(P均<0.05).结论小鼠睾丸MCMV感染模型成功建立.小鼠睾丸MCMV急性感染可导致精子顶体反应与膜功能的显著下降.
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鼠巨细胞病毒感染诱导小鼠精子凋亡及线粒体调控机制研究
目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠精子凋亡的影响,探讨MCMV感染诱导小鼠精子凋亡的线粒体调控机制.方法 建立小鼠睾丸MCMV急性感染模型(n=15),以正常小鼠作为对照(n=15),采用流式细胞术(FCM)与激光扫描共聚焦显微术(LCSM)对不同感染时段的小鼠附睾尾部成熟精子进行凋亡与线粒体膜电位的检测,同时应用电镜观察不同感染时段的精子线粒体超微结构的改变.结果 MCMV感染第2天起精子凋亡率开始升高,第4天达高值(39.3±1.0)%,随后逐渐下降(F=362.822,P＜0.05).而感染第1天的精子线粒体膜电位增加至74.0±1.4,第2天开始下降至63.0±2.2,第4天降至低40.2±2.3,随后缓慢回升(F=32.257,P＜0.05).MCMV感染可引起精子线粒体超微结构的损伤,以感染第2～6天为重.结论 生殖器官MCMV急性感染可诱导附睾尾部成熟精子的凋亡;精子线粒体主动参与并调控了精子的凋亡过程.
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鼠巨细胞病毒特异性细胞免疫机制研究新进展
鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)的基因组结构、基因表达模式、细胞嗜性和感染进程等都与人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)有很多相似之处,因此,常使用MCMV感染模型研究HCMV的相关疾病及致病机制.此文主要对近年来国际上对MCMV感染模型研究中与病毒感染相关的特异性细胞免疫功能机制的研究新进展做一综述.
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MCMV感染同种异型皮肤移植小鼠间质性肺炎模型的建立
目的 建立小鼠巨细胞病毒(MCMV)经鼻腔急性感染同种异型皮肤移植BALB/c小鼠间质性肺炎模型.方法 ① 25只供体C57BL/6雌鼠与100只受体BALB/c雌鼠背部皮肤移植后,每只小鼠腹腔注射环孢素A(CsA,12 mg/kg),连续14 d.② 移植受体小鼠随机分为5组,其中4组每只鼻腔接种30 μl不同剂量MCMV悬液(102、103、104、105 PFU/只),另一组为正常对照组,小鼠鼻腔接种原代小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)悬液30 μl/只.在接种后第5、9、14、21天处死小鼠,无菌取肺组织分别做HE染色、透射电镜、PCR、RT-PCR检测MCMV Smith毒株的即刻早期(IE)和晚期基因糖蛋白B(gB)基因转录产物,并进行原位杂交和免疫组织化学实验.结果 104、105 PFU实验组小鼠肺组织有局灶性的病理损害,并发现感染后第14天肺组织病理改变明显;透射电镜检测到疱疹样病毒颗粒;PCR、RT-PCR检测实验组MCMV IE和gB基因及其转录产物均为阳性;两组原位杂交和免疫组织化学检测均可见肺间质上皮细胞中存在病毒核酸和蛋白;并在感染后的21 d内,105 PFU组小鼠相比对照组有明显的临床表现.结论 成功建立同种异型皮肤移植后MCMV急性感染所致的小鼠间质性肺炎模型.
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高迁移率族蛋白B1在小鼠巨细胞病毒感染小鼠内耳中的表达
目的:探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group box chromosomal protein 1,HMGB-1)在小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染导致听力损失发病机制中的作用.方法:采用新生小鼠颅内注射病毒法建立MCMV感染动物模型,测定2周龄小鼠的听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR),采用RT-PCR检测耳蜗组织HMGB-1 mRNA表达,均与注射生理盐水的对照组比较.结果:ABR,病毒组(28.42±3.03)dB,对照组(15.66±0.38)dB(t=3.042,P＜0.01).HMGB-1 mRNA,病毒组2.372±0.193,对照组0.754±0.322(t=7.537,P＜0.01).结论:HMGB-1可能通过维持并加重内耳的迟发性炎症,成为巨细胞病毒感染导致听力损失发生发展的病理基础.
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反义硫代寡核苷酸对小鼠巨细胞病毒性心肌炎心肌组织iNOS表达的影响
目的:探讨反义硫代寡核苷酸(AODN)对小鼠巨细胞病毒性心肌炎心肌组织iNOS表达的影响.方法:应用无病原体的Balb/C小鼠120只,随机分为6组,每组20只, 其中正常对照和病毒对照各1 组, 4 个实验组.正常对照组小鼠腹腔内注射0.1 ml DMEM液 , 其它5 组小鼠腹腔内接种0.1 ml含TCID5010-4 MCMV 的DMEM 液, 半小时后4 个实验组小鼠腹腔内注射0.2 ml 不同剂量的AODN ,正常对照组和病毒对照组分别注射0.2 ml AODN 媒体溶液.实验第7d 测定心肌酶谱(CK、CK-MB、GOT、LDH和LDH1/ LDH2)活性,并且进行了心肌组织病理学、免疫组化和Western blot检查.结果:随注射AODN 剂量增加, 心肌炎发病率逐渐降低;心肌细胞变性、坏死及间质炎性细胞浸润程度逐渐减轻;CK、CK-MB、GOT、LDH和LDH1/ LDH2活性逐渐降低;心肌组织iNOS蛋白表达逐渐下降.结论:AODN抑制病毒的复制可能与抑制心肌组织iNOS蛋白的表达有关.
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新生小鼠巨细胞病毒肝炎模型的建立
目的 探讨建立鼠巨细胞病毒(MCMV)感染致新生小鼠肝炎模型的可行性.方法 48只日龄24 h内新生BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组每只小鼠腹腔注射MCMVSmith株20μl TCID50(104.31/0.1 ml),对照组注射无菌生理盐水20μl,注射第3、7、14天取血清和肝脏,检测血清ALT水平,肝脏组织HE染色后用光镜检查组织病理损害,同时提取肝脏组织的DNA,应用MCMV及β-actin引物行PCR扩增,然后跑电泳和测序.结果 实验组小鼠ALT水平(U/L)在3天时即明显升高,7天达高峰,14天时有所下降,与对照组比较,差异均有统计学意义[3天:(58.7±11.5)比(25.0±10.6),7天:(169.6±57.4)比(25.1±8.4),14天:(157.3±15.5)比(26.5±9.4),P均＜0.01].实验组小鼠肝组织内均可见肝细胞气球样变性,点灶状坏死,门管区炎性细胞浸润,肝细胞核内病毒包涵体,7天时严重；对照组肝细胞无相似病理变化.实验组MCMV-DNA PCR电泳全部出现阳性条带,阳性条带测序结果与MCMV基因序列的同源性完全相符.结论 MCMV能侵袭BALB/c新生小鼠引起肝炎,这种模拟人类巨细胞病毒肝炎的新生小鼠模型的建立为该病动物实验研究提供了可能.
