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阳离子脂质体对反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒作用的促进
目的:考察阳离子脂质材料3β-N-(N′, N′- 二甲基胺乙基) 胺基甲酰基胆固醇(3β-N-(N′, N′-dimethylaminoethane)-carbamoyl cholesterol, DC-chol)与反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide ,asODN)的结合能力及asODN阳离子脂质体的细胞毒性和抗病毒活性.方法:以DC-chol从水相中萃取asODN的萃取率评价不同条件下DC-chol与asODN的作用力;通过四唑盐比色法检测含DC-chol的阳离子脂质体对HepG2 2.2.15 的细胞毒性;以酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清培养液中HBsAg和HBeAg的含量,考察不同asODN阳离子脂质体的抗病毒活性.结果:当正负电荷比>0.6时,DC-Chol能有效的从水相中萃取asODN (萃取率80%～100%);碱性条件和强离子(Na+/Cl-)的存在不利于DC-Chol与asODN的作用;DC-chol阳离子脂质体具有一定的细胞毒性,在低质量浓度时(0.84～26.94 mg*L-1)脂质体的细胞毒性与DC-chol浓度成正比;当asODN在1.25～5.00 μmol*L-1时,其抗病毒活性与剂量相关;脂质体可提高asODN对乙肝病毒的抗病毒活性,其中阳离子脂质体对asODN抗病毒活性的促进作用较明显(从60%到95%).结论:表面修饰DC-Chol阳离子脂质体能有效地促进asODN的抗乙肝病毒活性.
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端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌治疗作用的体外实验
目的:探讨端粒酶反义核苷酸对膀胱癌的治疗作用.方法:用TRAP-银染方法检测25例膀胱癌组织和4例癌旁组织中端粒酶活性的表达.以端粒酶RNA模板区为靶点,不同剂量的序列为TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸(PS-ASON)作为实验组(A、B、C),以硫代磷酸修饰13个核苷酸的随机引物作为对照组(D),仅加入培养液作为空白对照组(E),与人膀胱癌细胞株BIU87细胞共同孵育1～30 d,计细胞数,光镜及电镜观察,DNA凝胶电泳检测、流式细胞仪测定和分析细胞的凋亡和坏死.结果:25例膀胱癌组织中,24例(96%)表达端粒酶活性,4例癌旁组织无端粒酶活性表达.与随机引物及空白对照组比较,实验组的ASON能明显减少细胞增殖数目,实验组细胞在第2、8天及8天后出现较明显的凋亡峰和DNA梯状电泳带,并出现退化、老化、凋亡和坏死的形态学变化,凋亡率明显增高(P＜0.001),并显示剂量的依赖性(P＜0.01).结论:以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸引起膀胱癌BIU87细胞增殖抑制,退化、老化、凋亡和坏死,对膀胱癌的治疗有潜在的意义.
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β1整合素反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用
目的探讨β1整合素反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠人胰腺癌移植瘤生长和基因表达的影响.方法建立裸鼠人胰腺癌皮下移植瘤模型,随机分为3组:对照组(皮下注射脂质体和转染液)、非特异序列(RODN)组(皮下注射RODN、脂质体和转染液)和ASODN组(皮下注射ASODN、脂质体和转染液).治疗后计算抑瘤率和肿瘤缩小率,检测肿瘤中β1整合素mRNA和蛋白表达.结果RODN组、ASODN组抑瘤率分别为4.75%和72.70%,ASODN组肿瘤缩小10.91%.与其他两组比较,ASODN组裸鼠肿瘤中β1整合素mRNA和蛋白表达水平明显降低.结论靶向β1整合素的反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生长具有一定的抑制作用,可能为胰腺癌治疗提供新的方法.
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VEGF和PCNA反义寡核苷酸联合治疗裸鼠骨肉瘤的实验研究
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸和增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡核苷酸单用或联用对裸鼠骨肉瘤生长的抑制作用.方法 制备Balb/c裸鼠皮下骨肉瘤模型24只,随机分为4组:VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、PCNA反义寡核苷酸治疗组、联合治疗组和对照组,6只/组.接种MG-63人成骨肉瘤细胞后24 h内分别用VEGF反义寡核苷酸或(和)PCNA反义寡核苷酸皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,2次/周,连续4周;观察各组裸鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况与生存期.断颈处死裸鼠,游标卡尺测量肿瘤体积大小,天平称量肿瘤的重量.结果 VEGF-ASODN治疗组、PCNA-ASODN治疗组和联合治疗组裸鼠骨肉瘤的生长均受到不同程度的抑制,抑瘤率分剐为44.56%、46.53%和72.71%.结论 VEGF和PCNA两种反义寡核苷酸均对骨肉瘤的生长具有抑制作用,两种反义寡核苷酸联合应用比单用的疗效更为显著.
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c-fos反义寡核苷酸对兔实验性增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用
目的 评价c-fos反义寡核苷酸(AS-ON)对兔实验性增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的抑制作用.方法 将9只兔(18只眼)分为c-fos-AS-ON治疗组和对照组(每组9只眼).c-fos-AS-ON治疗组以平衡盐溶液(BSS)配制2 μg c-fos-AS-ON和10 μg脂质体的混合液0.1 ml、对照组以0.1 ml BSS分别与2.5×105个/ml人视网膜色素上皮(RPE)细胞稀释液混合后同时注入玻璃体腔,观察两组在玻璃体腔注射后第7、14、21、28天PVR发生的程度.结果 随着观察时间的延长,两组PVR程度逐渐加重.第7天两组PVR程度无统计学差异(P=0.05),第14、21、28天,c-fos-AS-ON治疗组的PVR程度较对照组轻,差异有统计学意义(P＜0.05);第28天,c-fos-AS-ON治疗组牵拉性视网膜脱离发生率为25.0%,对照组为62.5%.结论 c-fos-AS-ON对兔实验性PVR的发生有一定的抑制作用.
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反义硫代寡核苷酸对小鼠巨细胞病毒性心肌炎心肌组织iNOS表达的影响
目的:探讨反义硫代寡核苷酸(AODN)对小鼠巨细胞病毒性心肌炎心肌组织iNOS表达的影响.方法:应用无病原体的Balb/C小鼠120只,随机分为6组,每组20只, 其中正常对照和病毒对照各1 组, 4 个实验组.正常对照组小鼠腹腔内注射0.1 ml DMEM液 , 其它5 组小鼠腹腔内接种0.1 ml含TCID5010-4 MCMV 的DMEM 液, 半小时后4 个实验组小鼠腹腔内注射0.2 ml 不同剂量的AODN ,正常对照组和病毒对照组分别注射0.2 ml AODN 媒体溶液.实验第7d 测定心肌酶谱(CK、CK-MB、GOT、LDH和LDH1/ LDH2)活性,并且进行了心肌组织病理学、免疫组化和Western blot检查.结果:随注射AODN 剂量增加, 心肌炎发病率逐渐降低;心肌细胞变性、坏死及间质炎性细胞浸润程度逐渐减轻;CK、CK-MB、GOT、LDH和LDH1/ LDH2活性逐渐降低;心肌组织iNOS蛋白表达逐渐下降.结论:AODN抑制病毒的复制可能与抑制心肌组织iNOS蛋白的表达有关.
