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高氧诱导慢性肺疾病早产鼠肝肠组织的自由基变化
目的:探讨高氧致早产鼠慢性肺疾病(CLD)发生中肝肠组织的自由基变化.方法:采用高浓度氧致早产鼠CLD模型为研究对象,应用分光光度计比色法动态测定肝及肠组织超氧化物岐化酶(SOD)活性及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量变化,并同步观察肺组织上述指标的改变.结果:实验组MDA水平,肝及肠组织7 d内无差异,14 d明显高于对照组(分别为122±9μmoL/gvs68±7μmoL/g,117±9 μmoL/g vs68±9 μmoL/g,P＜0.01),21 d仍高于正常水平(P＜0.05);而肺组织早期即明显升高,7 d达高峰(94±12 μmoL/g vs 24±5 μmoL/g,P＜0.001),持续1 wk后逐渐下降,21 d时仍高于正常水平(P＜0.01).两组肺、肝及肠组织SOD的活性均无差异(P＞0.05);结论:高氧肺损伤时,肝及肠组织同样发生自由基损伤,但其发生时间明显滞后于肺组织.
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地塞米松对早产鼠脑白质发育的影响及其机制
目的 通过建立早产动物模型,探讨地塞米松对早产动物脑组织发育的影响和可能机制.方法 将18只SD孕鼠应用随机数字表法随机分为3组,大剂量地塞米松组(H-Dex组)；小剂量地塞米松组(L-Dex组)和生理盐水对照组(NS对照组),每组6只.于孕16、17、18 d连续3d分别腹腔注射地塞米松0.5 mg/(kg·d)、0.1 mg/(kg·d)；NS对照组同时刻腹腔注射等体积生理盐水.3组雌鼠均于孕19 d剖宫产取出胎鼠制成早产鼠动物模型,留取脑标本,观察脑含水量、脑形态学改变.采用ELISA法及流式细胞术分别检测脑组织髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MPB)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β含量及脑组织凋亡细胞计数.结果 (1)脑含水量:H-Dex组、L-Dex组与NS对照组脑含水量分别为(85.94 ±0.54)％、(86.08±1.01)％、(86.94 ±0.82)％,Dex组脑组织含水量较对照组显著下降(P＜0.05)；(2)脑形态学改变:H-Dex组、L-Dex组与NS对照组比较表现为大脑皮层胶质细胞进一步成熟,且大剂量组比小剂量组变化更为明显；(3)脑组织MBP、Ⅱ-1β含量的测定:H-Dex组、L-Dex组、NS对照组脑组织MBP含量分别为(5.73±1.06) μg/mg、(5.46±0.77) μg/mg、(2.42 ±0.52) μg/mg,Dex组较NS对照组明显增加(P＜0.05),IL-1β含量分别为(249.05±11.29) pg/g、(257.47±9.33) pg/g、(292.66±21.51)Pg/g,Dex组较NS对照组明显减少(P＜0.05).H-Dex组与L-Dex组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；(4)脑组织凋亡细胞计数:H-Dex组、L-Dex组与NS对照组凋亡细胞计数分别为(18.07±1.63)％、(6.88 ±0.47)％、(2.00±0.32)％,Dex组较NS对照组明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),且H-Dex组与L-Dex组相比,凋亡细胞计数显著增加.结论 (1)预防性应用地塞米松可使大脑皮层胶质细胞进一步成熟,脑组织含水量下降,MBP含量增加,IL-13含量减少,提示地塞米松具有促进脑白质发育及髓鞘形成,促进脑成熟的作用；(2)地塞米松可致脑组织凋亡细胞计数明显增加,且该作用具有剂量依赖性,提示地塞米松可能对胎脑的正常发育亦有一定负面影响,早产儿应慎用,并倾向于使用小剂量.
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宫内炎性暴露对早产鼠巨核细胞及血小板稳态的影响
目的 探索宫内炎性暴露对新生鼠的巨核细胞和血小板稳态的影响,为解析宫内感染致新生儿血小板减少症的分子机制提供动物实验依据.方法 按怀孕时间将SD孕鼠共24只随机分为内毒素(LPS)组和对照组各12只.将LPS(0.79mg/kg)和等量0.9％氯化钠注射液分别在孕8d、10d和12d给LPS组和对照组孕鼠进行腹腔注射.在孕21d(预产期为22d)剖宫产娩出早产鼠,其中LPS组娩出118只早产鼠,对照组娩出144只,在两组中分别随机抽取早产鼠23只,纳入LPS早产鼠组和对照早产鼠组,在其出生后1h内采集外周血、骨髓、肺组织、肝脏及肾脏组织标本,再运用全血细胞分析和血浆凝集培养方式分别检测早产鼠循环中巨核细胞数和骨髓巨核细胞集落单位(CFU-MK)及运用流式细胞分析方法检测循环中血小板表面标志物CD62P的表达.运用ELISA分别检测早产鼠肝脏和肾脏血小板生成素(TPO)水平和TPO的表达.同时,通过电镜观察肺毛细血管血小板聚集现象.结果 相对于对照早产鼠组(n=23),LPS早产鼠组的外周血小板计数较低[LPS早产鼠组和对照早产鼠组:(239.22±63.00)×109/L vs.(377.96±79.90)×109/L,P＜0.001],循环中MK计数低[(5.78±1.70)/mL vs.(8.30±1.90)/mL,P＜0.001]和CFU-MK[(9.52±2.80)/105 cell vs.(15.83±3.60)/105 cell,P＜0.001];血小板表面标志物CD62P阳性率较低[(43.05±6.30)％ vs.(34.91±12.10)％,P＜0.001];血浆TPO水平显著增高[(482.44±91.20) pg/mL vs.(294.70±68.20) pg/mL,P＜0.001],肝脏TPO mRNA表达增多,肾脏TPO mRNA表达显著减少.通过电镜在LPS早产鼠组可观察到肺毛细血管内血小板聚集现象,而在对照组早产鼠肺内没观察到类似现象.结论 宫内炎性暴露可能损害了早产鼠巨核细胞和血小板稳态.其可能影响机制为:(1)损害了骨髓巨核细胞稳态;(2)增加血小板的活化;(3)反馈性促进了TPO的生成.
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慢性肺疾病早产鼠转化生长因子β1基因和蛋白动态表达及其对肺发育的抑制作用
转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一重要的生长调节因子,因其在组织发生、发育及损伤后修复过程中作用,已成为当今研究的热点因子之一.而有关早产儿慢性肺疾病(chronic lung disease, CLD)发生中,TGF-β1基因及蛋白表达的变化规律及其对肺形态发育的影响,至今报道甚少.2003年6月-12月,我们以高浓度氧诱导早产鼠CLD模型为对象,动态观察和评价肺组织形态发育,并同步测定肺组织TGF-β1 mRNA 及其蛋白表达水平,试图探索TGF-β1在早产儿CLD发生、发展中的变化规律及对肺泡发育的影响程度.
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caspase-3基因在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用
目的:探讨caspase-3在高氧致早产鼠慢性肺疾病(CLD)中的表达及其对肺上皮细胞(AEC)凋亡的影响.方法:将60例早产鼠随机分为模型组和对照组,分别于建立模型后1,3,7,14,21 d应用TUNEL和RT-PCR技术,动态检测AEC的凋亡指数(AI)和肺组织caspase-3基因表达.结果:暴露于高氧后3 d AEC的AI及肺组织的caspase-3 mRNA水平开始升高(P＜0.05),7～21 d维持高水平(P＜0.01),且肺组织caspase-3 mRNA表达与AEC的AI呈显著相关性(γ=0.69,P＜0.01).结论:高氧诱导的肺组织caspase-3基因过度表达可能是CLD早产鼠肺上皮细胞凋亡的重要机制之一.
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孕鼠使用地塞米松对早产鼠心肌肌红蛋白、心脏重量/体重的影响
目的:研究不同剂量地塞米松(Dex)对早产鼠心肌肌红蛋白、心脏重量/体重的影响.方法:8只SD孕鼠随机分为大、中、小剂量组和安慰组,分别于孕第16、17、18天从孕鼠尾静脉注射2.0 mg/kg、1.0 mg/kg、0.5 mg/kg的Dex及生理盐水,于孕19天剖出胎鼠建立早产鼠模型并测定其心肌Mb含量、心脏重量/体重,从而探讨经孕鼠尾静脉注射不同剂量Dex对早产鼠心肌Mb、心脏重量/体重的影响.结果:大、中、小Dex剂量组心肌Mb含量高于安慰组,且随着Dex剂量的增加对心肌Mb含量的影响逐渐加大,当Dex增加到一定浓度时其对心肌Mb影响不再增加,同时各组心脏重量/体重无明显差异.结论:孕鼠注射Dex后对早产鼠心肌Mb含量有影响,其含量随着Dex剂量的增加而逐渐加大.当Dex增加到一定浓度时其对心肌Mb影响不再增加,同时此方法对早产鼠的心脏重量/体重无明显影响.
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血红素氧合酶-1抑制剂对早产大鼠高氧性视网膜病的影响
目的:观察血红素氧合酶-1 (heme oxygenase-1,HO-1)抑制剂对高氧暴露早产鼠视网膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)表达的影响.方法:将144只3日龄早产大鼠随机分为A高氧组、B干预 组、C空气组、0空气+舒血宁组,以免疫组织化学法检测各组早产鼠的视网膜HO-1、PEDF和VEGF表达水平.结果:C、D组HO-1、PEDF、VEGF均呈低表达,未见或罕见突破内界膜的内皮细胞核；与C、D组相比,A组突破内界膜的内皮细胞核明显增多,HO-1 、PEDF及VEGF表达的表达均显著增加,(P分别＜0.001,0.001,0.001),与A组相比,B组突破内界膜的内皮细胞核明显减少,HO-1、PEDF及VEGF的表达均显著下降(P分别＜0.05,0.001,0.05)；视网膜PEDF的表达与VEGF的表达、视网膜PEDF的表达与突破视网膜内界膜内皮细胞核数呈负相关、VEGF、HO-1的表达与突破视网膜内界膜内皮细胞核数呈正相关(P分别＜0.01,0.01,0.05).结论:高氧暴露早产鼠视网膜内可观察到HO-1 、VEGF和PEDF的高表达,舒血宁通过下调高氧暴露早产鼠视网膜HO-1、VEGF和PEDF的表达,对高氧性视网膜病有一定的保护作用.
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高氧致慢性肺疾病早产鼠肺组织细胞周期依赖蛋白激酶-4、p21表达及其对纤维化的影响
目的 研究慢性肺疾病(CLD)早产鼠的肺组织细胞周期依赖蛋白激酶-4(CDK4)及细胞周期依赖蛋白激酶抑制因子(p21)动态表达规律及其意义.方法 将80只早产鼠随机分为模型和对照组(每组40只),采用高体积分数氧诱导CLD模型,于实验后1、3、7、14、21 d分别应用酶联免疫吸附法及免疫组织化学技术检测其肺组织Ⅰ型胶原和CDK4、p21蛋白表达.结果 与对照组比较,实验组14和21 d IⅠ型胶原水平及CDK4表达增加,而p21表达水平降低.实验组14和21 d CDK4表达水平与肺纤维化程度呈明显正相关;p21与肺纤维化程度呈明显负相关.结论 高氧诱导早产鼠肺组织CDK4及p21异常表达,可能是CLD肺纤维化发生的机制之一.
关键词： 细胞周期依赖蛋白激酶4 p21 肺纤维化 高氧 早产鼠 -
高氧诱导早产鼠肺纤维化中结缔组织生长因子的表达及其意义
目的 结缔组织生长因子(CTGF)是新近发现与纤维化发生密切相关的一种因子,但其与早产儿慢性肺疾病(CLD)的肺纤维化有何关系,迄今未见报道.该文旨在阐明CTGF在高氧致早产鼠CLD发生、发展的表达规律,并探讨其在纤维化中表达及意义.方法 采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫组织化学及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等技术,动态观察CTGF mRNA表达,并同时测定肺成纤维细胞的增殖性细胞核抗原(PCNA)指数及肺组织Ⅰ型胶原的含量和TGF-β1蛋白表达水平.结果 生后1 d,3 d,两组Ⅰ型胶原、PCNA指数、TGF-β1蛋白及CTGF mRNA表达水平无差异(P＞0.05);实验组肺组织TGF-β1蛋白表达7 d升高(P＜0.05),Ⅰ型胶原、PCNA指数及CTGF mRNA表达14 d升高(P＜0.05),21 d均达高峰(P＜0.01);肺组织CTGFmRNA表达与Ⅰ型胶原呈明显正相关(γ=0.89,P＜0.01).结论 高氧致CLD早产鼠肺组织CTGF mRNA表达水平与肺组织纤维化的程度相一致,CTGF与CLD的肺纤维化密切相关.
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3日龄未成熟大鼠缺血性脑损伤后少突胶质细胞超微结构变化
目的 少突胶质细胞是脑白质的主要细胞成分,了解少突胶质细胞损伤的病理过程有助于研究早产儿脑损伤的发生机制.该实验目的在于了解3日龄未成熟大鼠双侧颈总动脉结扎造成脑白质损伤后少突胶质细胞超微结构的变化.方法 将3日龄未成熟SD新生大鼠随机分为对照组和实验组.对照组仅切开颈部皮肤,而实验组结扎双侧颈总动脉.术后6,12,24 h分别取实验组和对照组存活大鼠8只,将脑组织的超微切片进行透射电镜检查.结果 对照组存活率为100%,实验组存活率为51%.透射扫描电镜发现实验组大鼠术后6 h脑白质少突胶质细胞普遍水肿,细胞器(线粒体、内质网、高尔基体)水肿明显,数量减少,线粒体数目减少及水肿尤为多见,有的线粒体出现空泡现象,粗面内质网脱颗粒.术后12 h少突胶质细胞水肿更加明显,细胞器进一步减少,可见细胞核染色质分布不均,少数细胞已经出现核固缩.术后24h实验组少突胶质细胞广泛核固缩、核溶解,细胞器广泛缺失.结论 3日龄未成熟大鼠双侧颈总动脉结扎后,大鼠脑白质少突胶质细胞损伤.损伤数小时内少突胶质细胞的细胞器受损,随时间延长进行性加重,直至出现少突胶质细胞核固缩.该研究显示了脑缺血性损伤时,脑白质内少突胶质细胞的超微结构病理变化的全过程.
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结缔组织生长因子在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用
目的 肺纤维化是高氧致慢性肺疾病(chronic lung diseases,CLD)的终结局,结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是近年来发现的与纤维化形成密切相关的因子,但其在CLD肺纤维化中的作用目前尚未见报道.该实验旨在研究CTGF在高氧致CLD中的动态表达规律,并探讨其在CLD中的作用.方法 将50例早产鼠随机分为实验组(高氧组)和对照组(空气组),分别于建立模型后1,3,7,14,21 d应用免疫组化技术动态检测肺组织中CTGF的表达部位和强度,对肺组织纤维化程度进行病理组织学评分.结果 对照组小鼠CTGF仅在血管内皮细胞、支气管、细支气管上皮细胞有微弱表达;实验组于建立模型后1,3,7 d表达部位与对照组相似,表达强度与对照组无差异(P＞0.05),14 d表达增强(P＜0.01),在部分肺上皮细胞、肺泡间隔、成纤维细胞中出现表达,21 d表达明显增强(P＜0.01).高氧组14 d和21 d CTGF表达水平与肺组织纤维化程度呈明显正相关(分别为r=0.903,r=0.926,均P＜0.01).结论 随着高氧暴露时间的延长和纤维化的发展,CTGF表达增强,其与高氧所致CLD肺纤维化的发生密切相关.
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慢性肺疾病早产鼠肺组织转化生长因子β1基因及蛋白表达的动态变化
目的近年来研究发现慢性肺疾病(CLD)早产儿支气管肺泡灌洗液中转化生长因子β1( TGF-β1 ) 水平明显升高,但其表达在CLD发生、发展中动态变化规律及与CLD的肺泡发育障碍的关系尚不明确.该研究探索高氧致CLD肺组织TGF-β1基因及蛋白表达特点及对其肺发育的影响.方法采用高浓度氧诱导早产鼠CLD模型,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学及图像分析等技术,动态观察肺系数、放射状肺泡计数(RAC)的变化,并同时测定肺组织TGF-β1mRNA及蛋白表达水平.结果生后1 d,3 d,两组肺系数、RAC无差异(P>0.05),7 d和14 d时实验组肺系数、RAC低于对照组(P<0.05), 21 d时RAC明显降低(P <0.001),但两组肺系数无差异;实验组肺组织TGF-β1mRNA水平3 d高于对照组(P =0.005),14 d达高峰(P <0.001),21 d稍有下降,但仍高于对照组(P =0.005);实验组肺组织TGF-β1蛋白表达7 d 增高(P=0.036),21 d达高峰(P <0.001);肺组织TGF-β1蛋白表达与RAC呈显著负相关(P = 0.003).结论暴露高氧环境中早产鼠肺组织TGF-β1蛋白表达的动态变化与其肺发育障碍的程度相一致,TGF-β1是抑制肺泡发育的重要因子.
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CLD早产鼠肺组织内TGF-β1的动态表达及其对细胞外基质的影响
目的近年来发现慢性肺疾病(CLD)早产儿支气管肺泡灌洗液中转化生长因子β1(TGF-β1)及Ⅰ型胶原等细胞外基质(ECM)水平增高,但由于临床研究的局限性,缺乏与肺组织ECM的对照研究.因此探讨TGF-β1在早产鼠CLD发生、发展中的变化规律及对ECM的影响对完善早产儿CLD的发生机制有重要意义.方法将60例早产鼠随机分为模型组和对照组,于实验后1,3,7,14和21 d,应用免疫组织化学和酶联免疫吸附法,分别观察及测定肺组织TGF-β1分布、表达强度及Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白(FN)及透明质酸(HA)的含量.结果正常肺组织TGF-β1仅在支气管上皮细胞或血管内皮细胞有微弱表达;而模型组1 d和3 d时,TGF-p1表达同正常对照组,7 d时少量肺泡巨噬细胞、肺泡上皮细胞及肺间质细胞开始表达,其表达强度高于对照组,差异有显著性(P＜0.05),14 d时明显增强,差异有极显著性意义(P＜0.01),21 d达高峰;1,3和7 d时,两组肺组织Ⅰ型胶原含量无差异(P＞0.05),而14 d时,模型组高于对照组,差异有显著性(P＜0.05),21 d时明显高于对照组,差异有极显著性意义(P＜0.01);不同吸氧时间,两组肺组织FN及HA含量均差异无显著性意义(P＞0.05);模型组在14 d和21 d时,肺组织TGF-β1表达与Ⅰ型胶原含量呈显著正相关(r分别为0.709,0.711,均P＜0.01).结论暴露高氧环境中的CLD早产鼠,肺组织TGF-β1过度表达与ECM重塑中Ⅰ型胶原沉积密切相关.
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动力相关蛋白和视神经萎缩症蛋白在高氧诱导早产鼠肺损伤中的作用
目的：研究动力相关蛋白（DRP1）和视神经萎缩症蛋白（OPA1）在高氧诱导早产大鼠肺损伤时细胞凋亡中的作用。方法随机将早产Wistar大鼠48只分为高氧组（吸入95％的氧）和对照组（吸入21％氧）。1、3、7 d分批离断早产鼠处死后取肺组织做石蜡切片。观察早产鼠肺组织的病理学变化及线粒体形态变化相关的蛋白；评价各组早产大鼠肺组织细胞凋亡情况。结果 DRP1和OPA1表达于肺组织细胞的胞质，与对照组相比，高氧组DRP1/OPA1的表达呈时间依赖性，1 d时开始增加，7 d时表达高；高氧组1 d时OPA1表达有所减少，7 d少；高氧组1 d时DRP1表达开始增加，7 d时表达显著升高。高氧组可见大量末端转移酶标记技术（TUNEL）阳性细胞，随着高氧暴露时间延长，凋亡指数呈逐渐增高趋势。7 d时凋亡细胞数达高峰。在高氧组，DRP1/OPA1比值表达与细胞凋亡指数相比，呈显著正相关（r＝0．725，P＜0．01）。结论高氧暴露可致早产鼠肺组织产生时间依赖急性肺损伤改变。
