首页 > 文献资料
-
溶血磷脂酸对背根神经髓鞘相关糖蛋白表达的影响及机制的研究
目的:探讨单次鞘内注射溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对背根神经髓鞘相关糖蛋白(myeline-associated glycoprotein,MAG)表达的影响以及其作用机制;方法:实验1:C56雄性小鼠随机分为人造脑脊液(artificial cerebralspinal fluid,aCSF)组和LPA组,在注射后24小时、3天和7天处死小鼠取其背根神经(dorsal root,DR),采用原位杂交(western blot,WB)方法测定DR中MAG的表达.实验2:C56雄性小鼠随机分为aCSF组,LPA组,钙蛋白酶抑制剂X(calpain inhibitor X,CalX)+LPA组和aCSF+CalX组,在注射后0天、24小时、3天、7天和14天测定小鼠机械性阈值及热阈值.实验3:C56雄性小鼠随机分为aCSF组,aCSF+LPA组和CalX+LPA组,在注射后24小时处死小鼠取其背根神经,采用WB和免疫荧光的方法观察CalX对MAG的影响.结果:①与aCSF组对比,LPA注射后24小时MAG显著降低,持续到第3天,第7天降低不明显;②与aCSF组和aCSF+CalX组对比,LPA组在术后1~7天有明显的热痛敏和机械痛敏;与LPA组对比,CalX+LPA组热痛敏和机械痛敏明显减轻;③与aCSF组和aCSF+LPA组对比,CalX+LPA组WB结果显示CalX能完全阻止LPA诱导DR中MAG的下调,免疫荧光和WB结果是一致的.结论:单次鞘内注射LPA可以诱导背根神经MAG的下调,且是通过钙蛋白酶激活介导的.
-
晶状体中钙蛋白酶的研究
钙蛋白酶(calpains)是一种广泛存在于包括晶状体在内的人全身各脏器组织中的钙离子浓度依赖性中性蛋白酶.在人的晶状体中m-钙蛋白酶的表达占主导地位,同时存在内源性抑制剂--钙蛋白酶抑制剂(calpastatin).各种原因引起的钙离子浓度的升高可激活钙蛋白酶,使晶状体内的晶状体蛋白、细胞骨架蛋白和膜蛋白等多种蛋白质发生水解,从而导致白内障形成.钙蛋白酶的抑制剂可不同程度地抑制蛋白的水解作用,从而降低高钙引起的晶状体透明度的丧失,可为白内障的药物预防和治疗提供新的方法.
-
钙蛋白酶抑制剂对纤连蛋白诱导的MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化的影响
本研究观察钙蛋白酶抑制剂(ALLN和calpain inhibitor Ⅳ)对纤连蛋白(FN)诱导的MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化(EMT)的影响.FN作用MCF-10A细胞48 h后,采用划痕修复实验检测MCF-10A细胞的迁移能力;基质胶包被的transwell小室实验检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测波形蛋白(vimentin)、E-钙粘着蛋白(E-cadherin)、锌指蛋白(snail)和钙蛋白酶-2(calpain-2)的表达.研究结果显示,FN诱导MCF-10A细胞形态发生改变;显著增加MCF-10A细胞的迁移和侵袭能力;上调calpain-2、vimentin和snail蛋白表达,下调E-cadherin蛋白水平.ALLN和calpain inhibitorⅣ能显著抑制FN诱导的MCF-10A细胞形态变化、迁移和侵袭能力增强、vimentin、snail和calpain-2蛋白表达上调及E-cadherin蛋白表达下调.以上研究结果表明,FN诱导MCF-10A乳腺上皮细胞发生EMT可能与上调calpain-2的表达有关,ALLN和calpain inhibitorⅣ能够抑制FN诱导的上皮间质转化.
关键词： 钙蛋白酶抑制剂 MCF-10A乳腺上皮细胞 纤连蛋白 上皮间质转化 钙蛋白酶 -
钙蛋白酶抑制剂对大鼠脑外伤后的神经保护作用分析
目的：分析钙蛋白酶抑制剂对大鼠脑外伤后神经的保护作用。方法选取56只大鼠并进行分组，脑外伤后分别注射钙蛋白酶抑制剂和生理盐水，分析细胞凋亡情况。结果观察组的神经元凋亡比对照组少。结论钙蛋白酶抑制剂对脑外伤后的大鼠具有良好的神经保护作用。
-
钙蛋白酶抑制剂对丙烯酰胺中毒大鼠神经毒性的拮抗作用
目的 探讨钙蛋白酶抑制剂(calpeptin,CP)对丙烯酰胺(acrylamide,ACR)中毒大鼠神经毒性的拮抗作用.方法 将30只健康成年雌性Wistar大鼠随机分为对照组、ACR中毒组、CP干预组3组,每组10只.ACR中毒组腹腔注射ACR30 mg/kg,3次/周,共4周;对照组腹腔注射等体积生理盐水;CP干预组腹腔注射ACR后1h再腹腔注射CP 200 μg/kg,3次/周,共4周.测定体重、步态评分、后肢撑力和神经组织细胞内钙蛋白酶(calpain)活力.结果 与对照组相比,ACR中毒组大鼠体重增加缓慢(P＜0.05);与ACR中毒组相比,CP干预组大鼠体重在第2周显著升高(P＜0.05).ACR中毒组和CP干预组步态评分和后肢撑力明显高于对照组(P＜0.01),CP干预组明显高于ACR组(P＜0.05).ACR中毒组和CP干预组脊髓、坐骨神经细胞中calpain活力均明显高于对照组(CP干预组坐骨神经除外);CP干预组脊髓、坐骨神经细胞中calpain活力明显低于ACR组(P＜0.05).结论 CP可通过抑制钙蛋白酶的活力拮抗ACR诱导的神经毒作用.
-
钙蛋白酶抑制剂对丙烯酰胺染毒神经干细胞毒性的干预模型
目的 建立钙蛋白酶抑制剂MDL-28170对丙烯酰胺(ACR)诱发神经干细胞(NSCs)毒性的干预模型.方法 取Wistar新生大鼠的脊髓背根神经节进行体外细胞培养,采用细胞免疫化学染色检测细胞的巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以进行NSCs鉴定.将处于对数生长期的NSCs分为对照(培养液)组和ACR单独染毒(140、350、560、700 μmol/L)组及MDL-28170干预(700 μmol/L ACR+65、130、195、260 μmol/L MDL-28170)组,暴露48 h后,采用MTT法测定细胞存活率.结果 细胞的nestin、NSE及GFAP鉴定结果均呈阳性.与对照组相比,仅700 μmol/L ACR染毒组NSCs的存活率较低,各剂量MDL-28170干预组NSCs的存活率均较低,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着ACR染毒剂量的升高,NSCs的存活率呈下降趋势.与700 μmol/LACR染毒组相比,65、130 μmol/LMDL-28170干预组NSCs的存活率均较高,而260 μmol/L MDL-28170干预组NSCs的存活率较低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功建立钙蛋白酶抑制剂对ACR诱发NSCs毒性的干预模型.
-
钙蛋白酶抑制剂治疗癌性恶病质小鼠的实验研究
目的:研究钙蛋白酶抑制剂ALLN (N-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal)对癌性恶病质小鼠的治疗作用.方法:将24只小鼠随机分成三组,即A组(健康对照组)、B组(荷瘤对照组)和C组(荷瘤+钙蛋白酶抑制剂治疗组),每组8只.将小鼠结肠腺癌Colon26(C26)细胞接种于B、C组小鼠右前腋窝皮下,建立恶病质模型后,C组小鼠用钙蛋白酶抑制剂ALLN干预7d.每天监测小鼠体质量、摄食量、肿瘤体积.干预结束后,处死小鼠,检测去瘤体质量、腓肠肌和附睾脂肪湿重、血生化和细胞因子水平、骨骼肌中Calpain-1和泛素mRNA的表达. 结果:与A组小鼠比,B组小鼠终末体质量、去瘤体质量、右后腓肠肌和双侧附睾脂肪湿重、血清总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)和血糖(Glu)明显下降(P＜0.01)；三酰甘油(TG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和C-反应蛋白(CRP)明显升高(P＜0.01)；肌肉组织中钙激活蛋白酶-1(Calpain-1)和泛素mRNA表达升高(P＜0.01).C组与B组比,血糖差异无统计学意义(P＞0.05),其他各指标均有不同程度的改善. 结论:钙蛋白酶抑制剂可能是通过抑制钙蛋白酶,减少肌肉蛋白消耗,从而改善癌性恶病质.
-
甲基强的松龙与钙蛋白酶抑制剂对大鼠缺血再灌注损伤脊髓保护作用比较
[目的]观察脊髓缺血再灌注损伤后应用甲基强的松龙和钙蛋白酶抑制剂E-64-D,脊髓组织钙蛋白酶表达和活性的变化及对动物后肢功能的影响.[方法]纯种雄性成年SD大鼠,夹闭右肾动脉分支下腹主动脉30 min,造成动物脊髓缺血再灌注损伤(B组),再灌注后静脉应用钙蛋白酶特异性抑制剂E-64-D(C组)或甲基强的松龙(D组),观察3、24、72 h和7 d后脊髓损伤节段的钙蛋白酶的表达,及钙蛋白酶特异性底物68-KD NFP的降解和动物后肢功能情况.[结果]脊髓再灌注损伤后3 h,开始出现的钙蛋白酶阳性细胞,于再灌注后72 h明显.68-KD NFP的降解产物也在再灌注损伤后3 h出现,并在72 h后达到高峰.应用E-64-D和甲基强的松龙后,钙蛋白酶的表达和68-KD NFP的降解得到抑制,而且E-64-D的抑制作用明显强于甲基强的松龙,结果具有显著性差异(P＜0.01).[结论]脊髓缺血再灌注损伤后两种治疗方法均可不同程度地保护脊髓组织和动物后肢的运动功能.
-
钙蛋白酶抑制剂ALLN、外源性泛素-蛋白酶体片段Ⅱ单用及联用对去血清饥饿诱导大鼠骨骼肌细胞凋亡降解的影响及机制
目的 探讨钙蛋白酶抑制剂ALLN (n-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal)与外源性泛素-蛋白酶体片段Ⅱ(UPFⅡ)单用及联用对去血清饥饿大鼠骨骼肌细胞凋亡的影响及机制.方法 离体培养3～5日龄SD大鼠骨骼肌细胞,苏木素-伊红(HE)染色及骨骼肌肌动蛋白免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞,传至5～6代骨骼肌细胞稳定成熟,随机分为5组进行干预:A组(完全培养基对照组)、B组(去血清饥饿对照组)、C组(去血清饥饿+ UPFⅡ组)、D组(去血清饥饿+UPFⅡ+ALLN组)、E组(去血清饥饿+ ALLN组).药物干预72h后,噻唑蓝(MTT)法测定各组细胞的存活率,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各组细胞中钙蛋白酶(Calpain)-3、肌肉环指蛋白-1(MuRF-1)、Atrogin-1 的mRNA表达.结果 MTT结果显示:与A组比较,B、C、D、E组细胞存活率分别为(57.89±5.07)％、(41.22±4.87)％、(56.94 ±6.02)％、(69.72±6.25)％,存活率均下降(P＜0.05);FQ-PCR结果显示:与A组比较,B、C、D、E组Calpain-3、MuRF-1、Atrogin-1的mRNA表达量分别为23.71、23.18、22.22倍;24.52、24.10、23.29倍;23.78、23.11、22.15倍;22.60、22.37、21.65倍,差异有统计学意义(P＜0.05);E组细胞存活率较B、C、D组均高(P＜0.05),各基因mRNA表达量均明显降低(P＜0.05);D组细胞存活率较C组高(P＜0.05),各基因mRNA表达量均明显降低(P＜0.05);B组与D组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 适量ALLN在一定程度上能有效降低去血清饥饿诱导大鼠骨骼肌细胞的凋亡率;适量ALLN在一定程度上可以减弱UPFⅡ对去血清饥饿大鼠骨骼肌细胞凋亡的促进作用.
-
钙蛋白酶抑制剂、α-硫辛酸单用及联用治疗癌性恶病质
目的 探讨钙蛋白酶(caplain)抑制剂ALLN(N-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal)、α-硫辛酸(α-LA)单用及联用对癌性恶病质小鼠的治疗效果及其机制.方法 结肠腺癌Colon26 (C26)细胞接种于小鼠前腋窝皮下构建恶病质模型.药物干预7d后检测去瘤体质量、腓肠肌湿重、血生化、细胞因子水平、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、肿瘤组织核因子-κB(NF-κB)表达及骨骼肌中caplain-1和泛素mRNA表达.结果 荷瘤对照组caplain-1与泛素mRNA表达值分别为0.84 ±0.10、2.68±0.08,ALLN组、α-LA组、ALLN+ α-LA组caplain-1表达值分别为0.59 ±0.07、0.65±0.07、0.57 ±0.04,泛素mRNA表达值分别为2.29±0.07、2.34 ±0.05、2.20±0.10,均低于荷瘤对照组(P＜0.05),其他指标亦有不同程度的改善(P＜0.05).结论 caplain抑制剂和α-硫辛酸均具改善癌症恶病质的作用,两者联合应用效果更好.
-
慢性阻塞性肺疾病模型大鼠膈肌中钙蛋白酶/钙蛋白酶抑制剂的表达
目的:探讨钙蛋白酶/钙蛋白酶抑制剂(calpains/calpastatin)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠膈肌中的表达.方法:40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和COPD组,COPD组采用反复烟熏染毒及气管滴入脂多糖法复制大鼠COPD模型.观察大鼠肺组织及膈肌组织病理学变化,免疫组织化学法、RT-PCR测定大鼠膈肌中calpains和calpastatin蛋白及m-RNA的表达.结果:COPD组可见膈肌萎缩,对照组未见明显萎缩.COPD组膈肌中calpains蛋白及m-RNA表达均较对照组增强(P<0.05),calpastatin蛋白及m-RNA的表达均较对照组明显减弱(P<0.05).结论:calpains/calpastatin表达失衡,可能参与COPD膈肌萎缩.
-
钙蛋白酶抑制剂对大鼠脑外伤后的神经保护作用
目的:探讨钙蛋白酶抑制剂对大鼠颅脑外伤的神经保护作用.方法:利用自由落体撞击装置,制作脑外伤模型.将大鼠随机分为实验组(n=32)和对照组(n=32),撞击前一天经侧脑室给药,实验组和对照组分别给予钙蛋白酶抑制剂和生理盐水,撞击后30分钟、6小时、24:b时、3天分别处死大鼠,TUNEL法检测海马区细胞凋亡情况.结果:撞击后各时间点实验组较对照组神经功能评分明显减少(P＜0.05);神经元的凋亡也有显著的减少(P＜0.05).结论:钙蛋白酶抑制剂对脑外伤后大鼠有神经保护作用,其作用机制可能与阻止神经细胞凋亡有关.
-
Calpain与眼部疾病的相关性研究进展
Calpain(钙蛋白酶)是一族广泛存在于包括晶状体、视网膜等在内的全身各脏器组织中的钙离子浓度依赖性中性蛋白酶.分为普通型和特异型两大类,其中特异型calpain与组织特定功能的关系尤为密切.在白内障、糖尿病性视网膜病变、遗传性视网膜色素变性等眼病中起重要作用.Cal-pain蛋白酶抑制剂对动物实验性白内障有一定的预防和治疗作用.
关键词： 钙蛋白酶 白内障 糖尿病性视网膜病变 遗传性视网膜色素变性 钙蛋白酶抑制剂
