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钙蛋白酶抑制剂对纤连蛋白诱导的MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化的影响
本研究观察钙蛋白酶抑制剂(ALLN和calpain inhibitor Ⅳ)对纤连蛋白(FN)诱导的MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化(EMT)的影响.FN作用MCF-10A细胞48 h后,采用划痕修复实验检测MCF-10A细胞的迁移能力;基质胶包被的transwell小室实验检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测波形蛋白(vimentin)、E-钙粘着蛋白(E-cadherin)、锌指蛋白(snail)和钙蛋白酶-2(calpain-2)的表达.研究结果显示,FN诱导MCF-10A细胞形态发生改变;显著增加MCF-10A细胞的迁移和侵袭能力;上调calpain-2、vimentin和snail蛋白表达,下调E-cadherin蛋白水平.ALLN和calpain inhibitorⅣ能显著抑制FN诱导的MCF-10A细胞形态变化、迁移和侵袭能力增强、vimentin、snail和calpain-2蛋白表达上调及E-cadherin蛋白表达下调.以上研究结果表明,FN诱导MCF-10A乳腺上皮细胞发生EMT可能与上调calpain-2的表达有关,ALLN和calpain inhibitorⅣ能够抑制FN诱导的上皮间质转化.
关键词： 钙蛋白酶抑制剂 MCF-10A乳腺上皮细胞 纤连蛋白 上皮间质转化 钙蛋白酶 -
Ca2+/calpain信号调控纤连蛋白诱导的MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化的作用
目的:观察Ca2+/calpain信号通路在纤连蛋白(FN)诱导MCF-10A乳腺上皮细胞-间质转化(EMT)中的作用.方法:以正常培养MCF-10A乳腺上皮细胞为实验对象.采用比色法检测细胞内Ca2+浓度;采用荧光分光光度法检测钙蛋白酶-2(calpain-2)活性;Western blot法检测calpain-2、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)的表达;采用划痕修复实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力.结果:FN诱导MCF-10A细胞中Ca2+浓度、calpain-2活性表达明显升高,上调vimentin、calpain-2蛋白表达,下调E-cadherin蛋白水平;FN诱导MCF-10A细胞迁移和侵袭能力显著增强.钙离子螯合剂(BAPTA-AM)和氨氯地平(amlodipine)均能显著抑制FN诱导的细胞Ca2+浓度、calpain-2活性及表达升高;抑制vimentin蛋白表达上调及E-cadherin蛋白表达下调;抑制FN诱导MCF-10A细胞迁移和侵袭能力增强.结论:BAPTA-AM和Amlodipine均能够抑制FN诱导的上皮间质转化.FN能够诱导MCF-10A乳腺上皮细胞发生EMT,可能与Ca2+/calpain信号通路激活有关.
关键词： 钙离子螯合剂 氨氯地平 MCF-10A乳腺上皮细胞 纤连蛋白 上皮间质转化
