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腺嘌呤致大鼠雄性不育发病机理的实验研究
目的探讨转化生长因子-β(TGF-β)超家族的细胞内信号转导分子Smad 2、Smad 4蛋白在腺嘌呤所致雄性不育的大鼠睾丸内定位、分布及作用机制.方法应用免疫组织化学SABC法检测正常成年及腺嘌呤(300mg/kg)灌胃后第7、14、21 d大鼠睾丸中Smad 2、Smad 4的定位和分布,并通过图像分析系统进行统计学分析,同时应用放射免疫法测定血清中睾酮(T)、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的含量.结果Smad 2免疫阳性产物位于实验大鼠各级生精细胞及支持细胞的胞质内,Samd 4则位于间质细胞的胞质内;灌胃后第21 d大鼠睾丸中Smad2、Smad 4表达明显高于正常成年及7、14 d大鼠,同时,血清中T较正常成年及7、14 d大鼠明显降低,LH、FSH明显增高.结论腺嘌呤所致雄性不育可能与Smad 2在大鼠睾丸生精细胞中表达增强及Smad 4在睾丸间质细胞中表达增强,直接或间接影响睾丸的生精功能有关.
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Smad 2和Smad 4蛋白在成年大鼠睾丸的表达
目的探讨转化生长因子-β超家族肽类的细胞内信号转导分子Smad 2和Smad 4蛋白在成年大鼠睾丸的表达及在精子发生中的作用机理. 方法用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵增强技术,检测成年大鼠睾丸Smad 2和Smad 4蛋白的表达和定位. 结果 Smad 2蛋白主要表达在大鼠睾丸生精小管的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、支持细胞和间质细胞中,免疫反应物质主要定位于细胞质 ,胞核为阴性;而Smad 4蛋白则主要表达于间质细胞的胞质中,支持细胞呈弱阳性染色. 结论 Smad 2蛋白主要表达于睾丸生精小管各级生精细胞,Smad 4蛋白表达于间质细胞,为揭示TGF-β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据.
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细胞浆信息传递介质Smad 4在兔晶状体上皮细胞增殖中的作用
目的探讨细胞浆信息传递介质Smad 4在兔晶状体上皮细胞增殖及转化中的作用.方法将健康白色家兔63只随机分成实验组(49只)及对照组(14只),实验组兔双眼行透明晶状体皮质吸除术,对照组兔不做处理.在术后1及3 d,1周、1、2、3及5个月分别处死7只实验组兔及2只对照组兔,分别应用原位杂交及免疫组化技术检测晶状体上皮细胞中Smad 4 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达.结果正常兔晶状体上皮细胞胞浆中Smad 4 mRNA表达呈弱阳性.术后1 d晶状体赤道部及前囊下部Smad 4 mRNA无表达,吸光度(A)值与术前相比,差异有显著意义(P<0.01);术后3 d Smad 4 mRNA呈阳性表达,且随时间延长表达逐渐增强,晶状体赤道部细胞在术后1周时Smad 4 mRNA表达强;晶状体前囊下部细胞在术后1个月时Smad 4 mRNA表达强.PCNA的表达在术后1 d强,之后逐渐减弱,术后1个月时恢复至术前水平.术后1～2个月,晶状体赤道部出现转化的成纤维细胞,Smad 4 mRNA呈阳性表达.结论 Smad 4 mRNA在正常晶状体上皮细胞胞浆中有表达,Smad 4参与晶状体上皮细胞的增殖代谢过程,可能促使晶状体上皮细胞转化为成纤维细胞.
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TGF-α、Smad 4在大肠癌中的表达及意义
转化生长因子与EGF-R结合,诱导自身磷酸化反应,促进细胞增殖、分化,恶性变.Smad 4抑癌基因,阻碍ERK活化,其缺失则解除TGF-β信号途径的生长抑制效应.本文重点对TGF-α、Smad 4结构、功能、作用机制及在大肠癌中表达,临床意义进行综述.
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RNA干扰技术抑制smad4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响
目的:探讨用RNA干扰技术下调smad4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响.方法:用DNA重组技术将针对人smad4基因不同部位所设计的三对短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4 shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3.脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆.MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测抑制smad4基因对宫颈癌细胞增殖的影响.结果:成功构建分别携带三段shRNA及空载体对照的重组质粒pGenesil-smad4-shRNA1、2、3和pGenesil-con,三种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4 mRNA及smad4蛋白表达,筛选出的HeLa/shRNA2细胞增殖能力明显增强.结论:应用RNA干扰技术能筛选出特异而高效阻断smad4基因表达及功能的shRNA,smad4基因表达下调能明显促进宫颈癌细胞生长.
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人膀胱癌中TGF-β1及其信号转导分子的表达及意义
目的:探讨转化生长因子-β1(transforming growthfactor β1,TGF-β1)及其超家族肽类的细胞内转导分子Smad 4和Smad 7在人膀胱癌中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学方法,对经过石蜡包埋的膀胱癌和正常膀胱组织进行定性和定位检测.结果:Smad 4在正常膀胱组织中的表达率较高,膀胱癌中较低,差异有统计学意义(P＜0.05);TGF-β1、Smad 7在正常膀胱组织中表达不明显或无表达,在膀胱癌中表达率较高,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);TGF-β1与Smad7的表达水平呈正相关(P＜0.01)TGF-β1与Smad 4的表达水平呈负相关(P＜0.01).结论:TGF-β1和Smad 7蛋白的阳性表达与膀胱癌发生、发展密切相关,参与膀胱癌恶性转化,而Smad 4对膀胱癌的进展有抑制作用.
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Smad4与Cox-2在胃癌中的表达及其临床意义
目的 研究胃癌组织中Smad 4与环氧合酶-2(Cox -2)蛋白的表达情况及其与临床病理特征之间的关系.评价Smad 4和Cox -2在胃癌预后判定中的价值.方法 选取49例胃癌根治手术标本作为研究对象.利用免疫组化检测Smad 4和Cox -2在胃癌中的表达,分析其与胃癌的关系.结果 胃癌组织中Smad 4的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、TNM分期及预后有关,而Cox-2在胃癌中的表达与肿瘤的淋巴结转移、TNM分期及预后有关,Smad4和Cox-2表达具有相关性(R =- 0.362,P＜0.05),Smad 4、Cox -2联合表达与肿瘤的淋巴结转移、TNM分期及预后有关.结论 Smad 4与Cox-2可能参与胃癌的发生、发展,Smad 4阴性表达和Cox-2阳性表达在胃癌的发生、发展中起着一定作用,且2者之间具有相关性.Smad 4阴性表达和Cox -2阳性表达可作为胃癌侵袭性和预后评估的生物学指标.
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熊果酸对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的:探讨熊果酸(UA)对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法 采用MTT法观察UA对SiHa细胞增殖的影响,流式细胞术检测UA对细胞周期和凋亡率的影响,Hoechst33258荧光染色和透射电镜观察凋亡细胞的形态变化,RT-PCR技术检测SiHa细胞中转化生长因子(TGF)-β1mRNA和Smad 4 mRNA表达的变化.结果 UA可明显抑制SiHa细胞生长,并呈时间和浓度依赖趋势(P＜0.05或0.01)；流式细胞术检测发现,UA作用24h、48 h和72 h后SiHa细胞周期阻滞在G0/G1期,并检测到凋亡峰,凋亡率分别为1.16％、16.37％、18.70％(P＜0.05或0.01)；Hoechst33258荧光染色观察可见胞核染色质不均,呈颗粒状或块状荧光,透射电镜观察出现胞质浓缩、胞核染色质凝聚、边集等典型凋亡细胞核形态变化；RT-PCR检测到TGF-β1mRNA表达减弱,并呈时间依赖趋势,Smad 4 mRNA表达随时间延长而增强.结论 熊果酸在体外对SiHa细胞具有抗增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与TGF-β/Smads信号传导通路有关；UA可能通过上调Smad 4的表达恢复TGF-β/Smads信号传导通路,从而诱导细胞凋亡.
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口腔癌患者血清中白细胞介素-8、Smad4水平与淋巴结转移度及临床预后的关系
目的 探讨口腔癌患者血清中IL-8、Smad 4表达水平与淋巴结转移度及临床预后的关系.方法 选取2012年5月-2016年5月在本院行手术治疗的86例口腔癌患者作为研究对象,所有患者均采用酶联免疫吸附法检测癌组织中IL-8、Smad 4表达水平,采用Logistics回归分析探讨癌组织中IL-8、Smad 4表达与患者淋巴结转移度、化疗效果的关系,及与患者临床预后的关系.结 果86例患者中CR 20例、PR 39例、SD 12例、PD 15例,未出现患者死亡;CR、PR组患者IL-8 、Smad 4蛋白表达阴性率高于阳性患者,而SD、PD组患者IL-8、Smad 4蛋白表达阴性率低于阳性患者;LNR低水平组患者IL-8、Smad 4阴性表达率明显更高,LNR高水平组IL-8、Smad 4阳性表达和强阳性表达率明显更高.多因素分析结果提示:LNR、Smad 4强阳性、IL-8强阳性是口腔癌患者转移或复发的独立危险因素(p＜0.05).结论 IL-8和Smad 4阳性表达是口腔癌患者术后新辅助化疗效果差,预后差的重要危险因素.
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SEL 1L和Smad 4蛋白表达与食管癌生物学行为的相关性研究
目的 探讨食管癌组织中的SEL 1L蛋白、Smad 4蛋白的表达与食管癌生物学行为的相关性.方法 应用免疫组织化学S-P法检测90例手术切除的食管鳞状细胞癌,35例距癌灶边缘5 cm以上切缘的正常黏膜,60例癌旁黏膜及20例内窥镜活检的食管鳞状上皮不典型增生组织中SEL 1L蛋白和Smad 4蛋白的表达.结果 (1)SEL 1L蛋白在食管鳞状细胞癌的表达阳性率为87.8%,在食管鳞状上皮不典型增生中的表达阳性率为90.0%,分别较食管正常黏膜(14.3%)和癌旁黏膜(13.3%)高(P＜0.01).SEL 1L蛋白表达与患者性别、年龄和肿瘤的位置、大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均无明显相关性(P＞0.05).(2)Smad 4蛋白在食管鳞状细胞癌的表达阳性率为48.9%,较食管正常黏膜(88.6%)、癌旁黏膜(83.3%)和食管鳞状上皮不典型增生(70.0%)低(P＜0.01);临床分期ⅡB+Ⅲ期和有淋巴结转移的食管鳞状细胞癌组织Smad 4蛋白的阳性率明显低于临床分期Ⅰ+ⅡA期和无淋巴结转移的食管鳞状细胞癌组织(P＜0.05);Smad 4蛋白的表达与肿瘤组织分化程度呈正相关(r=0.347,P＜0.01),而与患者性别、年龄和肿瘤的位置、大小、浸润深度无明显相关性(P＞0.05).(3)食管鳞状细胞癌组织中SEL 1L蛋白和Smad 4蛋白的表达呈明显负相关(r=-0.314,P＜0.01).结论 (1)SEL 1L蛋白过表达可能是食管鳞状细胞癌发生的早期表现,SEL 1L蛋白的检测可作为识别食管癌高风险患者的生物学标记物.(2)Smad 4蛋白的低表达在食管癌的发展及侵袭转移中具有重要作用.(3)SEL 1L蛋白和Smad 4蛋白在食管癌的发生发展过程中具有协同作用;联合检测食管癌中SEL 1L蛋白和Smad 4蛋白的表达,比单一检测一种蛋白对评估食管癌的发生、发展及预后更具有意义,也为临床治疗食管癌提供了一条新的思路.
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Smad 4、Smad 6、Smad 7在胰腺癌中的改变及其相互关系
目的研究Smad 4、Smad 6和Smad 7在胰腺癌组织中的改变及其相互关系.方法采用半定量RT-PCR法分别检测了17例胰腺癌和6例正常胰腺组织中Smad 4、Smad 6和Smad 7的mRNA表达情况.结果5例胰腺癌组织不表达Smad 4,占29.4%;胰腺癌组织中Smad6和Smad7的表达水平分别为1.15±0.51和1.44±0.84,正常胰腺组织S mad6和Smad 7的表达水平分别为0.47±0.18和0.39±0.29,两者相比有统计学意义(P＜0.05);Smad6和Smad7的表达水平和Smad4表达无相关性.结论Smad4纯合性缺失在胰腺癌中的发生率约为30%,在胰腺癌的发病机制中占有值得重视的地位;Smad 6和Smad 7在胰腺癌组织中存在过表达现象,可能是导致胰腺癌发生的原因之一.
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Smad 4和Galectin-3在胃癌中的表达及其临床意义
目的研究黏附分子Galectin-3和抑癌基因Smad4在正常组织和胃癌中的表达及其临床意义.方法采用S-P免疫组化法检测Galectin-3和Smad 4在胃癌及其邻近正常组织中的表达.所有标本都使用武汉同济千屏HPIAS-2000图像分析软件进行定量分析.结果Galectin-3在胃癌中的阳性表达率为85.9％,约有46％表现出核染色.Galectin-3阳性表达以及染色强度与胃癌的分化程度密切相关(P＜0.001),分化越低,染色强度越深,在淋巴结转移的癌组织中表达更明显(P=0.001),与正常组织比较,具有显著的差异性(P＜0.001).Smad 4主要在正常组织细胞浆中表达,在胃癌组织中阳性表达率为59.36％,随着分化程度降低,表达逐渐减少,染色强度也逐渐减弱,尤其在低分化胃癌中更为明显(P＜0.001).与正常组织相比,Smad 4减弱具有明显差异性(P＜0.01).结论Galectin-3表达增强与Smad4蛋白表达减弱都与胃癌的分化程度以及淋巴结转移有关,同时检测,能提高预测胃癌进展程度的准确性,是判断胃癌患者淋巴结转移和预后较好的方法.
关键词： Galectin-3 Smad 4 胃癌 淋巴结转移 -
TGF-β1、Smad4在宫颈组织的表达及意义
目的 研究转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)和Smad 4在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及ⅠA2-ⅡA宫颈鳞状细胞癌(squamous carcinoma of the cervix,SCC)中的表达,并探讨其与SCC患者临床病理资料之间的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测TGF-β1、Smad 4在35例CIN、50例SCC、10例正常宫颈组织中的表达并分析其在肿瘤不同临床病理特征之间的关系.结果 TGF-β1蛋白在正常宫颈鳞状上皮组织、CIN、SCC组织中表达强度渐增加,3组之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05);且TGF-β1在SCC中的表达强度与SCC的病理分级、有无淋巴结转移、浸润深度密切相关(P＜0.05).Smad 4蛋白在正常宫颈鳞状上皮组织、CIN、SCC组织中表达强度渐减弱,3组之间比较,差异有统计学意义(P＜0.05),且Smad 4在SCC中的表达强度与SCC的病理分级、有无淋巴结转移密切相关(P＜0.05).TGF-β1和Smad 4在SCC中的表达呈负相关性(P＜0.05).结论 TGF-β1、Smad 4蛋白可能在SCC发生发展以及转移方面发挥了一定的作用,它们的表达与SCC病理分级有关,有望作为判断SCC恶性程度的指标.
