RGD刺激整联蛋白增加心肌细胞对大分子物质的摄取

目的 探讨刺激新生大鼠心肌细胞(NRCMs)整联蛋白增加某些大分子物质的摄取及其机制. 方法 以100～300mg/L 甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬酰胺-色氨酸序列(RGD)刺激NRCMs整联蛋白,同时加入不同浓度德克萨斯红标记的卵蛋白(OTR)、右旋糖苷(DTR),孵育8h、16h、24h,应用免疫荧光技术研究心肌细胞对OTR、DTR的摄取及Dysferlin面积.结果 RGD增加NRCMs对OTR、DTR的摄取(与对照组比较P<0.001,P<0.05),并与孵育时间呈正相关(P<0.001),OTR的摄取与其浓度呈正相关(P<0.001).RGD组Dysferlin面积为无RGD组的3倍.RGD刺激非搏动的心肌细胞,不增加OTR、DTR的摄取,亦不增加Dysferlin面积. 结论 RGD刺激增加NRCMs对OTR、DTR的摄取.Dysferlin参与RGD诱导的心肌细胞膜损伤的修复过程.RGD诱导的心肌细胞膜损伤与细胞的收缩活动相关.

按摩对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后膜修复蛋白dysferlin和annexin A1表达的影响

目的:研究大鼠骨骼肌急性钝挫伤后,按摩对细胞膜特异性修复蛋白dysferlin和annexin A1表达的影响,探讨按摩促进骨骼肌急性损伤修复的可能机制.方法:42只成年SD雄性大鼠随机抽取6只作为正常对照组,其余36只为模型组.模型组在建立右下肢急性腓肠肌钝挫伤模型后,随机分为自然恢复组和按摩治疗组,根据治疗时间分为损伤后7d、14d、21d三个时间点,每个时间点6只.正常对照组和自然恢复组不做治疗;按摩治疗组在建模后48h开始每天于损伤局部行按摩治疗.免疫荧光双标法标记dysferlin和annexin A1,运用激光共聚焦显微镜摄片,观察其在细胞内分布及表达;运用蛋白质印迹法检测其表达量.结果:激光共聚焦显微镜结果显示:正常肌细胞中两种荧光信号主要分布于近细胞膜周围,强度较弱,无共表达现象;模型组各时间点,两种荧光信号强度均明显增加,胞浆内也有弥散性分布,随时间的延长,信号强度逐渐减弱,细胞膜共表达现象增加;其中按摩治疗组荧光信号强度较同时期自然恢复组减弱明显,细胞膜上共表达现象增多.蛋白质印记结果显示:模型组各时间点较正常对照组,dysferlin和annexin A1蛋白表达升高,差异显著;随着时间的延长,模型组蛋白表达量均下降,自然恢复组和按摩治疗组在损伤后14d和21d比较,差异均有显著性意义(P＜0.05);损伤后21d,自然恢复组较按摩治疗组dysferlin表达量比较,差异有显著性意义(P＜0.05);损伤后14d和21d,自然恢复组较按摩治疗组annexin A1表达量比较,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:这可能是其促进肌细胞膜修复相关机制之一.

The relative frequencies of different subtypes of limb-girdle muscular dystrophies vary widely among different populations. We estimated the percentage of limb-girdle muscular dystrophy sub-types in Chinese people based on 68 patients with limb-girdle muscular dystrophy from the Myology Clinic, Neurology Department, First Hospital of Jilin University, China. A diagnosis of calpainopathy was made in 12 cases (17%), and dysferlin deficiency in 10 cases (15%). Two biopsies revealedα-sarcoglycan deficiency (3%), and two others revealed a lack of caveolin-3 (3%). A diagnosis of unclassified limb-girdle muscular dystrophy was made in the remaining patients (62%). The ap-pearances of calpain 3-and dysferlin-deficient biopsies were similar, though rimmed vacuoles were unique to dysferlinopathy, while inflammatory infiltrates were present in both these limb-girdle muscular dystrophy type 2D biopsies. Macrophages were detected in seven dysferlinopathy biop-sies. The results of this study suggest that the distribution of limb-girdle muscular dystrophy sub-types in the Han Chinese population is similar to that reported in the West. The less necrotic, re-generating and inflammatory appearance of limb-girdle muscular dystrophy type 2A, but with more lobulated fibers, supports the idea that calpainopathy is a less active, but more chronic disease than dysferlinopathy. Unusual features indicated an extended limb-girdle muscular dystrophy disease spectrum. The use of acid phosphatase stain should be considered in suspected dysferlinopathies. To the best of our knowledge, this is the first report to define the relative proportions of the various forms of limb-girdle muscular dystrophy in China, based on protein testing.

刺激心肌细胞整联蛋白和Dysferlin增加其对大分子物质的摄取

目的 研究刺激新生大鼠心肌细胞(NRCMs)整联蛋白及dysferlin是否增加NRCMs对某些大分子物质的摄取及其机制.方法 以甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬酰胺-色氨酸序列(Gly-Arg-Gly-Asp-Ser,RGD)刺激NRCMs整联蛋白及dysferlin,同时加入不同浓度德克萨斯红标记的卵蛋白(OTR)、右旋糖苷(DTR),孵育8、16、24 h,研究NRCMs对OTR、DTR的摄取及Dysferlin面积.n=30.结果 RGD增加NRCMs对OTR、DTR的摄取(与对照组比较P＜0.001).并与孵育时间呈正相关(P ＜0.001).OTR、DTR的摄取与其浓度呈正相关(P＜0.001).RGD组Dysferlin面积为无RGD组的3倍.结论 RGD刺激整联蛋白及dysferlin增加NRCMs对OTR、DTR的摄取.Dysferlin参与RGD诱导的心肌细胞膜损伤的修复过程.

无症状/轻症状高肌酸激酶血症20例临床研究

目的 明确无症状/轻症状高肌酸激酶血症的病因及肌肉病理的诊断价值.方法 对20例无症状/轻症状高肌酸激酶血症患者行肌肉病理检测,部分病例进一步行酶学和基因检测.结果 纳入的20例患者中,病理异常17例(85.0％),提示诊断11例(55.0％):dysferlin相关肌病6例,dystrophin相关肌病4例,Pompe病1例;另3例分别确诊为calpain相关肌病、炎性肌病及药物相关肌病.共14例(70.0％)获得确诊.肌酸激酶＜2 000 U·L-1、2 000～10 000 U·L-1和＞10 000 U·L-1患者中分别确诊2/4例(50.0％)、9/13例(69.2％)和3/3例(100.0％).结论 肌肉活检对无症状/轻症状高肌酸激酶血症患者的诊断有重要价值;肌酸激酶水平与确诊率有一定关联.

老年退行性改变中的心肌细胞膜蛋白的变化

目的 研究老年退行性改变衰老进程中的心肌细胞膜蛋白dystroglycan(DG)与dysferlin(DYSF)的变化以及二者之间的相关关系.方法 比较20～24个月的老龄野生型小鼠和12～16周的壮龄野生型小鼠的心肌细胞膜蛋白DG与DYSF 蛋白功能与水平;比较心肌组织特异性DG基因敲除的突变型小鼠及其对照野生型小鼠的DYSF水平变化.结果 老龄小鼠DG与laminin的结合活性下降,DYSF蛋白含量下调至壮龄小鼠的93.58 %,但统计学差异不显著;心肌组织特异的DG缺失突变型小鼠DYSF蛋白含量上调至野生型小鼠的106.86 %,但统计学差异不显著.结论 DG与DYSF在老龄化退行性改变的自然衰老过程当中确是高度保守的膜蛋白,DG缺陷肌营养不良并非主要地通过DYSF途径代偿.

Dysferlin在子痫前期发病机制中的研究

子痫前期是一种严重的妊娠并发症,发病率约为2％-8％,是孕产妇和围产儿发病及死亡的主要原因之一,严重威胁母婴健康,然而其病因和发病机制至今尚未完全阐明.有研究表明,胎盘在子痫前期的发生中是一个关键.在整个孕期,母婴物质交换位于胎盘的合体滋养层顶端质膜,同时,免疫和细胞修复也发生于此[1].因此在胎盘滋养细胞中寻找与子痫前期相关基因成为病因研究的热点.Dysferlin是人体内一种与细胞膜自身修复有关的跨膜蛋白,在骨骼肌膜修复过程中起着重要作用[2].近期有研究表明,Dysferlin也参与了合体滋养细胞的质膜修复.本文就Dysferlin在子痫前期发病机制作一综述.

Dysferlin在子痫前期胎盘中的表达

目的:探讨Dysferlin在子痫前期(preeclampsia,PE)胎盘中的表达及可能意义.方法:随机选择PE患者20例,其中轻度PE 10例(轻度PE组),重度PE 10例(重度PE组),正常对照10例(对照组),取其胎盘中央母体面组织制成石蜡块.用免疫组化SP法观察Dysferlin在各组胎盘的表达及分布,并作定量分析.结果:Dysferlin在胎盘绒毛合体滋养细胞层表达阳性,亦在内皮细胞出现阳性表达.其表达强度在对照组为27.31±14.09,轻度PE组为39.64±17.29,重度PE组为48.35±12.83,各组间的表达差异有统计学意义(P<0.05).结论:Dysferlin在胎盘表达阳性,可能跟PE发病有关,并随病情加重表达增强.