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重阳木花粉过敏原的分离、纯化和鉴定
目的 对重阳木花粉变应原蛋白进行分离、纯化和鉴定.方法 采用Coca's液提取蕈阳木花粉的粗提液,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离粗提液蛋白质组分,并测定其分子质;收集过敏患者血清,用Western blot法鉴定其变应原成分;通过离子交换层析对重阳木花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定.结果 分离得到重阳木花粉18条蚩白带,其中分子质量为12和14 ku的是重阳木花粉的特异性变应原,通过离子交换柱层析方法纯化得到其相应的纯化蛋白.结论 对重阳木花粉变应原进行了初步的分离、纯化和鉴定,为临床重阳木化粉过敏疾病的诊断和治疗奠定了基础.
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AST同工酶测定方法的建立及临床应用
目的建立快速简便的AST同工酶的分离测定方法及临床观察.方法选择离子交换柱层析法分离AST同工酶,酶动力方法检测酶活性.结果柱高5～5.5cm柱效好,临床观察mAST峰值时间为AMI患者发病第3天,mAST峰值高低与心肌损伤范围、心肌坏死程度呈正相关.结论此方法操作简便,mAST可作为AMI患者病情及预后诊断指标,有望应用于临床.
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红树林放线菌产抗菌活性物质的分离纯化研究
对红树林放线菌产生的抑菌活性物质进行了分离提取,采用的方法为有机溶剂萃取法、酸提取法、离子交换柱层析、大孔吸附树脂柱层析等,获得了两个具有抑菌活性的组分,经HPLC分析两组分均为纯物质,初步确定为核苷类抗生素.
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新型凝胶纯化凝血酶原复合物的工艺探讨
目的：探索新型凝胶Capto DEAE离子交换柱层析纯化凝血酶原复合物的工艺条件。方法健康人混血浆经离心去除冷沉淀后，采用DEAE－Sephadex A－50凝胶进行吸附，经洗涤、洗脱得到洗脱液；将得到的洗脱液超滤脱盐后，再通过Capto DEAE凝胶柱纯化，制备凝血酶原复合物（ prothrombin complex concentrates ，PCC）。测定PCC中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及抗凝蛋白C的活性并计算收率；采用Bradford法测定PCC蛋白浓度，再根据测定的4种凝血因子和蛋白C的活性，计算有效成分的比活；以此分析所选工艺条件下Capto凝胶对PCC的纯化效果。结果不同实验方案下，所得制品中FⅡ、FⅨ、FⅩ收率和纯度均较高，且该3种凝血因子均衡度较好；但FⅦ收率和纯度均较低；其中A方案下PCC收率和纯度较好，即Capto DEAE 凝胶体系平衡液、洗涤液、洗脱液中柠檬酸钠、NaCl、pH分别为0．020～0．028 mol／L、0．10～0．15 mol／L、6．9～7．2；0．012～0．020 mol／L、0．10～0．15 mol／L、6．9～7．2；0．005～0．012 mol／L、2．4 mol／L、7．2～7．5时，FⅨ收率为（74．40±10．89）％，比活为（3．31±0．31） IU／mg，抗凝蛋白C的收率和比活均较高。结论采用DEAE－Sephadex A－50批式吸附及Capto DEAE柱层析相结合的新方法制备PCC ，在所选择条件下，PCC制品的纯度为2．17～3．31 IU／mg，远优于传统工艺制得的产品，此为高品质PCC的制备提供了新的方法。
关键词： 凝血酶原复合物 Capto DEAE凝胶 离子交换柱层析 -
蕲蛇酶纯化技术去除产品中细菌内毒素
目的了解生产蕲蛇酶过程中所用分离纯化柱层析技术去除产品中细菌内毒素.方法采用药典半定量凝胶法测定五步蛇蛇毒先后经DEAE Sepharose F.F.离子交换柱层析、Phenyl Sepharose疏水柱层析、HiLoad 26/60 Sephadex 75 pg凝胶过滤柱层析等技术所得各阶段产品中细菌内毒素的含量;采用Folin-酚试剂法和蕲蛇酶注射液药品标准中的效价测定方法分别测定产品的蛋白含量和酶活力,求出每毫克蛋白和每单位蕲蛇酶所含细菌内毒素的量.结果无论是DEAE Sepharose F.F.离子交换柱层析还是Phenyl Sepharose疏水柱层析或是HiLoad26/60 Sephadex 75 pg凝胶过滤柱层析均有去除细菌内毒素的作用,终所得产品每毫克蛋白所含细菌内毒素为6.3～12.5 EU·mg-1,每单位蕲蛇酶所含细菌内毒素为0.5～1.0 EU·U-1.结论生产蕲蛇酶过程中所用分离纯化柱层析技术具有去除产品中细菌内毒素的作用,所得产品细菌内毒素的含量远低于药典对注射剂的细菌内毒素的含量要求.
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柱层析去热原方法在免疫球蛋白生产中的应用
在免疫球蛋白的生产中,热原质污染是一个很常见、很棘手的问题.对于热原质试验不合格的制品,中国生物制品规程指出,可以用适当的方法加工再制一次,至于用何种方法,如何"再制",各血液制品生产厂家都进行了大量的研究,提出了不少措施.笔者采用离子交换柱层析去热原工艺处理热原试验不合格制品,收到了较好的效果.
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重组人肝再生增强因子的纯化及生物学活性研究
对经大肠杆菌表达的重组人肝再生增强因子进行纯化并观察其对肝损伤小鼠模型的促修复作用。1. 方法：pBV-hALR/JM109工程菌由本室构建，30℃培养至A600＝0.6，42℃诱导表达5h，收集不同诱导时间菌体鉴定rhALR的表达水平。包涵体的洗涤变性，复性后经CM-Sepharose FF离子交换柱层析，收集洗脱峰，行SDS-PAGE，结果经UVP labwork扫描处理软件分析测定rhALR纯度，N端氨基酸分析采用手工Edman降解法。
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眼镜蛇毒粗纯蛋白的柱层析分离及其各馏分的抗肿瘤活性研究
目的:眼镜蛇毒粗纯蛋白的分离及其馏分抗痛活性研究.方法:应用离子交换层析法分离眼镜蛇毒粗纯蛋白,通过高效液相色谱行为分析、含量测定和抗肿瘤活性试验对各馏分进行了性质研究.结果:以Tris-HCI缓冲液(20 mmol·L-1,pH8.0)为洗脱体系,在DEAE-sephacel填料离子交换柱上对眼镜蛇毒粗纯蛋白以O～0.5 mol·L-1氯化钠的Tris-HCL溶液进行线性梯度洗脱,可得到4个洗脱峰.第1个洗脱峰馏分抗癌活性强,含有两类疏水性、紫外吸收特性各异的蛋白混合物；另3个洗脱峰对应馏分蛋白成分较单一.结论:眼镜蛇毒粗纯蛋白分离馏分对体外培养的癌细胞株有一定的抑制作用.
