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新生兔骨髓基质细胞向成骨样细胞诱导分化
新研究表明骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)不仅是具有多向分化能和旺盛增殖活力的细胞,还具有特殊的免疫学特性,表达对异体宿主低免疫原性和免疫抑制作用[1].本实验分离培养的新生兔骨髓基质细胞,经成骨诱导可以为成年兔骨修复提供充足的骨组织工程种子细胞.
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IGF-1对成兔关节软骨细胞体外增殖的影响
目的 研究单独应用胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成兔的关节软骨细胞体外增殖的促进作用,为成人关节软骨的体外培养扩增的理论提供新思路.方法 通过细胞形态学,细胞计数、细胞计量检测成兔关节软骨细胞的存活及增殖.结果 成兔关节软骨细胞增殖活跃.结论 在IGF-1的单独作用下成兔关节软骨细胞在体外增殖能力明显增强.
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成年兔桡骨骨缺损模型的骨缺损长度探讨
目的 建立成年兔桡骨不同尺寸骨缺损模型,确定成年兔桡骨临界性骨缺损长度.方法 选取8月龄雄性新西兰兔18只,随机分为3组,根据骨缺损长度记为A、B和C组,缺损长度依次为10 mm、12 mm和15 mm,每组6只,行双侧手术,共计12侧.分别于术后当日,术后4周、8周和12周行CT检查,应用CT-Hedberg评分评价骨缺损愈合情况.于术后12周处死实验兔,取出尺桡骨标本,通过大体观察及HE染色组织学观察分析缺损区骨愈合情况.结果 术后所有兔均存活,术后12周大体观察见A组中12例(100％)桡骨断端均有连续性骨痂生成,新生骨表面光滑,塑形良好.B组中11例(91.7％)桡骨断端有连续性骨痂生成.C组缺损断端髓腔封闭,缺损区由纤维组织填充.CT图像显示术后4周C组出现5例尺骨骨折现象,骨折侧未计入统计,12周CT图像可见A组和B组完全桥接的桡骨已形成再通的髓腔,C组断端及缺损尺侧仅有少量新骨生成,髓腔封闭.术后各时间点CT-Hedberg评分:C组(1.14±0.38,1.29±0.49,1.57±0.53)明显低于A组(2.42±0.51,3.17土0.58,3.75±0.45)和B组(2.25±0.45,2.67±0.78,3.50±0.67),(P＜0.05),但A组与B组间差异无统计学意义(P＞0.05).组织学结果示A组和B组缺损已修复完全,髓腔再通,C组缺损区由纤维组织填充.结论 在进行成年兔骨缺损研究时,可选择8月龄雄性新西兰兔桡骨构建15mm长骨缺损,但同时应注意由于体质量较大带来的易骨折等并发症.
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依达拉奉对在体成年兔肺缺血再灌注损伤的保护作用
目的:观察氧自由基清除剂依达拉奉对在体成年兔肺缺血再灌注损伤的影响,从而探讨其可能的保护作用机制.方法:由南京农业大学实验动物中心提供的27只健康成年新两兰白兔,随机分为3组:假手术组(Sham,n=5),缺血再灌注组(IR,n=10)和依达拉奉干预组(IR+Edaravone,n=11).用小儿肠钳钳夹左肺门60 min,然后冉开放60 min制备成年兔在体肺缺血再灌注模型.依达拉奉干预组于阻断前和开放前各予静脉注射依达拉奉3 mg/kg.对比观察各组肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力、过氧化氢酶(CAT)活力、总抗氧化能力(T-AOC)、抑制羟自由基能力(IHR)、髓过氧化物酶(MPO)含量.肺组织湿干重比(W/D),并在光镜下比较组织形态学改变.结果:依达拉奉干预组与IR组相比,SOD、GSH-PX、CAT与T-AOC活力显著增高,MDA、MPO含量及W/D显著降低(P<0.05);IR组镜下见有肺间质增宽水肿,大量炎症细胞浸润.肺泡腔中可见明显出血、渗出,部分肺泡萎陷不张;而依达拉奉干预组肺组织上述改变明显减轻.结论:在体成年兔肺缺血前后用依达拉奉处理,可减轻缺血再灌注损伤,其机制可能与依达拉奉自由基清除和抗氧化作用有关.
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病兔中溶血性模仿葡萄球菌的分离鉴定与防制
兔溃疡性脚皮炎是实验兔群的常见病,成年兔发病率较高.该病是由于长期压迫、磨损跖骨部的底面、掌骨指骨部的侧面,引起开创性损伤,继发细菌感染,并可引起上呼吸道及皮肤局部炎症等,后常导致转移性脓毒血症而导致病兔发生急性死亡[1,2].199 9年我省某实验兔饲养室种兔群中发生该病多例,经临床及实验室诊断为溶血性模仿葡萄球菌感染,现报道如下:
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米力农预调对成年兔心肌的保护作用
药物预调(PPC)是近年心肌保护研究的一个重要方向.我们采用兔心离体灌注模型,观察磷酸二酯酶抑制剂米立农对成年心肌预调作用及其效果.
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生长因子促成年兔关节软骨细胞增殖的研究
目的研究促进成年兔关节软骨细胞迅速增殖的方法.方法将体外培养24～28月龄的新西兰大白兔的原代关节软骨细胞中加入不同浓度的胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及IGF-Ⅰ+bFGF联合应用.于24、48及72小时分别进行MTT检测软骨细胞的成活数;检测传3代后各组软骨细胞的总增殖倍数;第14天后,用流式细胞仪检测各组软骨细胞的增殖倍数,观察IGF-Ⅰ、bFGF及IGF-Ⅰ+bFGF联合应用对成年兔关节软骨细胞各时间点的促增殖作用.结果①施加不同浓度的IGF-Ⅰ、bFGF或两者联合应用后各时间点软骨细胞活细胞数明显高于对照组(P＜0.01);②传3代后,三组总增殖倍数也都明显高于对照组(P＜0.01),且两种因子联合应用,增殖倍数明显比应用单个因子时高,有统计学意义(P＜0.01);③培养14天后,增殖指数明显高于对照组(P＜0.01),两种因子联合应用时,增殖指数明显比应用单个因子时高(P＜0.05);而施加两次因子时,增殖指数比施加一次因子时高(P＜0.05).结论 IGF-Ⅰ、bFGF对成年兔关节软骨细胞有明显的促增殖作用,两者之间有协同效应.
关键词： 胰岛素样生长因子-Ⅰ 碱性成纤维细胞生长因子 成年兔 软骨细胞 增殖 -
成年兔关节软骨创伤模型中软骨细胞的分离及体外培养观察
目的: 观察成年兔关节软骨损伤模型中能获得的关节软骨和软骨细胞数量,探讨不同浓度的Ⅱ型胶原酶在不同时间段分离软骨细胞的能力及体外培养所获得的软骨细胞的生物学活性.方法: 建立成年兔关节软骨损伤模型,用0.1%～0.2%Ⅱ型胶原酶消化4小时,每小时收集消化下来的兔膝关节软骨细胞,计数细胞收获率和细胞存活率.体外培养原代及传代细胞,观察细胞形态和生长规律,绘制生长曲线,检测细胞合成Ⅰ、Ⅱ型胶原、蛋白多糖能力.结果: 成年兔膝关节软骨细胞的收获率平均为3603.6×104个/克,细胞存活率平均为97.3%,胶原酶浓度与细胞的获取率无显著关系,但与细胞的存活率相关,在消化时间超过3h后细胞的存活率显著降低,在培养过程中出现易老化现象,原代细胞贴壁时间为48～72h,甲苯胺蓝异染反应较强,Ⅱ型胶原免疫组化染色反应呈强阳性,Ⅰ型胶原免疫组化染色为阴性,传3代细胞形态由卵圆形、多角形变为梭形,甲苯胺蓝染色异染反应较弱,免疫组化Ⅰ型胶原为强阳性而Ⅱ型胶原表达极弱.结论: 0.1～0.2%Ⅱ型胶原酶消化、分批收取细胞具有较高的细胞收获率和存活率,体外培养时,从创伤后关节软骨中获得的原代细胞和1代细胞具有良好的软骨表型,第3代及以后的细胞生物学活性低下.
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非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞用于核移植构建重组胚
目的研究非休眠期成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体,以体外成熟去核兔卵母细胞作为受体进行核移植构建重组胚胎的可行性及囊胚形成率. 方法首先利用新西兰兔骨髓和脂肪为来源分别培养骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞,然后用他们作为核供体,采用卵细胞胞质内直接注射法构建重组胚胎,7 d后比较囊胚形成率. 结果核移植操作后卵细胞存活率达80.0%,骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞作为供体重组胚胎囊胚形成率分别为88/522 (16.9%)和73/464 (15.7%), (P>0.05, Yates corrected). 结论处于非休眠期的成年兔骨髓基质干细胞和脂肪基质干细胞移植到去核卵母细胞后能够进行早期胚胎发育,两者囊胚形成率无明显差别.
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胚胎兔和成年兔伤口愈合中肌成纤维细胞的表达
胚胎动物与成年动物的创伤愈合存在差别,表现在炎症反应轻、创面不收缩和无瘢痕形成[1,2].本实验在光镜和电镜下观察胚胎兔和成年兔伤口愈合过程中肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)的表达,以期探讨胎兔伤口不收缩的原因以及胎兔无瘢痕愈合的机制.
