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Dll4-Notch信号传递途径在血管发生中的作用
血管发生(angiogenesis)依赖多种促进血管发生因子和抑制血管发生因子之综合的交互作用所调控.血管内皮生长因子(VEGF)和Notch信号传递途径(Notch signaling pathway)参与此过程.之前研究已证明Notch信号传递途径在胚胎发育和肿瘤血管发生(tumour angiogenesis)中扮演重要的角色,而近研究则发现在血管发育过程中D114-Notch信号传递途径扮演着前所未知的新角色,并阐明因Notch信号传递减少而引起血管缺陷之机制,从而揭示破坏肿瘤血管发生的新药物靶点.本文着重于介绍Notch信号传递途径的组成;D114-Notch在血管发生中的作用;以及DH4-Notch对肿瘤治疗的意义.
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Notch基因在慢性淋巴细胞白血病细胞的表达和介导抗凋亡、耐药机制的研究
目的:检测原代慢性淋巴细胞白血病细胞Notch基因的表达情况;研究阿糖胞苷及地塞米松作用后肿瘤细胞Notch蛋白的变化,探讨Notch基因介导慢性淋巴细胞白血病抗凋亡及耐药机制.方法:采集慢性淋巴细胞白血病24例初治患者的骨髓血或外周血单个核细胞,以健康体检者14例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Notch及BCL-2、NF-κB基因的转录水平;应用Western blot检测L1210细胞株在化疗药物阿糖胞苷、地塞米松作用后Notch蛋白的变化.结果:CLL组的Notch1、Notch2、BCL-2、NF-κB基因的mRNA水平表达明显高于正常对照组,分别为0.8556±0.8726和0.6731±0.5334(P=0.0182)、1.2273±0.8207和0.6577±0.6424(P＜o.0001)、8.0960 ±7.5661和0.5969 ±0.4976(P＜0.0001)、1.0966±0.6925和0.5373±0.7180(P＜0.0001),而2组的Notch3和Notch4基因的mRNA水平未见明显差异,分别为1.1914±2.4219和0.8713±0.7937 (P=0.3427)、0.8174±1.0869和0.9752±1.3446(P=0.2402);L1210细胞在低浓度、中浓度阿糖胞苷作用24 h后,Notch1蛋白表达明显下降,在高浓度阿糖胞苷或延长中浓度阿糖胞苷组的作用时间,Notch1蛋白表达量增高.L1210细胞在地塞米松作用后,Notch1蛋白表达下降,但不随地塞米松的浓度及作用时间的变化而变化.结论:慢性淋巴细胞白血病细胞Notch基因转录水平明显高于正常人.Notch1蛋白在阿糖胞苷和地塞米松抑制肿瘤细胞增殖过程中表达下调.Notch信号通路可能介导慢性淋巴细胞白血病细胞抗凋亡及耐药过程.
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肾缺血对缺氧诱导microRNAs及VEGF-NOTCH信号分子的影响
目的 观察肾缺血性损伤后,缺氧诱导microRNAs及VEGF-NOTCH信号分子的表达变化,探讨肾缺血损伤后血管新生的可能调控途径.方法 选择雄性Balb/c小鼠20只,采用夹闭双侧肾蒂方法制备急性缺血肾损伤模型,假手术组设为对照组.通过观察缺血恢复后24 h小鼠肾功能及肾组织病理学改变确定模型成功.实时定量RT-PCR检测缺血恢复后4 h,24 h时缺氧诱导miRNA-210,miRNA-92a,VEGF,Flk-1及Notch1 mRNA表达水平;Western-blot检测缺血恢复后24 h,72 h时Flk-1蛋白的变化;免疫组织化学染色检测CD31表达,判断缺血组织微血管内皮细胞增生状况.结果 肾缺血恢复24 h小鼠肌酐、尿素氮明显升高(P＜0.05),光镜下观察大量小管上皮细胞肿胀、空泡变性坏死,肾小管管腔扩张,见上皮细胞碎片和管型,表明成功建立肾缺血损伤模型.肾缺血恢复4 h,24 h后,与正常组比较,肾组织miRNA-210上调倍数分别为(2.02±0.29),(5.58±0.16);miRNA-92a的表达上调倍数分别为(3.23±0.74),(1.53±0.33),P＜0.05;VEGF,Flk-1及Notch1 mRNA表达水平均升高(P＜0.05).缺血恢复后24 h,72 h时,Flk-1蛋白水平显著升高(P＜0.05),肾组织微血管密度明显增加.结论 肾缺血性损伤后可出现代偿性血管新生,且缺氧诱导miRNA如miRNA-92a,miRNA-210表达上调,与血管新生相关的信号分子VEGF及Notch1表达均升高,提示miRNA/VEGF-Notch1可能是肾缺血性损伤后血管新生的主要调控通路,从而为探讨缺血性损伤后血管新生的机制提供了依据.
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Notch基因在口腔癌和癌前病变患者癌组织及癌旁组织中的表达
目的 研究Notch基因在口腔癌及癌前病变患者癌组织、癌旁组织中的表达情况.方法 回顾性选取口腔鳞状细胞癌患者组织标本36例和癌前病变组织标本30例,均取得相对应的癌旁组织标本.检测Notch信号通路受体Notch1、Notch3基因mRNA表达水平,比较不同病变组织Notch1、Notch3基因mRNA表达水平及表达阳性率, 分析Notch1、Notch3基因表达阳性率与口腔癌病理特征的关系.结果 口腔癌癌组织Notch1、Notch3基因mRNA表达水平均显著高于癌前病变癌组织(P ＜0.05);口腔癌癌旁组织Notch1、Notch3基因mRNA表达水平均略高于癌前病变癌旁组织,但差异无统计学意义(P ＞0.05).口腔癌癌组织Notch1、Notch3基因表达阳性率75.00% 、72.22%均显著高于癌前病变癌组织50.00% 、46.67% (P ＜0.05);口腔癌癌旁组织Notch1、Notch3基因表达阳性率均略高于癌前病变癌旁组织,但差异无统计学意义(P ＞0.05).Notch1基因表达阳性率与口腔癌临床分期、淋巴结转移、病理分级有显著相关性(P ＜0.05);Notch3基因表达阳性率与口腔癌临床分期、病理分级有显著相关性(P ＜0.05),与淋巴结转移无显著相关(P ＞0.05).结论 口腔癌、癌前病变患者癌组织中Notch信号通路受体Notch1、Notch3基因mRNA表达水平较高,Notch基因尤其在口腔癌患者癌组织中表达活跃,且与口腔癌的发生发展具有相关性,但其在癌旁组织中的表达并不活跃.
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慢病毒介导Notch1基因shRNA沉默大鼠骨髓间充质干细胞Notch信号通路的表达
背景:对于骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化中Notch信号通路的机制研究较多,但是沉默Notch信号通路在工程化心肌样组织血管网络中的机制研究还比较少.目的:构建慢病毒载体介导Notch1基因shRNA表达体系,观察骨髓间充质干细胞中rNotch基因沉默效果.方法:构建pLV[shRNA]-EGFP:T2A:Puro-U6]{rNotch1[shRNA]_19 nt}(PLV-Notch)和pLV[shRNA]-EGFP:T2A:Puro-U6>Scramble_shRNA(PLV-Scramble)拼装慢病毒表达载体,并将该慢病毒载体包装质粒形成混合物共转染到HEK-293T细胞中.收集慢病毒悬液,通过定量PCR检测重组病毒滴度.将构建的PLV-Notch与PLV-Scramble分别感染骨髓间充质干细胞,经荧光显微镜观察和RT-qPCR、Western blot鉴定转染后两组骨髓间充质干细胞中增强型绿色荧光蛋白基因和目的基因rNotch1表达情况.结果与结论:慢病毒载体滴度大于1×108 TU?mL,稳定转染筛选得到成熟的细胞株.病毒转导效果良好,荧光率达80％,rNotch1基因在干扰组中的表达量是scrambled对照组的75.2％.由此可见,慢病毒介导转染rNotch1基因的骨髓间充质干细胞稳转株构建成功,并对Notch信号通路的表达有沉默作用.
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Notch基因在支气管哮喘模型小鼠肺中的表达
目的:对支气管哮喘模型小鼠肺组织及肺T细胞中4种Notch基因表达的特征进行研究,探讨Notch 信号在支气管哮喘发病中的作用.方法:制作哮喘小鼠模型,制备肺组织石蜡切片进行病理学检查;从肺组织中分离T细胞,利用RT-PCR半定量技术,测定小鼠肺组织及肺T细胞中4种Notch mRNA的表达量,并与对照组比较.结果:两组小鼠肺组织中4种Notch基因均有表达.哮喘模型组Notch1、Notch2表达较对照组增加(P＜0.05);哮喘模型组Notch3表达较对照组减少,但差异无统计学意义(P＞0.05);Notch4表达组间比较无差异.Notch1、Notch2在肺T细胞中的表达与肺组织中的一致(P＜0.05);Notch3、Notch4在T细胞中的表达组间比较无差异.结论:Notch1、2信号在支气管哮喘的发病机制中可能发挥一定作用.
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Notch信号通路在肝癌发生和发展中的研究进展
Notch基因发现于1919年,它的缺失可导致果蝇翅缘缺刻[1].随后研究发现,Notch在无脊椎动物和脊椎动物的多个物种中均有表达,它不仅在许多器官及细胞的正常发育中起作用,还与一些肿瘤的发生、发展相关.自Notch在人类T淋巴母细胞白血病中首先被鉴定以来[2],在多种肿瘤中发现有Notch信号通路的异常激活.现就Notch信号通路在肝癌中的研究进展做一综述.
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神经干细胞增殖分化基因调控的进展
文章从Notch基因、bHLH基因和同源盒基因等方面介绍了神经干细胞增殖分化基因调控的新研究进展.
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Notch1和JAG1在乳腺癌和癌旁组织的表达比较
目的 检测Notch1和JAG1在乳腺癌中的表达,及其与乳腺癌相关临床指标的关系,分析Notch基因在人类乳腺癌中的作用和意义.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例乳腺癌组织和25例癌旁正常乳腺组织中Notch1和JAG1的表达, 对乳腺癌组织与癌旁组织进行表达率和表达强度标准化系数的统计学比较, 并在不同的腋窝淋巴结转移情况间、不同TNM分期和病理学分级间进行Notch1表达强度标准化系数的统计学比较.结果 乳腺癌组织Notch1的表达率和标准化系数分别为93.3%和0.83, 均明显高于癌旁正常乳腺组织, 乳腺癌组织中JAG1的表达率为10%,癌旁组织中无JAG1表达,伴腋窝淋巴结转移的病例Notch1标准化系数高于无腋窝淋巴结转移的病例;乳腺癌Ⅰ期病例Notch1标准化系数(0.57)低于Ⅱ期(1.05),Ⅱ期高于Ⅲ期(0.59),Ⅰ期与Ⅲ期差异无统计学意义;乳腺癌I级病例Notch1标准化系数(0.55)低于Ⅱ级(0.83)和Ⅱ级低于Ⅲ级(1.05),Notch1可能在分化较好的人乳腺癌中的表达是低的,在分化较差的人乳腺癌中的表达是增高的.结论 人类乳腺癌中存在Notch1和JAG1的异常高表达,而在癌旁正常乳腺组织存在Notch1和JAG1的低表达和不表达,该研究为进一步探明Notch基因的表达对乳腺癌的发生、发展的影响奠定了良好的基础.
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Notch信号报告系统在前列腺肿瘤细胞系中的建立
目的 在前列腺肿瘤细胞系LNCaP中建立Notch信号报告系统.方法 采用In-Fusion酶系统将巨细胞病毒(CMV)启动子和Notch蛋白胞内结构域(ICD)细胞核内DNA结合蛋白CSL的8拷贝串联DNA序列克隆入pLVX-acGFP-N1慢病毒载体,构建Notch信号报告重组慢病毒表达质粒(pLVX-8XCSL-acGFP).在人胚肾293T细胞中转染pLVX-8XCSL-acGFP质粒或对照质粒pLVX-acGFP,6h后再转染Notch受体的细胞内结构域(NICD)的表达质粒pETP-NICD(过表达NICD)或对照质粒pETP.转染48 h后用荧光显微镜观察GFP的表达,用流式细胞仪进行荧光定量分析.然后将pLVX-8XCSL-acGFP质粒及对照质粒包装成慢病毒转导前列腺癌细胞系LNCaP,72 h后荧光显微镜观察绿色荧光,用流式细胞仪分选出GFP荧光强度强5％及弱5％的细胞.提取这两部分细胞的RNA,采用qRT-PCR方法检测细胞中Notch1、Notch2以及Notch信号通路下游靶基因Hey1的表达.结果 在转染pLVX-8XCSL-acGFP的293T细胞中,转染pETP-NICD的细胞荧光强度较转染pETP对照质粒的细胞增加了约10倍;而在转染pLVX-acGFP的293T细胞中,转染pETP-NICD的细胞与转染pETP对照质粒的细胞荧光强度无明显差异.根据pLVX-8XCSL-acGFP荧光强度分选出的LNCaP细胞,荧光强度高的细胞Notch1、Notch2、Hey1表达高于荧光强度弱的细胞(P均＜0.05).结论 在LNCaP细胞中pLVX-8XCSL-acGFP可以作为报告Notch信号水平的有效工具.
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龙胆泻肝汤对葡萄膜炎大鼠Notch信号通路的干预作用
目的 探讨龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis.EAU)大鼠Notch信号通路相关基因表达的影响.方法 Lewis大鼠用随机数字表法分为正常对照组、EAU模型组和龙胆泻肝汤干预组,后两组诱导EAU模型,龙胆泻肝汤干预组造模后用龙胆泻肝汤灌胃.免疫后12 d分别分离三组大鼠的脾脏和淋巴结收集CD4+T细胞,流式细胞仪检测Th17、Treg细胞的表达水平;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测Notch1、Notch2、Notch3、Notch4基因的表达情况;ELISA检测Notch信号通路相关蛋白的表达水平.结果 流式细胞仪检测发现,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠脾脏和淋巴结中Th17细胞水平明显升高,Treg细胞水平降低;与EAU模型组相比,龙胆泻肝汤干预组大鼠的Th17细胞水平明显下降,Treg细胞水平升高,两者比例逐渐恢复均衡;qRT-PCR检测发现龙胆泻肝汤干预组大鼠脾脏和淋巴结中Notch1、Notch2和Notch4基因的表达在免疫后12 d高于正常对照组(均为P＜0.01),但显著低于EAU模型组(均为P＜0.01),Notch3基因在大鼠脾脏和淋巴结未检测到表达;ELISA检测结果发现,龙胆泻肝汤干预组大鼠脾脏和淋巴结中Notch1、Notch2和Notch4蛋白表达水平在免疫后12 d虽然高于正常对照组(均为P＜0.01),但显著低于EAU模型组大鼠(均为P＜0.01).结论 龙胆泻肝汤可有效缓解EAU大鼠中Th17/Treg比例失衡状态,其作用机制可能涉及到Notch信号通路调节的na(i)ve CD4+T细胞向Th17和Treg细胞的分化.
关键词： 龙胆泻肝汤 葡萄膜炎 Notch基因 Th17/Treg细胞 -
Notch基因在变应性鼻炎小鼠模型中的表达及其意义
目的:探讨Notch信号通路相关基因在变应性鼻炎模型小鼠鼻黏膜及外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及意义.方法:7～8周龄BALB/c小鼠16只,随机分成对照组和模型组.以卵清蛋白作为过敏原,建立变应性鼻炎小鼠模型,分析比较小鼠过敏症状评分,采用苏木精-伊红染色分析比较鼻黏膜病理变化及炎性细胞的浸润程度,采用酶联免疫吸附法检测并分析小鼠外周血血清中IgE的表达水平.荧光定量聚合酶链反应和流式细胞术从不同水平检测模型组小鼠鼻黏膜及PBMC中Notch信号通路相关受体(Noteh1～Notch4)的表达量,并与对照组比较.结果:成功建立了变应性鼻炎BALB/c小鼠模型.模型组小鼠鼻黏膜中Notch1、Notch3、Notch4mRNA的表达明显高于对照组(P＜0.01),而Notch2mRNA的表达却低于对照组(P＜0.05);与此一致,模型组小鼠PBMC中Notch1、Notch3、Notch4的蛋白表达也明显高于对照组(P＜0.01),而Notch2的蛋白却低于对照组(P＜0.05).结论:Notch基因的表达在变应性鼻炎模型小鼠发病过程中有显著改变,可能参与变应性鼻炎的发生发展,为深入研究变应性鼻炎的发病机制提供了思路.
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Notch信号通路及其在肺癌发生中的作用
Notch信号通路存在于多种动物体内,是许多细胞信号转导通路的交汇点,不仅对正常组织、细胞的分化、发育起重要作用,而且和一些肿瘤的发生、发展相关.Notch信号在肺癌中的作用多样,在不同类型肺癌中呈现出不同的促癌或抑癌功能.了解Notch和肺癌的关系有利于进一步阐明肺癌发生机制,提出预防和治疗肺癌的新途径,为肿瘤基因治疗提供一个新的有希望的靶点.
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Notch 信号通路与细胞的增殖分化
Notch基因早于1917年由Thomas Hunt Morgan在果蝇中发现,因其功能部分缺失会在果蝇翅膀的边缘造成切迹而命名,1980年此基因首次被克隆出来.Notch信号通路是一条影响细胞命运的、保守而重要的信号转导通路,几乎涉及所有细胞的增殖和分化活动,在调节细胞分化,增殖和凋亡,及一系列生理、病理过程中都起重要作用.目前研究涉及其在神经元功能的发挥、血管生成及动脉内皮细胞的稳定性、内皮细胞和肌细胞在心脏瓣膜和血管形成中的作用、胰腺内分泌和外分泌细胞的形成、肠道分泌细胞和吸收细胞的分化、骨髓中造血干细胞的扩增等方面.本文就Notch信号转导通路的组成、转导途径、在细胞增殖和分化中的作用、和疾病的关系及在造血干细胞中的应用等方面作一综述.
