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Tim-3及其配体Galectin-9与病毒感染的关系
T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)基因是Tim家族成员,与其配体半乳凝素-9(Galectin-9)结合可显著抑制T细胞的活化和增殖,并调节细胞因子的表达和分泌.Tim-3/Galectin-9参与免疫反应的调节及抗病毒免疫反应,阻断此通路可促进CD8+T细胞应答和对病毒的控制.因此,Tim-3/Galectin-9通路可能与病毒感染慢性化有关.本文对Tim-3及其配体的生物学特性、功能及在病毒感染中的研究近况进行综述.
关键词： Tim-3 Galectin-9 病毒感染 -
Galectin-9(Tim-3L)显著减弱小鼠移植排斥
目的 探究Galectin-9(即T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3 ligand,Tim-3L)的真核定位与功能,及其对同种异基因排斥反应的影响.方法 PCR扩增Galectin-9片段,插入到pEGFP-N1质粒,转染中国仓鼠卵巢癌细胞系(CHO)行G418筛选,分选增强型绿色荧光蛋白(EGFP)阳性细胞.免疫组化检测Galectin-9的表达,Alamar Blue法检测稳定转染Galectin-9的CHO细胞及其新鲜培养上清对脾细胞增殖的影响,ELISA检测IL-2水平.给予BALB/c→C57BL/6心脏移植受鼠Galectin-9蛋白100μg×7 d.结果 Galectin-9表达于细胞浆,稳定转染Galectin-9-EGFP的CHO细胞上清抑制淋巴细胞增殖和IL-2的产生.上述效应可被Tim-3-Fc融合蛋白逆转.Galectin-9干预的心脏移植物中位生存时间明显延长[(22.7±1.2)d,(7.2±0.4)d)].结论 真核细胞中Galectin-9可通过分泌形式负调节同种异基因免疫;Galectin-9有望成为新型的抗排斥药物.
关键词： Tim-3 Galectin-9 免疫抑制 小鼠 -
Galectin-9对活化的CD4+T细胞免疫调节作用的机制研究
目的 研究Galectin-9对活化的CD4+T细胞的免疫调节作用,并进一步探讨其作用机制.方法 获取野生型C57BL/6小鼠淋巴细胞,利用MACS分选CD4+ na(i)ve T细胞,给予anti-CD3 (2.5 μg/ml)抗体、anti-CD28(5μg/ml)抗体和IL-2(100 ng/ml)刺激,培养3d.将活化的CD4+T细胞分为3组:正常对照组、Galectin-9组和Galectin-9+α-乳糖组.利用CFSE检测T细胞增殖情况,并动态观察细胞形态变化；检测CD4+ CD69+T细胞、Th1、Th2和Th17细胞的比例；并利用ELISA检测淋巴细胞分泌IFN-γ 、IL-4、IL-10、IL-12、IL-17A和TGF-β1等细胞因子的水平；利用Western blot检测T-bet、GATA-3和ROR-yt等T细胞分化调控蛋白的变化.结果 与正常对照组和Galectin-9+α-乳糖组相比,Galectin-9组于2h时开始出现细胞形态改变,同时CD4+ CD69+T细胞、Th1和Th17细胞表达减少(P＜0.05),但Th2细胞无明显变化；培养上清液中IFN-γ、IL-12、IL-17A和TGF-β1的表达水平降低(P＜0.05),而IL-4和IL-10等Th2型细胞因子水平无明显变化；同时T-bet和ROR-γt的表达水平减少(P＜0.05).结论 Galectin-9抑制活化CD4+T细胞的Th1和Th17型免疫应答,而对Th2型免疫应答无影响,免疫调节的机制可能与其在转录水平影响Th1和Th17特定转录因子的表达有关.
关键词： Galectin-9 Th1 Th2 Th17 -
HBV通过上调肝细胞表面Galectin-9的表达抑制NK细胞的功能
为了探讨HBV感染后Tim-3/Galeetin-9信号通路对NK细胞功能的影响,我们首先利用RT-PCR和FACS法比较四种不同肝癌细胞系HepG2、HepG2-N1、HBV阳性的HepG2.2.15和HepG2-HBV细胞表面Galectin-9的表达差异,继而观察NK细胞对不同Galectin-9表达水平的靶细胞的杀伤效率和产生IFN-γ能力的变化,并采用Annexin V/P1双染法观察Galectin-9对NK细胞凋亡的影响.结果显示,HBV阳性的HepG2-HBV和HepG2.2.15细胞表面Galectin-9的表达明显高于HepG2和HepG2-N1细胞,NK细胞对高表达Galectin-9的HepG2-HBV和HepG2.2.15细胞的杀伤能力明显低于低表达Galectin-9的HepG2细胞,产生IFN-γ的能力亦明显降低.Galectin-9重组蛋白抑制NK细胞的杀伤效率并促进其发生凋亡;阻断Tim-3/Galectin-9信号可在一定程度上恢复NK细胞的功能.结果表明,HBV感染可通过诱导肝细胞表面Galec-tin-9的表达抑制NK细胞杀伤和IFN-γ分泌能力,并促使其发生凋亡,这可能是HBV感染易造成机体细胞免疫耐受的重要原因之一.
关键词： HBV NK细胞 Galectin-9 共抑制受体 -
TIM-3配体galectin-9诱导NK/T细胞淋巴瘤细胞的凋亡及其机制
目的:观察TIM-3在NK/T细胞淋巴瘤(natural killer/T cell lymphoma,NK/TCL)细胞株中的表达及其配体galectin-9(GAL-9)诱导瘤细胞凋亡的作用及其部分机制.方法:Western blotting测定NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6、SNT-8和健康人外周血NK细胞中TIM-3的表达;采用不同质量浓度重组人GAL-9(rhGAL-9)作用于NK/TCL细胞株24 h后,通过CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术Annexin-V/PI双染法检测瘤细胞凋亡;Western blotting检测caspase-3、PARP及其剪接体和MAPK信号通路蛋白磷酸化表达水平变化.结果:NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6和SNT-8的TIM-3表达较健康人外周血NK细胞显著增高,其中SNK-1、SNK-6细胞株与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);CCK-8检测结果显示,rhGAL-9对NK/TCL细胞增殖活力具有明显抑制作用,并有浓度依赖性;流式细胞术检测显示,rhGAL-9可诱导3种NK/TCL细胞株凋亡;Western blotting结果显示,cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达量增高,MAPK通路中JNK蛋白磷酸化水平升高.结论:TIM-3在NK/TCL细胞株中异常高表达,其配体GAL-9可诱导细胞凋亡,其机制可能与JNK磷酸化水平升高相关.
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Galectin-9基因不同亚型表达载体的构建
目的 构建galectin-9基因不同亚型的真核表达载体.方法 应用RT-PCR方法从人正常大肠上皮组织中扩增出galectin-9三种剪接体的全长片段,分别将片段连接到质粒载体pIRES2-EGFP上,经测序证实插入片段正确后,载体转染结肠癌LoVo细胞,再应用RT-PCR和Western blot方法证实转染效果.结果 测序结果证实载体上插入的galectin-9三种剪接体碱基序列正确,同时载体成功转染LoVo细胞,并成功表达三种剪接体蛋白.结论 成功构建了galectin-9基因不同亚型的真核表达载体,为研究galectin-9的多种功能创造了条件.
关键词： Galectin-9 载体构建 转染 -
Galectin-9/T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3信号通路在抗感染免疫中的作用
T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)在CD4、CD8、NK细胞中主要发挥免疫抑制作用.研究显示,在HIV感染者、乙型和丙型肝炎患者、活动性结核病患者外周血及病变局部T细胞或NK细胞中,Tim-3表达均显著增高,而且与疾病的发生和发展密切相关.阻断Tim-3信号通路可以显著提高T细胞、NK细胞功能,并有望用于这些疾病的免疫治疗.Galectin-9/Tim-3信号通路通过促进IFNγ分泌细胞和抗原特异性CTL凋亡、诱导CD4+ CD25+ Foxp3+ CD127low调节性T细胞的增殖、诱导CD11b+ Ly-6G+髓性抑制细胞产生等发挥免疫抑制的作用.此文对国内外有关Tim-3的新研究进展进行综述.
关键词： 免疫 Tim-3 Galectin-9 免疫抑制 -
卵巢上皮性Galectin-9表达及与CA125的功能之间的关系研究
目的：探讨卵巢上皮性Galectin-9表达及与CA125的功能之间的关系。方法纳入我院卵巢癌手术切除患者的病例样本共计48例，对这48例卵巢癌病例采用逆转录实时定量聚合酶链反应RT-PCR的方法对卵巢上皮性Galectin-9表达的相对表达量进行检测，同时检测CA125在卵巢癌组织中的表达情况，总结Galectin-9和CA125表达的关系。结果卵巢上皮性Galectin-9表达的相对表达量与患者CA125表达水平存在相关性（P＜0.05）；Galectin-9及CA125在卵巢癌中不同分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期方面差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论卵巢上皮性Galectin-9和CA125表达量在卵巢癌中具有相关性，Galectin-9和CA125相对表达量水平与卵巢癌的淋巴结转移及肿瘤分期具有着相关性。
关键词： Galectin-9 CA125 相对表达量 卵巢癌 淋巴受累 -
Galectin-1、Galectin-3、Galectin-9在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其临床意义
目的：探讨宫颈鳞状细胞癌组织中 Galectin-1、Galectin-3、Galectin-9蛋白的表达及其临床意义。方法选取宫颈鳞状细胞癌标本蜡块78例，采用免疫组织化学方法对宫颈鳞状细胞癌标本蜡块78例组织中的Galectin-1、Galectin-3和 Galectin-9蛋白表达进行检测，分析其表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征的关系。结果 Galectin-1、Galectin-3在宫颈鳞状细胞癌组织中阳性表达率分别为89.7%、84.6%，均明显高于其正常宫颈组织中阳性表达率（12.8%、15.4%），差异均有统计学意义（P﹤0.05）；Galectin-9在宫颈鳞状细胞癌组织阳性表达率为17.9%，与正常宫颈组织Galectin-9阳性表达率（14.1%）比较差异未见统计学意义（P﹥0.05）。可以认为Ga-lectin-1、Galectin-3在宫颈鳞状细胞癌表达与组织学分级、临床FIGO分期、肌层浸润程度、淋巴结转移、宫外扩散有关，差异有统计学意义（P﹤0.05）；尚不能认为Galectin-9在宫颈鳞状细胞癌表达与组织学分级、临床FIGO分期、肌层浸润程度、淋巴结转移、宫外扩散相关，差异未见统计学意义（ P﹥0.05）。结论 Galectin-1、Galectin-3的高表达和Galectin-9的低表达在宫颈鳞状细胞癌的发生、发展中具有重要作用，对判断宫颈鳞状细胞癌患者的生物学行为具有一定的意义。
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膜型Tim-3分子促进荷瘤小鼠抗肿瘤免疫应答的研究
目的 研究膜型Tim-3分子对H22肝癌细胞生长的抑制效应,探讨膜型Tim-3分子对荷瘤小鼠免疫系统的影响.方法 以H22肝癌细胞接种于BALB/c小鼠大腿肌肉建立小鼠实体瘤模型,采用原位注射裸DNA的方法在小鼠体内表达膜型Tim-3进行基因治疗,观察Tim-3对肿瘤生长的抑制作用;采用RTPCR技术在肿瘤生长不同时期检测Tim-3对4-1BB、IFN-γ、galectin-9等免疫相关基因表达的影响;流式细胞术检测膜型Tim-3对脾细胞增殖活性及细胞毒活性的影响;观察Tim-3 +4-1 BBL协同抗肿瘤作用.结果 体内转染表达Tim-3对肿瘤的生长有明显的抑制作用.流式细胞术结果显示,在小鼠荷瘤早期,Tim-3可提高脾细胞在特异性抗原刺激下的增殖反应和对H22肿瘤细胞的细胞毒作用;Tim-3与4-1BBL协同作用时抗肿瘤作用更加明显.结论 膜型Tim-3可在免疫启动阶段作为正向免疫调节因子增强抗肿瘤免疫应答,并可与4-1 BBL协同产生更强的抑瘤效应.
关键词： Tim-3分子 4-1 BB Galectin-9 抗肿瘤免疫 -
T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3/凝集素9通路在脓毒血症免疫调控中的研究进展
脓毒血症是重症监护室(ICU)患者死亡的重要原因之一,主要是由潜在或明确的感染因素所导致的全身炎症反应综合征.其主要特征是大量的微生物进入血液循环,触发机体过度的炎症反应而导致的一些列炎症和免疫损伤.大量的研究证实,机体免疫抑制在脓毒血症所致的多器官功能衰竭过程中起着重要作用.Tim-3/Galectin-9共抑制通路是重要的免疫负调控信号通路,其在脓毒血症所致的免疫抑制中的调控作用的相关研究逐渐受到关注.本文简要阐述并总结了Tim-3/Galectin-9通路在脓毒血症所致的免疫抑制中所发挥的调控作用.
关键词： 脓毒血症 免疫抑制 Tim-3 Galectin-9 共抑制分子 -
Tim-3在系统性红斑狼疮中的研究进展
T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-3(Tim-3)是调节Th1细胞免疫应答的关键细胞因子,表达于多种免疫细胞表面.Tim-3的表达可抑制Th1细胞活性和IFN-γ的产生,为重要负性免疫调节因子.Tim-3配体Galectin-9亦涉及多种免疫细胞的功能作用,Galectin-9阻断抗体显著抑制了外周血单核细胞(PBMC)的增殖和IL-2,IL-4,IL-6,IL-10,IL-17A,IFN-α等细胞因子的分泌.系统性红斑狼疮(SLE)涉及多脏器功能损害,是自身免疫性疾病的原型.研究显示Tim-3在SLE的发病机制中起重要作用,Tim-3表达水平也与SLE疾病活跃程度密切相关,Tim-3/Galectin-9途径可能成为SLE的新型治疗策略.本文通过对近期Tim-3在系统性红斑狼疮中的研究进展进行综述,认为Tim-3表达水平在自身免疫性疾病发展过程中的改变及用于人类SLE疾病的靶向治疗仍需要继续深入研究.
关键词： Tim-3 Galectin-9 系统性红斑狼疮 基因多态性 -
食管鳞状细胞癌组织Galectin-9表达与预后的关系
目的 探讨肿瘤组织半乳糖凝集素-9(Galectin-9)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与预后关系.方法 纳入两院收治的78例食管鳞状细胞癌患者进行研究,于出院当日测定Galectin-9在患者血清、肿瘤组织中的表达水平,随访2年,分析预后良好(无事件生存)、预后不良(转移、复发、死亡)情况,并比较预后良好、预后不良患者的Galectin-9表达水平.结果 通过2年随访发现,在78例患者中,有35例预后良好,占44.87％,43例预后不良,占55.13％;经COX回归性分析发现,患者病理分期、浸润深度、血清和肿瘤组织Galectin-9表达与预后不良直接相关(P＜ 0.05).结论 Galectin-9表达与食管鳞状细胞癌患者预后密切相关,预后良好者Galectin-9表达水平相对较高.
关键词： Galectin-9 肿瘤组织 食管鳞状细胞癌 预后 -
半乳糖凝集素3和半乳糖凝集素9水平与冠心病患者冠状动脉易损斑块的相关性研究
目的 检测冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血清半乳糖凝集素(Galectin)-3、Galectin-9的水平,并分析其与冠状动脉易损斑块的关系.方法 选取2015年6月至2016年6月新疆医科大学第一附属医院心血管内科收治并确诊为冠心病的患者123例,另选取于该院体检的健康人群60例作为对照组,对研究对象进行冠状动脉造影(CAG)和血管内超声(IVUS)检查.根据IVUS检测结果,将冠心病患者分为稳定斑块组30例和易损斑块组93例,比较3组血生化指标、Galectin-3、Galectin-9水平及IVUS结果,分析Galectin-3、Galectin-9与冠状动脉易损斑块的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析Galectin-3与Galectin-9对冠状动脉易损斑块的临床诊断价值.结果 易损斑块组和稳定斑块组患者血清Galectin-3、Galectin-9明显高于对照组,易损斑决组Galectin-3、Galectin-9明显高于稳定斑块组,差异有统计学意义(P＜0.05);易损斑块组血管重塑指数,斑块负荷、坏死核心、钙化组织比例均高于稳定斑块组,纤维脂质和纤维组织比例均低于稳定斑块组,差异有统计学意义(P＜0.05).血清Galectin-3与Galectin-9与斑块中血管重塑指数、斑块负荷、坏死核心及钙化组织呈正相关,与纤维脂质和纤维组织比例呈负相关(P＜0.05).ROC分析结果显示Galectin-3与Galectin-9的AUC面积分别为0.701、0.715,灵敏度分别为52.5％、88.5％,特异度分别为82.0％、45.9％.结论 血清Galectin-3、Galectin-9水平的异常升高与冠心病冠状动脉斑决稳定性密切相关,其可作为临床评估冠状动脉斑块稳定性的重要血清学指标.
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布鲁氏菌病患者血清中可溶性Tim-3/Galectin-9与相关细胞因子的变化
目的 研究布鲁氏菌病患者血清中可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(sTim-3)与其配体半乳糖凝集素-9(Galectin-9)以及相关细胞因子IFN-γ和IL-4的变化.方法 采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测布鲁氏菌病患者血清中sTim-3和Galectin-9的表达,流式液相多重蛋白定量技术(CBA)检测IFN-γ和IL-4的变化,Pearson法分析布鲁氏菌病患者血清中sTim-3、IFN-γ及IL-4的相关性.结果 与正常对照组相比,布鲁氏菌病患者组血清中的sTim-3和Galectin-9及IL-4的表达均增加(P＜0.05),IFN-γ表达减少(P＜0.01),并且布鲁氏菌病患者血清中sTim-3的表达与IL-4呈正相关(r=0.87,P＜0.01),与IFN-γ呈负相关(r=-0.76,P＜0.01).结论 sTim-3和Galectin-9在布鲁氏菌病患者体内高表达,参与了布鲁氏菌病的发生发展.
关键词： sTim-3 Galectin-9 布鲁氏菌病 细胞因子 -
大鼠galectin-9基因重组腺病毒载体的构建和鉴定
目的 克隆大鼠galectin-9基因全长cDNA,构建含大鼠galectin-9基因的重组腺病毒载体,并予以鉴定.方法 从大鼠的肝脏组织中用RT-PCR的方法克隆扩增大鼠galectin-9基因,再定向插人到带Not Ⅰ和HindⅢ酶切的pDC316-GFP穿梭质粒中.获得穿梭质粒pDC316-GFP-galectin-9.经PCR、Not Ⅰ和HindⅢ酶切及测序鉴定后,用脂质体将穿梭质粒pDC316-GFP-galectin-9与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1.3Cre共转染HEK-293细胞.经位点特异性重组获得含目的基因的重组腺病毒Ad5-galectin-9,行PCR鉴定,经HEK-293细胞扩增及纯化制备高滴度病毒液,用细胞培养方法测定病毒TCID<,50>滴度.结果 PCR、酶切及测序证实穿梭质粒构建正确,PCR鉴定证实大鼠galectin-9基因重组腺病毒载体构建正确,病毒的感染滴度为1.4×10<'9>U/ml.结论 成功构建了含大鼠galectin-9基因的重组腺病毒表达载体,为进一步研究大鼠galectin-9基因的功能奠定了基础.
关键词： 大鼠 Galectin-9 基因克隆 腺病毒载体 RT-PCR -
下调口腔鳞状细胞癌Tac8113细胞的Galectin-9表达对CIK杀伤作用的影响
目的:下调口腔鳞状细胞癌细胞系Tac8113中的半乳糖凝集素(Galectin-9,Gal-9)基因表达并与细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIK cells)共培养后,观察CIK细胞体外杀伤效果.方法:分离外周血单个核细胞,加入细胞因子,体外培养CIK细胞14 d,流式细胞术对CIK细胞进行表型检测.将已构建的Galectin-9 siRNA重组质粒 pGPU6/Gal-9,脂质体法转染Tac8113细胞.Western blotting法检测Tac8113细胞中Galectin-9蛋白的表达.CIK细胞与各组Tac8113细胞共培养,CCK8法检测杀伤情况, ELISA法检测上清干扰素-γ(interferon-γ,INF-γ)的分泌情况.结果:体外培养CIK细胞,流式细胞术检 测细胞表面CD3 +CD56 +细胞比例为(29.7 ± 12.8)%,Tim-3阳性率为(78.3 ± 5.5)%.pGPU6/Gal-9转染Tac8113细胞,Western blotting结果显示Tac811细胞 Galectin-9蛋白表达水平明显降低.CCK8结果显示CIK细胞对低表达Galectin-9的Tac8113细胞的体外杀伤能力增强,分泌INF-γ增加.结论:下调口腔鳞状细胞癌Tac8113细胞中Galectin-9的表达,能够增强CIK细胞对其的体外杀伤作用.
关键词： 口腔鳞状细胞癌 Galectin-9 CIK -
Galectin-1及Galectin-9在子宫内膜癌组织中的表达
目的:分别检测Galectin-1及Galectin-9在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生及子宫内膜腺癌组织中的表达,研究两者与子宫内膜癌发生、发展的关系.方法:收集正常子宫内膜组织30例,子宫内膜不典型增生组织20例,子宫内膜腺癌组织51例,所有标本均在同一条件下,采用免疫组化法对Galectin-1及Galectin-9表达进行检测.结果:Galectin-1在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生及子宫内膜腺癌中的阳性表达率分别为30.0%、70.0%、90.2%;Galectin-9在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生及子宫内膜腺癌中的阳性表达率分别为20.0%、75.0%、78.4%.Galectin-1及Galectin-9在子宫内膜腺癌组及子宫内膜不典型增生组中的阳性表达率明显高于正常子宫内膜组,差异有统计学意义(P<0.05),但在子宫内膜腺癌组及子宫内膜不典型增生组间差异无统计学意义(P>0.05).Galectin-1在子宫内膜腺癌不同组织分级、病理分期、肌层浸润程度及是否伴淋巴结转移间表达强度无显著性差异(P>0.05).Galectin-9表达强度在子宫内膜腺癌不同组织分级、病理分期、是否伴淋巴结转移与肌层浸润程度间均有统计学差异(P<0.05).结论:Galectin-1及Galectin-9均与子宫内膜癌的发生过程相关,相对于Galectin-1,子宫内膜组织中Galectin-9的表达变化与子宫内膜病变的发生更密切,可作为对子宫内膜癌进行早期诊断和治疗效果监测的指标之一,对提高子宫内膜癌的诊治水平具有重要意义.
关键词： 子宫内膜癌 Galectin-1 Galectin-9 免疫组织化学
