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5-氮-2′-脱氧胞苷逆转膀胱癌细胞hepaCAM基因的表达及对其生长的抑制
目的 研究5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)逆转hepaCAM表达及抑制膀胱癌细胞的生长.方法 MTT法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；RT-PCR检测hepaCAM mRNA的表达.结果 在T24细胞中,3.0和10.0 μmol/L5-aza-CdR药物浓度的抑制率明显高于0.3和1.0 μmol/L 5-aza-CdR(P＜0.05),在BIU-87细胞中,5.0 μmol/L5-aza-CdR药物浓度的抑制率明显高于0.1和0.5μmol/L(P＜0.05),并且药物处理细胞72 h的抑制率明显高于24和48 h(P＜0.05)；5-aza-CdR处理细胞后,T24和BIU-87细胞凋亡数明显增加(P＜0.05)；并可逆转hepaCAMmRNA表达.结论 5-aza-CdR可使hepaCAM基因重新表达,并通过诱导凋亡而抑制膀胱癌细胞的生长.
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5-Aza-CdR抑制HepG2细胞DLK1基因表达及细胞生长
目的 探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对DLK1基因及肝癌细胞系HepG2增殖、侵袭的影响.方法 不同浓度的5-Aza-CdR及PBS作用HepG2细胞后,RT-PCR、Western blot检测DLK1基因及蛋白的表达水平；MTT、Transwell和流式细胞术检测HepG2细胞的生长、侵袭力及细胞周期的变化.结果 HepG2细胞经5-Aza-CdR处理后,DLK1 mRNA、蛋白表达量降低；MTT试验显示细胞生长速度依5-Aza-CdR浓度出现不同程度减慢；流式结果表明G1期细胞减少,S期细胞增加,出现S期阻滞；Transwell证实侵袭能力显著降低(P＜0.05).结论 去甲基化药物5-Aza-CdR能有效地抑制DLK1基因的表达,从而抑制肿瘤细胞HepG2生长、增殖、侵袭能力.
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5-Aza-CdR对胃癌细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响
目的:观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycitydine,5-Aza-CdR)对体外培养的胃癌SGC7901细胞和BGC823细胞增生、细胞周期和凋亡的影响及其对此两株细胞中Apaf-1基因的甲基化状态的影响.方法:不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养的SGC7901细胞和BGC823细胞后,用MTT法检测处理24,48和72 h的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理后72 h细胞周期分布和细胞凋亡率;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;RT-PCR法及Western blot法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA及蛋白表达的变化.结果:1×10-7,5×10-7,1×10-6和5×10-6 mol/L5-Aza-CdR处理SGC7901和BGC823细胞24,48,72 h后,细胞增生受到抑制,有时间和剂量的依赖性.流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72 h后凋亡率增加明显:SGC7901细胞5×10-7,1×10-6和5×10-6 mol/L组分别为2.53%±1.19%,5.93%±0.86%,10.14%±1.51%,与对照组(0.12%±0.03%)相比差异显著(P＜0.05);BGC823细胞5×10-7,1×10-6和5×10-6 mol/L组分别为1.57%±0.26%,4.64%±1.05%,8.21%±1.46%,与对照组(0.57%±0.03%)相比差异显著(P＜0.05).在5-Aza-CdR处理前未检测到SGC7901细胞系及BGC823细胞系的Apaf-1基因的mRNA及蛋白表达,经过5-Aza-CdR处理后,Apaf-1基因在SGC7901细胞系及BGC823细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA及蛋白重新表达.结论:5-Aza-CdR对SGC7901细胞和BGC823细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关.
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5-Aza-CdR体外诱导胃癌细胞系p16基因去甲基化及表达增强
目的: 观察去甲基化制剂--5-Aza-CdR对体外培养的胃癌细胞SGC7901 p16基因启动子区甲基化状态及表达的影响, 探讨胃癌细胞p16基因失活的机制及去甲基化制剂对p16基因表达的调控.方法:应用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-7, 5×10-7, 1×10-6, 5×10-6 mol/L)处理体外培养的胃癌细胞SGC7901后, MSP法检测用药前后细胞中p16基因的甲基化状态, RT-PCR及 Western-blot法检测用药前后细胞中p16基因mRNA及蛋白表达的变化.结果: p16基因在胃癌细胞系SGC7901中启动子区呈异常甲基化状态, 在mRNA及蛋白水平低表达. 经过1×10-7, 5×10-7, 1×10-6, 5×10-6 mol/L 5-Aza-CdR处理后, p16基因启动子区呈去甲基化状态, 各组mRNA及蛋白表达相应的比值分别与处理前的比例为2.21±0.36, 2.01±0.31;2.82±0.39, 2.22±0.33;2.98±0.42, 3.15±0.43及3.35±0.55, 3.75±0.61.结论:5-Aza-CdR能逆转胃癌细胞p16基因甲基化状态, 调控p16基因表达.
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TIMP3、E-Cadherin基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中的甲基化及蛋白表达
目的:观察食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3、E-Cadherin基因甲基化的水平及蛋白表达,以及去甲基化药物5-Aza-CAR对其的影响.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫细胞化学的方法,分别检测体外培养的食管癌细胞系EC1和EC9706中TIMP3和E-Cadherin基因甲基化水平及蛋白表达.用5μmol/L 5-Aza-CdR处理两种细胞系后,用同样的方法检测其甲基化水平及蛋白表达,观察药物的影响.结果:TIMP3基因在食管癌细胞系EC1和EC9706中均表现为非甲基化,蛋白呈现弱表达;而E-Cadherin基因在EC1中发生甲基化,EC9706中发生半甲基化,蛋白表达均缺失.5-Aza-CdR作用后的两种细胞系中,TIMP3基因仍为非甲基化,而蛋白表达似有所曾强;但E-cadherin基因甲基化得到了逆转,蛋白表达由原来的不表达,转变为强表达.结论:5-Aza-CdR能够有效逆转E-cadherin基因甲基化,并使其蛋白恢复表达;TIMP3基因的失活似与甲基化机制无关,5-Aza-CdR对其蛋白表达的恢复作用微弱.
关键词： 食管瘤 甲基化 5-aza-CdR TIMP3 E-cadherin -
5-aza-CdR增强吉非替尼对人非小细胞肺癌细胞株H1650敏感性机制的研究
目的:探讨EGFR基因启动子甲基化水平与人非小细胞肺癌细胞株H1650对吉非替尼敏感性之间的关系.方法:5-aza-CdR和吉非替尼单独或联合用药作用于H1650细胞株后,应用甲基化特异性PCR法检测EGFR基因启动子区甲基化状态；CCK-8法检测细胞增殖率；流式细胞仪技术检测细胞凋亡率变化；蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测EGFR蛋白和mRNA的表达情况.结果:5-aza-CdR可去除H1650细胞EGFR基因启动子区甲基化;CCK-8法检测结果显示,H1650对吉非替尼的敏感性较差,5-aza-CdR去甲基化后联合运用吉非替尼处理72 h.联合用药组IC50为(2.93±0.95) μmol/L,与吉非替尼组(14.53士1.13)μmol/L,5-aza-CdR组(4.91士1.42)μmol/L比较显著降低,P＜0.05；流式细胞仪技术结果显示,联合用药组细胞凋亡率为(83.62±4.3)％,与吉非替尼组(20.29士2.9)％、5-aza-CdR 组(25.73±7.5)％比较,差异有统计学意义,P＜0.05;蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法结果显示,吉非替尼与5-aza-CdR联合用药干预72 h后细胞EGFR蛋白和mRNA表达显著下降,与单药组相比,具有统计学意义,P＜0.05.结论:EGFR基因启动子区甲基化可能是非小细胞肺癌细胞株H1650对吉非替尼获得性耐药的机制之一.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及Runt相关转录因子3基因表达的影响
目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷酸(5-aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-CdR)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及对人类Runt相关转录因子3(Runt-related transcription factor 3,RUNX3)基因表达的影响.方法 以0.4、1.6、6.4、25.6、102.4 μmol/L的5-Aza-CdR分别处理MCF-7细胞,以同体积培养液处理MCF-7细胞作为对照组.MTT法测定不同浓度、不同时间对MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot法分别检测RUNX3基因mRNA和蛋白的表达,计量资料采用方差分析SNK检验.结果 5-Aza-CdR可抑制MCF-7细胞的生长,其抑制率与药物浓度、作用时间呈依赖关系;5-Aza-CdR作用48 h后,流式细胞仪检测0.4～ 102.4 μmol/L,5-Aza-CdR实验组细胞凋亡率分别为15.33％、25.35％、27.95％、32.39％、39.27％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05,0.4μmol/L组除外);RT-PCR和Western-blot检测可见RUNX3mRNA及RUNX3蛋白表达均增加.结论 5-Aza-CdR诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,可能与5-Aza-CdR去甲基化,促进RUNX3基因及蛋白表达有关.
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BAX对Hep2细胞系的凋亡及化疗敏感性的影响
目的:研究BAX基因对人喉鳞状细胞癌Hep2细胞系凋亡和对化疗药5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)敏感性的影响.方法:通过溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测5-Aza-CdR对喉癌Hep2细胞体外增殖的影响.采用脂质体转染方法将BAX基因转入Hep2细胞后,应用RT-PCR法检测BAX基因在Hep2细胞中的表达.用流式细胞术检测Hep2细胞凋亡以及细胞周期变化情况.结果:通过用不同浓度的5-Aza-CdR处理喉Hep2细胞发现,5-Aza-CdR能抑制Hep2细胞体外生长,且呈时间与剂量依赖性,发现体外增殖的半数抑制浓度(IC50)为4μmol/L.通过流式细胞术检测发现5-Aza-CdR和BAX均可以使Hep2细胞发生G1/S期细胞阻滞,并且能促进细胞凋亡.5-Aza-CdR处理后,与对照组相比,Hep2细胞G0/G1期的细胞数量明显增加,由对照组的51.57%增高到71.17%,凋亡率也由对照组的1.67%增加到13.96%.转染BAX后,RT-PCR结果显示转染BAX基因的喉鳞状细胞癌Hep2细胞中BAX表达显著增加(P<0.05),S期Hep2细胞百分比由空白对照组的33.29%、转染空载体组的32.42%分别减少至16.07%和13.58%,细胞凋亡率相对于空白对照组的1.67%、转染空载体组2.04%,转染BAX基因组的7.13%增加到23.74%,具有显著性差异(P<0.05).本研究结果还表明同时转染BAX基因及加药组的喉鳞状细胞癌Hep2细胞凋亡率明显增加.结论:转染BAX基因能诱导Hep2细胞的凋亡,并能增加Hep2细胞对药物5-Aza-CdR杀伤作用的敏感性.
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5-Aza-CdR对DU145前列腺癌细胞系RNF180基因去甲基化作用的初步研究
目的 通过观察去甲基化药物5-Aza-CdR对DU145前列腺癌细胞系RNF180基因的影响,探讨前列腺癌细胞系中肿瘤抑制基因RNF180失活的机制和原因.方法 运用MTT法检测不同浓度(0、1、2、5、10、15、20μmoI/L)5-Aza-CdR对前列腺癌细胞增殖能力的影响,同时筛选出1个适药物浓度(5μmoI/L);分别采用Western blotting、实时PCR、甲基化特异性PCR(MSP)法检测适药物浓度处理前后前列腺癌细胞中RNF180的表达情况.结果 在一定范围内,5-Aza-CdR对前列腺癌细胞DU145增殖能力的影响随着药物浓度的增加和药物处理时间的增长而加强(P<0.05);适药物浓度处理后的前列腺癌细胞中RNF180蛋白及mRNA的表达量比处理前明显升高(P<0.05),而启动子区的甲基化程度明显降低.结论 5-Aza-CdR能够逆转RNF180基因在DU145前列腺癌细胞中的高甲基化状态,解除RNF180基因表达沉默的状态.
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5-氮杂脱氧胞苷对肿瘤细胞p16基因甲基化及表达的影响
[目的]探讨甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肿瘤细胞p16基因的甲基化状态及其表达的影响.[方法]利用5-Aza-CdR(106 mol/L)处理肿瘤细胞株(SPC-Al、BIU-87、T-24、Hep-G2)9 d,甲基化特异性PCR法(MSP)检测了用5-Aza-CdR处理前后4株肿瘤细胞p16基因的甲基化状态,同时利用RT-PCR检测了5-Aza-CdR处理前后p16基因的表达水平差异.[结果]除BIU-87外,其他3种肿瘤细胞p16基因都有不同程度的甲基化,用5-Aza-CdR处理后比处理前p16 mRNA的表达有显著升高(P＜0.01).[结论]p16基因的过甲基化是导致其表达失活的一个重要机制,而5-Aza-CdR可显著抑制肿瘤细胞p16基因的过甲基化.
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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞DNA甲基转移酶表达和细胞周期的影响
目的:探究5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞增殖及其对DNA甲基化转移酶(DNMT)表达的影响.方法:5-Aza-CdR处理HT22细胞,采用Real-time PCR和免疫印迹检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA及蛋白的表达;甲基转移酶活性试剂盒检测DNMTs活性;流式细胞仪对其细胞周期及凋亡进行检测.结果:5-Aza-CdR处理HT22细胞24 h后,不同浓度5-Aza-CdR均显著抑制HT22细胞增殖,且使胞质空泡化.5-Aza-CdR降低了HT22细胞早期凋亡,但促进晚期凋亡,并诱导细胞周期发生S期阻滞.DNMT1和DNMT3A的mRNA和蛋白表达下降,但DNMT3B表达未发生明显变化.DNMT1和DNMT3B活性降低.结论:5-Aza-CdR可降低DNMT1和DNMT3A mRNA和蛋白表达以及DNMT1和DNMT3B活性,影响HT22细胞周期及凋亡.
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缺氧对人小细胞肺癌H446细胞DNA错配修复基因MLH1、MSH2表达的影响及其机制探讨
背景与目的:缺氧对DNA错配修复系统(mismatch repair, MMR)活性的调控是肿瘤细胞遗传不稳定的重要原因,但其机制尚不完全清楚.本研究拟观察缺氧状态下人小细胞肺癌H446细胞DNA错配修复基因MLH1、MSH2的表达变化,初步探讨DNA甲基化在其中的作用.方法:应用RT-PCR、Western blot等方法检测H446细胞在缺氧状态下以及甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理后MLH1、MSH2基因的表达水平,同时,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测MLH1、MSH2基因启动子CpG岛甲基化状态.结果:缺氧状态下,H446细胞MLH1、MSH2基因在转录和翻译水平均显著性降低.同时,随着缺氧时间延长,MLH1基因启动子逐渐由非甲基化状态、部分甲基化状态转变为完全甲基化状态,而MSH2基因启动子则直接由非甲基化状态转变为完全甲基化状态.甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR可使MLH1、MSH2基因表达水平有所恢复,但去除5-Aza-CdR后其表达再次下调.结论:启动子甲基化可能是缺氧诱导H446细胞显著性下调MLH1、MSH2基因表达的重要机制,甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR可恢复其表达.
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骨髓增生异常综合征去甲基化药物治疗的研究进展
骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)的发病机制涉及多阶段、多因素,基因改变与表观遗传修饰可能共同参与了这一过程.DNA甲基化是表观遗传学中一种为重要的修饰,MDS患者常表现为总体DNA高甲基化.使用DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制剂降低总体甲基化水平,在MDS患者中取得了富有成效的临床反应及血液学改善.DNMT抑制剂可分为两类:5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-Aza-CdR)、地西他滨(5-Aza-2-deoxycytidine,decitabine)等核苷和核苷衍生物类抑制剂,它们可提高MDS患者的临床完全反应率、部分反应率及血液学改善,但缓解率、疗效尚不够令人满意；肼苯哒嗪等非核苷类抑制剂.非核苷类抑制剂与丙戊酸镁联合应用治疗MDS获得成功,为MDS去甲基化治疗药物的研究开启了一种新思路.
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启动子甲基化状况对唾液腺恶性多形性腺瘤体外细胞系细胞E-cadherin表达的影响
目的:通过体外改变人唾液腺恶性多形性腺瘤(malignant pleomorphic adenoma,MPA)细胞系细胞E-cadherin基因启动子甲基化情况,探讨启动子甲基化对E-cadherin表达的影响.方法:采用合适浓度的5-Aza-CdR和TGF-β1处理MPA细胞系SM-AP4和SM-AP1细胞,分别使用蛋白免疫印迹法、亚硫酸盐测序法、实时荧光定量PCR检测用药前、后E-cadherin蛋白表达、E-cadherin基因启动子甲基化状况、mRNA表达;同时采用划痕实验、Transwell小室检测用药前、后细胞迁移能力的变化.应用SPSS 13.0软件包对数据进行独立样本t检验.结果:经5-Aza-CdR处理后,SM-AP4细胞E-cadherin启动子区甲基化率显著降低(P＜0.01),E-cadherin蛋白和mRNA表达显著升高(P＜0.05),相应的细胞迁移能力显著降低(P＜0.05).而经TGF-β1处理后的SM-AP1细胞表达Vimentin蛋白,E-cadherin启动子区甲基化率显著升高(P＜0.01),E-cadherin蛋白和mRNA表达显著降低(P＜0.05),相应的细胞迁移能力显著提高(P＜0.05).结论:DNA甲基化是调节MPA体外细胞系细胞中E-cadherin表达的重要机制之一,E-cadherin表达升高对MPA细胞转移具有潜在的抑制作用.
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5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响
目的 观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycitydine, 5-Aza-CdR)对体外培养的膀胱癌EJ细胞增生、细胞周期影响及其对此细胞株中Apaf-1基因的甲基化状态的影响.方法 不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养膀胱癌EJ细胞后,用MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;Real-time RT-PCR法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA表达变化.结果 2×10-6、5×10-6、1×10-5mol/L 5-Aza-CdR处理膀胱癌EJ细胞24、48、72 h后,细胞增生受到抑制, 有时间和剂量依赖性.流式细胞仪分析表明, 不同药物浓度处理EJ细胞72 h后细胞增殖指数降低明显:5×10-6、1×10-5mol/L组分别为(34.09±0.79)、(28.55±1.76),与对照组(42.78±1.23)相比,差异有统计学意义(P<0.05).在5-Aza-CdR处理前未检测到膀胱癌EJ细胞系的Apaf-1基因的mRNA表达, 经过5-Aza-CdR处理后, Apaf-1基因在膀胱癌EJ细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA重新表达.结论 5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关.
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miR-200c启动子区甲基化与肺癌细胞对EGFR-TKI耐药相关
目的:初步探讨miR-200c启动子区甲基化与非小细胞肺癌细胞株对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)敏感性变化的关系.方法:选用表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR) 19外显子区缺失突变(E746-A750)的细胞株(H1650、HCC827)及EGFR野生型细胞株(H358、H1299),应用MSP法检测各细胞株miR-200c启动子区的甲基化状态,CCK-8法检测各细胞株对EGFR-TKI吉非替尼的药物敏感性,荧光定量PCR法检测各细胞株miR-200c的相对表达量；去甲基化药物5-aza-CdR处理各细胞株后,观察其对吉非替尼敏感性及miR-200c表达量的变化.结果:吉非替尼敏感细胞株HCC827及H358高表达miR-200c,其启动子区为非甲基化状态;吉非替尼耐药细胞株H1650及H1299的miR-200c表达较低,其启动子区为甲基化状态；经5-aza-CdR处理后,吉非替尼耐药细胞株H1650及H1299的miR-200c及对吉非替尼的敏感性较前显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05)；而吉非替尼敏感株HCC827及H358的miR-200c及对吉非替尼的敏感性未见有明显改变(P＞0.05).结论:miR-200c启动子区的甲基化抑制了miR-200c的表达,从而使H1650及H1299细胞对吉非替尼耐药.
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脱乙酰化酶抑制剂与去甲基化制剂联合作用对K562的细胞凋亡及EZH2基因表达的影响
目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰基抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)联合作用下对白血病细胞株K562中的EZH2基因表达及其对细胞凋亡的影响.方法:通过流式细胞术分析细胞凋亡;利用Western blot检测EZH2的表达水平.结果:对照组、单用5-Aza-CdR(10-7mol/L)或SAHA(10-6mol/L)及两药联合的凋亡率分别是8.2%、13.4%、10.1%和44.7%;两药联合时EZH2的表达水平明显低于单用5-Aza-CdR(10-7mol/L)或SAHA(10-6mol/L).结论:5-Aza-CdR与SAHA协同可抑制K562细胞中EZH2基因的表达,促进细胞的凋亡.
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5-Aza-CdR对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响
目的 研究5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响.方法 用不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7细胞12～96 h,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和流式细胞仪分别检测药物处理前后细胞的增殖活性和凋亡率;实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各阶段RASSF2A mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR(MSP)观察该基因甲基化的改变.结果 用1、5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理MCF-7细胞24、48、72和96h后,细胞生长均受到抑制,呈时间和剂量依赖性.流式细胞仪分析表明,3种药物浓度处理细胞72 h后凋亡率增加,5和10μmol/L组凋亡率分别为(25.5士3.5)％和(58.2士3.2)％,与对照组(13.4±2.0)％相比差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测显示,不同浓度药物处理MCF-7细胞后,RASSF2A mRNA表达水平随着药物浓度的增加而逐步上调;进一步MSP检测发现这些癌细胞中RASSF2A甲基化状态得到了不同程度的逆转.结论 5-Aza-CdR可通过逆转RASSF2A基因异常甲基化导致该基因表达上调来抑制MCF-7细胞增殖,RASSF2A是一个乳腺癌相关抑癌基因.
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抑制DBC2基因启动子甲基化促进乳腺癌细胞凋亡的研究
目的 研究抑癌基因DBC2在乳腺癌的表达与甲基化状态之间的联系,及其对乳腺癌细胞系T-47D细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外培养3种乳腺癌细胞株(T-47D、MCF-7、MDA-MB-23)和正常乳腺细胞株(MCF-10),检测4种细胞中DBC2基因的表达及其启动子区甲基化状况;5-Aza-CdR处理T-47D细胞后,检测5-Aza-CdR对T-47D细胞DBC2启动子甲基化状态和其表达的影响,并通过MTT和Annexin-V/PI双染法分别检测处理前后T-47D细胞增殖和凋亡的变化.结果 DBC2在T-47D细胞表达缺失,乳腺癌细胞DBC2启动子发生甲基化;5-Aza-CdR成功逆转了T-47D细胞DBC2的甲基化状态,并使DBC2 mRNA表达恢复(P＜0.05);不同浓度的5-Aza-CdR处理T-47D细胞后,T-47D细胞增殖下降(P＜0.05),凋亡率增加(P＜0.05).结论 DBC2启动子甲基化导致T-47D细胞DBC2表达沉默,激活DBC2表达可抑制T-47D细胞增殖并促进其凋亡.
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E-cadherin在白血病细胞的表达及机制
目的:检测E-cadherin在白血病细胞的表达并探讨其机制,终阐明E-cadherin介导的造血细胞与骨髓基质问的黏附改变在白血病发生中的作用.方法:应用半定量RT-PCR方法检测98例白血病患者和23例正常骨髓移植供者骨髓单个核细胞的E-cadherin相对表达水平,应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR.(MSP)方法检测各种类型白血病细胞系E-cadherin的表达.用去甲基化试剂5-Aza-CdR处理E-cadherin完全甲基化的白血病细胞系U937.MSP、RT-PCR、流式细胞术及免疫荧光标记法检测诱导后的E-cadherin表达水平.结果:和正常人相比,98例白血病患者E-cadherin表达降低或缺失,非配对t检验进行统计学分析.P<0.05,差异显著;所有白血病细胞系E-cadherin表达缺失或降低,并且其基因处于完全甲基化状态或以甲基化为主的不完全甲基化状态.在合适的5-Aza-CdR作用浓度诱导下,部分细胞在mRNA和蛋白水平恢复E-cadherin表达.结论:白血病细胞E-cadherln表达降低或缺失,其基因的甲基化是重要机制,去甲基化处理可以使部分细胞重新表达E-cadherin.
