首页 > 文献资料
-
miR-378负性调节caspase-3蛋白表达减轻氧-糖剥夺致小鼠N2A细胞缺血损伤
目的 探讨miR-378在氧-糖剥夺(OGD)致小鼠成神经瘤N2A细胞缺血损伤中的作用及其可能分子机制研究.方法 离体培养N2A细胞,采用3 h OGD/24 h复糖复氧模拟缺血/再灌细胞模型,3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测N2A细胞生存率,蛋白印迹(Western blot)检测caspase-3蛋白表达,实时定量RT-PCR检测miR-378和caspase-3 mRNA表达,荧光素酶报告基因验证miR-378对caspase-3 mRNA 3'非翻译区(UTR)的直接调控作用.结果 miR-378在N2A细胞内表达水平,随着3 h OGD复糖复氧时间的增加,而显著降低(P＜0.05,n=5)；在3 h OGD/24 h复糖复氧致N2A细胞缺血损伤中,上调或下调miR-378的表达水平可显著提高或降低N2A细胞生存率(P＜0.05,n=6)；而在非OGD条件下,miR-378表达水平改变对N2A细胞生存率则无明显影响；同样,在3 h OGD/24 h复糖复氧条件下,miR-378表达水平的改变可显著影响caspase-3蛋白表达(P＜0.05,n=3)而非caspase-3 mRNA表达水平；共转染pri-miR-378可显著抑制含caspase-3 mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因的表达(P＜0.05,n=6).结论 miR-378可通过负性调节caspase-3蛋白表达水平,来减轻OGD致N2A细胞缺血损伤,所获实验结果有助于从miRNAs水平为缺血性脑卒中提供潜在的治疗靶点.
-
慢性髓系白血病miR-378甲基化研究
目的:探讨miR-378基因启动子在慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中的甲基化状态,并分析其临床意义.方法:运用实时定量甲基化特异性PCR (real-time quantitative methylation-specific PCR,RQ-MSP)分别检测25例健康供髓者及53例CML患者骨髓单个核细胞中miR-378基因启动子未甲基化水平.结果:17/53例(32.1％)CML患者miR-378基因低甲基化,与对照组仅1/25例(4.0％)相比,两组差异有显著统计学意义(P＜0.01).CML慢性期、加速期、急变期患者miR-378未甲基化频率分别为14/40例(35.0％)、2/5例(40.0％)、1/8例(12.5％),但CML患者不同分期以及核型分组之间的miR-378基因未甲基化水平并无明显差异.未甲基化阳性与阴性组患者的年龄、白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量以及BCR/ABL1融合基因转录水平无显著差异(P＞0.05).结论:miR-378基因低甲基化是CML中常见的分子事件,并且主要见于CML慢性期和加速期患者.
-
外周血miR-378表达对肿瘤诊断价值系统评价
目的 系统评价外周血中miR-378表达对癌症诊断的潜在价值.方法 全面检索PubMed、ISIWeb of Science databases、Cochran Library、CNKI和万方等电子数据库,并以文献追溯的方法,收集关于外周血中miR-378的表达与癌症诊断相关的研究,检索时间为各数据库建库起至2014-06-17.采用QUADAS进行文献质量评价,用Meta-Disc1.4及Stata12.0软件对符合条件的所有研究结果进行Meta分析,计算诊断试验相关指标的合并效应量,采用亚组分析探讨异质性的来源,并对纳入文献进行发表偏倚的评估.结果 终纳入7篇文献,共计680例样本.外周血miR-378的合并灵敏度为0.71,95％可信区间(confidence interval,CI)为0.66～0.75,合并特异度为0.68,95％CI为0.62～0.74,合并阳性似然比为2.24,95％CI为1.85～2.71,合并阴性似然比为0.39,95％CI为0.30～0.52,合并诊断比值比为6.33,95％CI为3.75～10.70,合并受试者工作特征曲线下面积为0.77.根据不同检测方法进行亚组分析结果显示,Taqman探针法的灵敏度为0.75,95％CI为0.66～0.83,特异度为0.73,95％CI为0.62～0.82,SYBR Green荧光染料法的灵敏度为0.69,95％CI为0.64～0.74,特异度为0.66,95％CI为0.58～0.73.结论 外周血中miR-378的表达对癌症具有较好的诊断价值,其中Taqman探针法优于SYBR Green荧光染料法.
-
丙泊酚诱导miR-378抑制大鼠肝脏缺血再灌注细胞凋亡的分子机制研究
目的 探讨丙泊酚诱导miR-378抑制细胞凋亡从而保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用机制.方法 于2017年3—6月在新疆医科大学动物实验中心完成实验.将健康成年SD大鼠45只按随机数字表法分为3组各15只:假手术组(sham组)、肝脏缺血再灌注损伤模型组(IR组)和丙泊酚处理的IR组(IR+propofol组).采用缺血60 min后再灌注120 min实施肝脏的缺血再灌注损伤.通过自动生化分析仪检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平以评价缺血再灌注的损伤程度.TUNEL方法检测3组大鼠的肝组织的细胞凋亡情况,Western blot和QPCR检测miR-378及凋亡相关因子的表达水平,采用人工合成miR-378 mimics,定点突变技术及双荧光素酶报告系统鉴定miR-378下游与凋亡相关的靶基因.结果 IR组的ALT、AST和LDH水平较sham组明显升高(t=17.236、16.527、14.349,P<0.01),IR+propofol组ALT、AST和LDH水平与IR组比较明显下降(t=15.626、14.995、11.376,P<0.01);与sham组相比,IR组的miR-378、Bcl-2和Bcl-xl表达明显降低(t=6.921、11.381、11.467,P<0.01),Cytochrome c、Bax、Bak、Caspase-9和Caspase-3的表达显著提高(t=14.486、12.653、11.434、15.712、15.934,P<0.01);丙泊酚处理的IR+propofol组逆转了此表达模式,使其与sham组趋于一致.TUNEL检测结果发现IR组的凋亡率远高于sham组(t=22.546,P=0.000),丙泊酚处理后,凋亡率降低(t=9.765,P=0.000).在人类正常肝细胞中,miR-378 mimics导致Bcl-2和Bcl-xl表达明显增加(t=15.589、15.715,P<0.01),而Cytochrome c、Bax、Bak、Caspase-9和Caspase-3表达显著下降(t=12.574、15.607、14.894、18.828、11.367,P<0.01),定点突变与双荧光素酶报告系统鉴定Bak及Caspase-3是miR-378的下游靶基因.结论 丙泊酚诱导miR-378表达,调节凋亡相关基因的表达,阻遏细胞凋亡信号的产生,从而发挥保护肝脏缺血再灌注损伤的作用,因此miR-378可作为肝脏缺血再灌注损伤治疗的新靶点.
-
miR-378对人胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响
目的:探讨miR-378对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响.方法:构建miR-378表达质粒并合成miR-378反义寡核苷酸,通过实时定量RT-PCR检测miR-378的表达,然后利用MTT、流式细胞仪、transwell检测抑制与过表达miR-378对增殖、凋亡、细胞周期、迁移及侵袭的影响.结果:过表达miR-378能够抑制胃癌细胞的增殖、促进细胞凋亡以及抑制细胞的迁移与侵袭,而抑制miR-378的表达则得到相反的结果,但对细胞周期影响不大.结论:miR-378能够影响人胃癌细胞株SGC-7901的生物学行为,在胃癌中起到了抑癌基因的作用.
-
过表达miR-378骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死
背景:近发现,miR-378能调节骨髓间充质干细胞的抗缺氧能力,减轻其在缺氧环境下的凋亡.目的:观察miR-378过表达骨髓间充质干细胞在大鼠心肌梗死模型中的治疗作用.方法:体外培养至第3代的大鼠骨髓间充质干细胞用反转录病毒感染建立miR-378过表达细胞系.选用成年SD大鼠,结扎前降支制作急性心肌梗死模型,随机分为3组:对照组(n=10)、BMSCnul组(n=16)、BMSCmiR-378组(n=16).对照组仅注射50μL生理盐水,后2组梗死局部注射50μL生理盐水中含1×107个空病毒转染和miR-378模拟物转染的骨髓间充质干细胞.移植24 h后,利用TUNEL染色测定移植骨髓间充质干细胞的凋亡率,Western blotting检测移植区域内血管内皮生长因子、转化生长因子β1蛋白表达.移植4周后,利用心脏超声评价心功能,取局部心肌组织行组织学及分子生物学分析.结果与结论:①移植24 h后,BMSCmiR-378组中凋亡细胞明显少于BMSCnul组(n=6,P<0.001),血管内皮生长因子、转化生长因子β1表达水平明显高于BMSCnul组(n=6,P<0.001);②移植4周后,BMSCmiR-378组中存活和分化为心肌细胞的骨髓间充质干细胞数量明显多于BMSCnul组(n=10,P<0.001).与其他2组相比,BMSCmiR-378组中新生血管数量明显增多(P<0.001);心肌梗死面积明显减小(P<0.001);左室射血分数明显增加(P<0.05);左室舒张末容积明显缩小(P<0.05).BMSCnul组中上述参数明显优于对照组(P<0.05);③结果表明,miR-378过表达可提高移植骨髓间充质干细胞的抗缺氧能力,继而促进心肌修复.
-
miR-378对缺血缺氧条件下骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响
背景：研究miR-378对缺血缺氧条件下骨髓间充质干细胞生长增殖、细胞凋亡等生物学行为的影响，为进一步改善骨髓间充质干细胞在梗死心肌中的生存提供新方法。
目的：观察miR-378转染后的骨髓间充质干细胞耐受缺血缺氧及促进血管形成的能力。
方法：体外培养的骨髓间充质干细胞分为未转染组和转染组，未转染组为未转染miR-378的骨髓间充质干细胞，转染组则采用化学合成的miR-378模拟物转染SD大鼠骨髓间充质干细胞；将两组骨髓间充质干细胞置于缺血缺氧(无血清，体积分数为1%O2、5%CO2，94%N2)环境中培养24 h后，应用锥虫蓝染色计数法、MTS法检测两组细胞在不同时间点的生长及增殖情况，TUNEL法检测细胞凋亡情况；将两组缺血缺氧后的培养基上清液分别刺激人脐静脉内皮细胞，观察血管形成情况。
结果与结论：缺血缺氧干预后48 h和72 h，转染组的骨髓间充质干细胞活细胞数明显高于未转染组(均为P <0.01)；转染组的骨髓间充质干细胞表现出较高的增殖能力，缺血缺氧干预后24 h及48 h细胞增殖升高较未转染组明显，差异有显著性意义(P <0.01，P <0.05)；缺血缺氧后转染组骨髓间充质干细胞的凋亡比例明显下降(P <0.05)。两组细胞均可促进血管腔样结构形成，但转染组血管管腔样结构较未转染组显著增多(P <0.01)。研究结果提示miR-378可促进缺血缺氧后骨髓间充质干细胞的生长增殖并抑制其在缺血缺氧条件下的细胞凋亡，同时可提高其促血管生成的能力。 -
miR－378与肿瘤的研究进展
微小RNA是一类长度为20～23个核苷酸大小的内源性非编码单链小RNA〔1〕，可通过直接结合靶mRNA的3′非编码区（3′－UTRs）并在转录后水平对靶基因mRNA进行降解或者抑制其翻译〔1～4〕。 miRNAs参与机体各个生理和病理过程，参与调节人类约30％的编码基因的表达，在肿瘤发生发展中既可充当癌基因，也可充当抑癌基因的角色〔1～4〕。本文就当前国内外研究miR－378在多种肿瘤〔胃癌、大肠癌、肺癌、乳腺癌和骨髓增生异常综合征（ MDS）〕的关联作一简要总结。
-
MiR-378a-5p直接靶向ZEB1上调鼻咽癌CNE-1细胞E-cadherin表达
目的:MiR-3 78a-5p是一种被发现多年的微小RNA,其在包括肺癌、结肠癌和乳腺癌等多种肿瘤中都被认为具有抑制肿瘤生长的作用.MiR-378a-5p与细胞增殖的关系在多篇文章中已经有较为详细的阐述,然而,目前没有报道提及miR-378a-5p是否通过作用于细胞迁移和细胞粘附途径从而达到抑制肿瘤生长的作用.方法与结果:在本研究中,我们通过wound healing和trans-well的方法发现在鼻咽癌细胞CNE-1中过表达miR-3 78a-Sp显著的抑制了细胞迁移以及细胞浸润的过程.通过免疫印迹方法,我们揭示了细胞粘附因子E-cadherin在过表达miR-378a-5p后显著上调.通过生物信息学的方法,我们预测了miR-378a-5p的可能作用靶点,并通过双荧光报告载体的方法证实了ZEB1是miR-378a-5p的直接靶点.结论:我们的研究提示了miR-378a-5p造成的E-cadherin的上调是通过直接抑制E-cadherin的负调控因子ZEB1造成的.E-cadherin的上调不但影响了细胞的迁移和粘附,而且通过间接阻断Wnt通路抑制了下游控制细胞增殖的基因表达.本研究为理解miR-378a-5p的肿瘤抑制作用提供了一个新的作用机理.
-
microRNA-378与相关疾病的研究进展
microRNAs是一类内源性表达的、长度约为22个核苷酸的非蛋白编码的单链RNA分子,是重要的转录后基因表达调控因子.在多种生理和病理过程中发挥重要作用,到目前为止,在动植物以及病毒中已经发现有24521个miRNA分子,miR-378是其中的一种,miR-378通过多种机制与众多疾病的发生发展密切相关.miR-378在不同肿瘤组织中起到不同作用,在胃癌,肝癌,结直肠癌等肿瘤中起到抑癌基因的作用,在白血病,胰腺癌,卵巢癌等肿瘤中起到癌基因的作用.在心血管方面,miR-378可以通过多种机制起到保护血管,延缓心血管疾病的发展.在骨代谢方面,miR-378可通过不同机制抑制或促进成骨细胞的分化.本文就其与肿瘤、心血管、骨代谢以及其他方面的研究进行介绍,为这些疾病的治疗和预防提供一种新的思路.
-
微RNA-378促进肾癌细胞增殖和迁移及其机制研究
目的:探讨微RNA-378(microRNA-378,miR-378)对肾癌细胞体外增殖和迁移能力的影响,以及其可能的作用机制.方法:利用TCGA (The Cancer Genome Atlas)数据库分析肾癌和正常肾上皮组织中miR-378的表达情况.采用实时荧光定量PCR法检测人肾癌细胞系786-O、ACHN、769-P和Caki-1,以及人肾小管上皮细胞系HK2中miR-378的表达情况.人工合成miR-378模拟物(mimic)和抑制子(inhibitor),并将它们分别转染肾癌786-O和Caki-1细胞,然后分别采用CCK-8法、Transwell小室法和划痕愈合实验检测miR-378对肾癌细胞增殖和迁移的影响.通过生物信息学方法分析miR-378的靶基因,并采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法进行验证.结果:肾癌组织和肾癌细胞系中miR-378表达均明显上调(P值均＜0.001).miR-378 mimic转染后,肾癌786-O细胞的体外增殖(P＜0.01)和迁移(P＜0.001)能力均明显增强;而miR-378 inhibitor转染后,肾癌Caki-1细胞的体外增殖(P＜0.01)和迁移(P＜0.001)能力均明显减弱.肾癌中miR-378的靶基因可能是大型肿瘤抑制因子2(large tumor suppressor 2,LATS2),肾癌786-O和Caki-1细胞中LATS2 mRNA和蛋白表达水平与miR-378水平均负相关(P值均＜0.01).结论:miR-378过表达可增强人肾癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能与负调控LATS2表达有关.
-
人miR-378慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的 构建人miR-378慢病毒表达载体.方法 酶切法从已构建的质粒获得pri-miR-378,克隆于含绿色荧光蛋白( GFP)编码基因的PGCSIL载体,转化感受态细胞,产生重组慢病毒质粒PGCSIL- miR-378,并进行PCR及测序鉴定.将PGCSIL- miR-378、pHelper 1.0和pHelper 2.0三种质粒DNA共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平用逐孔稀释滴度法测定病毒滴度.结果 成功构建miR-378的慢病毒表达载体,测序证实所插入基因序列完全正确.荧光显微镜检测证实PGCSIL-miR378携有正确的miR-378基因,并能在293T细胞中表达.检测病毒滴度为8×108 TU/ml.结论 成功建立了miR-378慢病毒表达系统.
-
胃癌患者外周血中 microRNA -378的表达及意义
目的：比较胃癌患者与非胃癌患者外周血中microRNA-378（ miR-378）表达的差异，并探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR的方法检测20例胃癌患者、10例胃癌前病变患者和20例健康对照者外周血中miR-378的表达水平。结果实时荧光定量PCR方法能够检测到外周血标本中微量miRNA的表达；胃癌患者外周血中miR-378的表达（log2△Ct）水平为-0.859±1.764，较胃癌前病变患者（0.882±0.966）及健康对照者（1.646±1.54）表达显著上调（P＜0.001），且癌前病变患者较健康对照者表达也显著上调（P＜0.001）；胃癌患者外周血中miR-378的表达水平与患者年龄、性别、肿瘤分化类型及肿瘤的浸润转移无关联（ P＞0.05）。结论外周血miR-378有可能作为胃癌诊断及筛查等方面的分子标志物。
-
MiR-378对肝癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制
目的:探讨miR-378对肝癌细胞侵袭迁移的影响并阐明其作用机制.方法:用脂质体介导的转染方法将miR-378模拟物(miR-378 mimics)转染肝癌细胞株hepG2及hepG2.2.15,采用Transwell实验及划痕实验检测细胞侵袭迁移能力.构建过表达IGF1R的质粒载体,与miR-378mimics共转染肝癌细胞株hepG2及hepG2.2.15,观察miR-378是否通过IGF1R对肝癌细胞侵袭迁移进行调节.结果:与对照组比较,miR-378 mimics组肝癌细胞侵袭和迁移能力均显著降低(P＜0.01).共转染IGF1R及miR-378 mimics后,与转染miR-378 mimics相比,肝癌细胞侵袭和迁移能力均显著增强(P＜0.01),表明过表达IGF1R消除了miR-378诱导的肝癌细胞侵袭和迁移的抑制.结论:MiR-378抑制肝癌细胞侵袭迁移,其作用是通过抑制其下游靶基因IGF1R发挥的.
-
肝癌患者中 microRNA－378与 FOXO1基因表达的相关关系研究
目的：研究microRNA－378a－3p（miRNA－378）与FOXO1基因在肝癌中的表达情况及两者表达的相关性。方法提取8例肝癌患者癌组织及其相对应癌旁组织标本的总RNA，采用实时荧光定量PCR分别检测miR－378和FOXO1基因的相对表达量，通过独立样本t检验比较癌及癌旁组织中miR－378、FOXO1基因表达的差异，并通过双变量相关分析探索癌组织中两者之间的相关关系。结果肝癌组织中miR－378和FOXO1基因的表达量均明显低于癌旁组织中的表达（ P＝0．0106和P＝0．000623），两者相对表达量在肝癌组织中呈正相关关系（ r＝0．541，P＝0．031）。结论肝癌组织中miR－378与FOXO1基因的表达较癌旁组织明显降低，miR－378与FOXO1基因的异常表达及其相互作用网络在肝癌发生发展中可能具有重要的意义。
-
miR-378靶向胰岛素样生长因子1类受体抑制肝癌细胞生长
目的 探讨miR-378对肝癌细胞生长增殖的影响及其机制. 方法 用miR-378过表达慢病毒感染肝癌细胞株HepG2和稳定表达HBV的肝癌细胞株HepG2.2.15,采用四甲基偶氮唑盐和克隆形成实验研究其在肝癌发生和发展中的作用.生物信息学方法预测miR-378的靶基因,荧光素酶报告实验验证靶基因,并用实时定量PCR方法和Western blot方法研究上调miR-378表达对其靶基因表达的影响,分析miR-378在肝癌中作用的机制.采用SPSS13.0软件进行统计分析,两组间比较采用t检验. 结果 与空载体感染组比较,miR-378过表达慢病毒感染组肝癌细胞的增殖活性降低和克隆形成减少,差异有统计学意义(P＜ 0.01或P＜ 0.05).用生物信息学方法预测胰岛素样生长因子1类受体(IGF1R)为miR-378的靶基因,荧光素酶报告实验结果显示,与对照组比,miR-378与IGF1R 3 '-UTR共转染组荧光酶活性下降了41.8％,差异有统计学意义(P＜0.01).上调肝癌细胞中miR-378表达后,IGF1R mRNA表达与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),而IGF1R蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论 miR-378可抑制肝癌细胞的增殖和克隆形成,起抑癌基因的作用,其作用是通过抑制其下游靶基因IGF1R发挥的.HBV导致的miR-378下调表达可能是HBV相关性肝癌发生和发展的分子机制之一.
-
miR-378对骨髓增生异常综合征细胞凋亡及增殖的影响
目的 研究miR-378对骨髓增生异常综合征SKM-1细胞凋亡和增殖的影响.方法 我们分别用miR-378重组慢病毒和阴性对照病毒感染SKM-1细胞.然后采用CCK-8检测miR-378对SKM-1细胞生长的影响,流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡和周期情况,并用Western blot检测凋亡过程中的关键因子cleaved-caspase-3蛋白的表达.用生物信息学方法预测miR-378可能的靶基因,用PCR和Western blot进行初步验证.结果 miR-378慢病毒转染组的细胞增殖活性明显降低,流式细胞术检测miR-378组的细胞凋亡率为(12.90±3.72)％,明显高于阴性对照病毒转染组和空白对照组[(3.21±1.91)％、(2.78±1.04)％,P＜0.01];miR-378组的G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.同时,Western blot结果显示miR-378过表达引起了cleaved-caspase-3的表达升高.用生物信息学方法预测抗凋亡蛋白基因BCL2L2为miR-378潜在的靶基因,并发现miR-378可以抑制BCL2L2蛋白的表达.结论 miR-378可以通过引起细胞凋亡和细胞周期阻滞来抑制SKM-1细胞的增殖,并降低BCL2L2蛋白的表达.
-
脂肪细胞分化相关miRNA-hsa-miR-378生物信息学分析
[目的]利用各种生物信息学工具分析hsa-miR-378转录调控、靶基因功能,以期为研究hsa-miR-378在人脂肪细胞分化过程中的功能与调控机制提供线索. [方法]应用UCSC Genome Browser、Promoter scan等在线工具,分析hsa-miR-378在基因组上下游10 kb以内的CpG岛分布情况、转录起始位置(TSS)、转录因子结合位置(TFBS)等；选择TargetScan、PicTar、MiRanda三种计算方法预测hsa-miR-378的靶基因,取三个预测结果的交集,并合并DIANA LAB-TarBase 6.0数据库的已验证靶标,对所得靶基因集分别进行GO注释描述、GO富集分析和pathway富集分析. [结果]hsa-miR-378可能具有独立的启动子,可能受C/EBPβ转录因子的调控；其预测靶基因集合富集于转录调控、蛋白质修饰、细胞分化等生物学过程和功能(P＜0.01)；并显著富集于TGF-β信号通路、Wnt信号通路等4个信号通路,以及甲状腺癌、系统性红斑狼疮等8个疾病通路中(P＜0.05). [结论]通过对hsa-miR-378转录调控元件、靶基因的分析,为hsa-miR-378在人脂肪细胞中的功能与调控机制研究提供了线索和理论依据.
