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KNDC1文献资料
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重组人KNDC1腺病毒表达载体的构建及其促HUVEC衰老作用
目的 构建人KNDC1腺病毒表达载体,观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及功能.方法 扩增KNDC1基因并与腺病毒骨架载体进行体外重组连接,经筛选、测序确认后转染进HEK293A细胞进行包装;按pAd-enoX试剂盒的步骤纯化重组腺病毒,通过终点稀释法测定病毒滴度;用pAdeno X-KNDC1感染HUVEC,48 h后用Western blot检测KNDC1蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况.结果 经测序确认目的基因KNDC1成功克隆入腺病毒载体中.转染HEK293A细胞后观察到细胞变圆、部分细胞漂浮的特征性病变效应,病毒滴度达到1×1011 PFU.感染了pAdeno X-KNDC1的HUVEC中KNDC1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).随着pAdenoX-KNDC1剂量的增加,衰老HUVEC数量增多.结论 人KNDC1腺病毒表达载体构建成功并能促进HUVEC衰老.
