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FRA、Adropin和HE4联合检测在子宫内膜癌疾病诊断中的意义研究
目的 探讨血清叶酸受体α(FRA)、adropin和人血清附睾蛋白4(HE4)联合检测在子宫内膜癌(EC)诊断中的意义.方法 选择2016年3月至2018年3月在我院接受治疗的93例EC患者(EC组)、96例子宫良性疾病患者(子宫良性疾病组)和100例健康女性(对照组)作为研究对象进行研究.应用酶联免疫吸附试验检测并比较各组研究对象的血清FRA、adropin和HE4表达水平,应用Pearson相关性分析对三项指标之间的相关性进行分析,采用受试者工作特征曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC),评价血清FRA、adropin和HE4联合检测诊断子宫内膜癌的价值.结果 EC组血清FRA为1614±191pg/mL,adropin为1.94±0.75ng/mL,HE4为106.57(22.39～1411.12)pmol/L,子宫良性疾病组分别为1142±156pg/mL、9.07±2.57ng/mL和31.02(13.05～163.02)pmol/L,对照组分别为448±153pg/mL、14.52±17.60ng/mL和15.61(11.37～48.29)pmol/L,其中EC组和子宫良性疾病组的FRA和HE4均显著高于对照组,adropin则显著低于对照组,EC组和子宫良性疾病组比较,差异也具有统计学意义(P<0.05),且子宫良性疾病组的FRA和HE4也显著高于对照组,adropin显著低于对照组(P<0.05).EC组患者中临床分期≥Ⅱ期者,深肌层浸润患者的血清FRA和HE4显著高于Ⅰ期者和浅肌层浸润者,adropin则显著低于Ⅰ期者和浅肌层浸润者(P<0.05);而不同年龄段、不肿瘤分化程度、绝经情况和病理类型者血清FRA、adropin和HE4水平比较均无显著性差异(P>0.05).EC组患者血清HE4和FRA水平呈正相关(r=0.604,P<0.001),血清HE4、FRA均与adropin水平呈负相关(r=-0.379,P=0.026;r=-0.442,P=0.002).应用ROC评价FRA、HE4、adropin联合检测诊断EC的AUC为0.951(95％CI:0.893～0.980)灵敏度为91.96％.结论 :子宫内膜癌患者血清adropin水平降低,FRA和HE4水平升高,三者可作为子宫内膜癌的血清学标志物,且三者血清水平的联合检测有助于子宫内膜癌的诊断.
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叶酸受体α在女性生殖系统肿瘤中的研究进展
叶酸作为水溶性维生素B家族中的成员之一, 存在于许多蔬菜中,它是细胞代谢、DNA合成与复制、细胞分裂生长以及生存的重要基础成分,参与蛋氨酸代谢通路以及DNA甲基化.因此,叶酸对于快速分裂的细胞尤为重要.
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叶酸受体α在妇科肿瘤临床应用的现状
叶酸受体(FR)是一种富含半胱氨酸的糖基磷脂酰肌醇偶联蛋白,可分为FRα、β及γ 3种亚型.其中,FRα于妇科肿瘤中的相关研究,主要集中在抗FRα抗体、FRα介导的成像技术和叶酸偶联药物靶向治疗等方面.随着对这些方面研究的不断深入,FRα作为妇科肿瘤的生物学标志物之一,愈来愈显示出较高的潜在临床价值.笔者拟就FRα在妇科肿瘤临床应用的现状进行阐述.
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叶酸受体α在宫颈癌中的研究进展
叶酸受体(FR)是一种糖基磷脂酰肌醇偶联蛋白,其在正常组织中低表达,在肿瘤细胞膜表面高度表达,分为FR-α、FR-β、FR-γ,其中FR-α高表达于黏液腺癌中,包括卵巢腺癌、子宫腺癌、宫颈腺癌,睾丸绒毛膜癌和某些脑肿瘤中,并且少量地表达于肾、结肠及心脏等癌症中.由于FR在宫颈癌不同分化组织表达水平不同,而在正常组织中表达高度保守,通过对FR的结构、染色体定位、作用机制及其与配体的关系的研究,有助于了解FR在宫颈癌早期诊断及治疗中应用.
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叶酸受体α在原发性肝癌组织及细胞中的表达
目的 研究原发性肝癌组织和细胞中叶酸受体α的表达情况,探讨其与肿瘤临床和病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测原发性肝癌组织及细胞、肝硬化组织及正常肝组织中表达叶酸受体α的情况,分析原发性肝癌组织叶酸受体α表达与临床病理特征的关系.结果 原发性肝癌组织中叶酸受体α表达率为88.9%(40/45),肝硬化组织为18.8%(6/32),正常肝组织中无叶酸受体α表达(0/20).原发性肝癌组织叶酸受体α表达与患者性别、年龄等因素无相关性,但进展期患者阳性表达高于早-中期患者.结论 原发性肝癌组织广泛高表达叶酸受体α,这为早期诊断及靶向药物治疗奠定了基础.
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叶酸受体α在妇科恶性肿瘤中的研究进展
叶酸受体(folate receptor,FR)是一种糖基磷脂酰肌醇偶联蛋白,包括FRα、FRβ、FRγ三种,其中FRα在正常组织中低表达,在肿瘤细胞膜表面高表达,参与肿瘤的发生与发展.近年研究表明,FRα多表达于腺癌,如卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈腺癌,非小细胞肺癌和恶性间皮瘤等.已有研究显示,FRα通过参与叶酸代谢、雌激素受体调控及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路等多种途径影响肿瘤的发生、发展.有关FRα在妇科肿瘤组织中的表达研究仍存在许多争议,且具体作用机制尚不明确.针对FRα在妇科肿瘤中的表达及其可能机制进行综述.
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叶酸受体α在高度鳞状上皮内病变及早期宫颈鳞癌组织表达及其意义研究
目的 探讨叶酸受体(FR)α在高度鳞状上皮内病变(HSIL)及早期宫颈鳞癌(SCC)组织中的表达及在提高HSIL检出率中的意义.方法 采用快速冰冻免疫组化法检测2014年11月至2015年4月在山西医科大学第二医院妇科门诊经阴道镜宫颈组织病理证实的21例HSIL、30例早期SCC及正常宫颈组织30例(对照组)中FRα的表达.并对这些病例进行人乳头瘤病毒(HPV)和液基薄层细胞学(TCT)检查.结果 在对照组、HSIL组和SCC组中,FRα阳性表达率依次为26.7％、85.7％、76.7％,3组间差异有统计学意义(x2=19.368,P＜ 0.001).其中,HSIL、SCC组FRα阳性表达率高于对照组(p＜0.05);但HSIL和SCC组间差异无统计学意义(P＞0.05).FRα阳性者中HSIL的检出率(34.0％),与TCT阳性者中HSIL的检出率(33.3％)相当,高于HPV(27.4％);FRα快速冰冻免疫组化检测HSlL的灵敏度和特异度分别为76.2％和93.3％,受试者工作特征曲线(ROC)下面积为0.848,高于HPV、TCT.两两联合检测中以TCT串联FRα效果佳.结论 快速冰冻免疫组化检测FRα蛋白表达可作为客观的生物指标提高HSIL的检出率.
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FRα在垂体腺瘤中的表达及其与无功能垂体腺瘤侵袭性的关系
目的 检测叶酸受体α(FRα)在各型垂体腺瘤和正常腺垂体中的表达情况；寻找对无功能垂体腺瘤(NFPA)诊断及其侵袭性判断具有重要意义的分子生物学指标.方法 收集垂体腺瘤组织标本44例和正常腺垂体组织3例,利用免疫荧光共聚焦,实时定量反转录(real-time RT-PCR)方法检测FRα在各标本中的表达.结果 FRa仅在NFPA中特异性表达,在其他类型的垂体腺瘤和正常腺垂体中不表达,差异具有统计学意义(P＜0.01)；FRa的表达水平与NFPA侵袭性存在显著相关性(P＜0.05).结论 FRα可能在NFPA的发生发展中起到重要的作用；同时FRα可能作为NFPA特异性的诊断指标,为肿瘤的靶向诊治提供理论基础.
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叶酸受体α在胃癌组织中的表达及其与叶酸、亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性以及胃癌生物学行为的关系
背景:叶酸缺乏与胃癌发生有关,亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是叶酸代谢途径的关键酶之一,叶酸受体α(FRd)可介导细胞外叶酸进入细胞内.目的:探讨人胃癌组织中FRα的表达及其与叶酸、MTHFR基因多态性以及胃癌生物学行为的关系.方法:收集38例胃癌患者的癌组织、癌旁和外周正常组织标本,以自动化学发光系统测定叶酸含量,以聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测MTHFR基因677(C→T)和1298(A→C)两个常见多态,并以即时逆转录PCR(real-time RT-PCR)检测FRα的表达.结果:FRα在胃癌组织中的表达显著降低(P＜0.01),且表达降低癌组织与表达无变化癌组织相比,叶酸含量呈降低趋势(P=0.06).FRα的表达与MTHFR基因多态性无明显相关性.年龄≥60岁、有淋巴结转移以及肿瘤直径≥5 cm的胃癌组织FRα表达水平更低(P≤0.05).结论:胃癌组织中FRα低表达影响了细胞外叶酸进入细胞内,从而参与了胃癌的发生,其表达降低与年龄增长和胃癌的进展有关.
关键词： 叶酸受体α 胃肿瘤 叶酸 亚甲基四氢叶酸还原酶 基因多态性 -
叶酸受体α原核载体的构建及表达
PCR法扩增叶酸受体α基因片段,经Nco Ⅰ和EcoRⅠ双酶切后克隆到原核表达载体pet22b,并进行双酶切和测序鉴定;将测序正确的重组质粒通过CaCl2法转入BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导蛋白表达,镍柱亲和纯化,通过SDS-PAGE,Western blot和ELISA鉴定蛋白表达;免疫小鼠,血清效价检测蛋白免疫原性.经双酶切和测序验证,成功构建FRα-pet22b表达载体.Western blot验证表明,叶酸受体α基因能在BL21中表达目的蛋白,但ELISA值较低.经免疫后小鼠血清与市售叶酸受体α亲和力差,预示原核表达虽能得到叶酸受体α,但其构象可能与真核表达蛋白不同.
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叶酸受体α真核表达载体的构建及在HEK293细胞中表达的鉴定
从高表达叶酸受体α的卵巢癌细胞株SKOV3中提取总RNA,RT-PCR扩增FRα基因片段,使用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切后克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切及测序鉴定；用脂质体介导法将重组质粒转染入人胚肾细胞HEK293中,并利用RT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光染色检测细胞内FRα基因的表达情况.通过RT-PCR扩增得到750 bp左右的FRα基因片段,并构建了真核表达重组质粒,经酶切、测序鉴定正确.转染HEK293细胞后,RT-PCR检测到细胞中FRα mRNA的存在,Western blot、细胞免疫荧光证明FRα蛋白在细胞中的表达.成功构建了FRα基因的真核表达重组质粒,该质粒可在真核细胞中表达FRα蛋白,这些实验结果为卵巢癌基因疫苗的研究奠定了基础.
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叶酸受体α与卵巢肿瘤
卵巢肿瘤的死亡率为妇科肿瘤之首,积极探索早期卵巢癌的筛查方法和新型治疗药物,对降低死亡率具有重要意义.叶酸受体α(FRα),对叶酸具有高度亲和性.在生理情况下,叶酸受体α仅低度表达于少数正常组织细胞,而在多种人类上皮源性肿瘤中,尤其是卵巢肿瘤中,都可以检测到高水平表达的叶酸受体α.卵巢上皮癌中有90％以上可见叶酸受体α的高表达,其在卵巢肿瘤中的表达水平可高于正常10～ 100倍.更为重要的是,叶酸受体α在早期卵巢肿瘤中有很高的阳性率.叶酸受体α为一种极具潜力的卵巢癌相关性的肿瘤抗原,可以作为卵巢肿瘤早期诊断标志物,以及卵巢肿瘤被动免疫治疗的靶点.
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叶酸受体α在卵巢癌靶向诊断和治疗中的应用
卵巢癌是妇科肿瘤相关死亡重要原因，急需新的诊断和治疗方法。叶酸受体α（ folate receptor alpha， FRα）是糖基化磷脂酰肌醇（glycosylphosphatidylinositol， GPI）锚定膜蛋白，它在卵巢癌中过表达，较低或限制性分布于正常组织中，这使它成为卵巢癌较有前景诊断和治疗靶点。文章主要介绍了FRα在肿瘤发展中的作用，作为诊断和预后标志物的应用以及靶向FRα的卵巢癌潜在治疗方法，如疫苗、单克隆抗体和过继性T细胞治疗等相关进展。
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叶酸受体α高表达与浆液性卵巢癌患者生存率的相关性研究
目的 探讨浆液性卵巢癌患者叶酸受体 α(FR-α)表达与卵巢癌患者生存率的相关性.方法 使用实时荧光定量PCR检测91例浆液性卵巢癌患者肿瘤组织中FR-α 表达情况,以及分析患者其他临床病理参数[如FIGO分期、肿瘤分化程度、是否接受理想的手术、淋巴结转移、术前血清中肿瘤抗原125(CA125)含量及FR-α 表达等与患者无病生存率(FDS)和总生存率(OS)的关系].结果 FIGO分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ期的患者分别为4、6、65及16例,44％ 患者接受佳肿瘤细胞减灭术.晚期患者或是接受次理想减积手术患者FR-α 表达较高.愈后分析表明,FR-α 高表达是FDS较差的预后因子[H^R=2.70(1.20,6.05),P=0.016],也是OS较短的预后因素[H^R=3.51(2.93,13.29),P=0.035].结论 FR-α 高表达是浆液性卵巢癌患者FDS和OS较差的预后因子,FR-α 是浆液性卵巢癌潜在的生物标志物和治疗靶点.
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不同分型分期子宫内膜癌叶酸受体α的表达及诊断性能评估
目的 探讨不同分型分期子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)叶酸受体α(folate receptor alpha,FRA)的表达,并与CA125对比评估其诊断性能.方法 收集子宫内膜癌患者血清50例,正常血清30例,Ⅰ型内膜癌组织83例,Ⅱ型内膜癌组织及正常内膜组织各30例.采用ELISA法检测血清FRA,电化学法检测血清CA125,免疫组化法检测组织FRA及CA125.结果 Ⅰ型内膜癌组织FRA的高表达率高于Ⅱ型内膜癌,差异具有统计学意义(P<0.05).Ⅰ型内膜癌晚期组织FRA的高表达率高于早期,差异具有统计学意义(P<0.05).ROC曲线提示FRA敏感性、特异性强于CA125,联合血清FRA及CA125的诊断准确度更高.结论 不同分型内膜癌FRA的表达不同提示存在不同的发病机制.Ⅰ型内膜癌晚期FRA的高表达率为FRA靶向荧光剂应用于精细化手术提供了可能.FRA和CA125联合检测内膜癌有更好的诊断价值.
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子宫内膜腺癌组织FRA和CA125的表达及意义
目的:探讨叶酸受体α(FRA)与CA125在子宫内膜癌的发生发展中的作用及临床意义.方法:收集60例子宫内膜腺癌、46例子宫内膜增生症及10例正常子宫内膜组织病理标本,采用免疫组化法检测各组内膜组织中FRA、CA125的表达情况,比较其差异及与临床病理特征的关系.结果:子宫内膜癌组织中FRA阳性率为93.3％,高表达率为65.0％,明显高于子宫内膜增生症组和正常组(P＜0.05);在内膜癌组织中,FRA的高表达与年龄、FIGO分期、分化程度相关(P＜0.05),与肌层浸润深度等方面的差异无统计学意义(P＞0.05).子宫内膜增生症中伴不典型增生者的FRA表达较其他增生亚型高.CA125在内膜癌及内膜增生症中的高表达率均明显高于对照组(正常组)(P＜0.05).结论:FRA可能参与到子宫内膜癌的发生发展过程中,且对子宫内膜癌的预后评估有一定的指导意义,并有望成为子宫内膜癌的治疗靶点.CA125的表达在子宫内膜病变过程中起一定作用.FRA及CA125两者之间的关系仍有待更深入的研究及探讨.
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垂体腺瘤中FRα的表达与临床意义
目的：检测垂体腺瘤中叶酸受体α（ FRα）的表达情况，探讨FRα与垂体腺瘤相关临床指标的关系。方法运用冰冻切片免疫组化方法，检测124例垂体腺瘤中FRα的表达情况，分析其与患者性别、年龄、肿瘤径线、肿瘤侵袭性的关系。结果 FRα在NF腺瘤中的阳性率为73．8％（31/42），在PRL腺瘤中的阳性率为9．7％（3/31），在GH腺瘤中的阳性率为6．7％（2/30），在ACTH腺瘤中的阳性率为9．5％（2/21），FRα在NF腺瘤中的表达水平明显高于在其他病理类型垂体腺瘤中的表达（P＜0．05）。在垂体NF腺瘤中，FRα的表达与肿瘤的侵袭性有关（P＜0．05），与性别、年龄、肿瘤大小无明显关系（P＞0．05）。在其他三种垂体腺瘤中，FRα与上述指标无明显关系。结论 FRα在垂体NF腺瘤中高表达，在其他病理类型的垂体腺瘤中低表达；FRα与垂体NF腺瘤的侵袭性相关。
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稳定表达叶酸受体α的C26细胞株的建立
目的 建立稳定表达叶酸受体α(FRα)的C26细胞,用于FRα基因疫苗的后续研究.方法 采用脂质体转染法,将前期构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1-FRα基因导入C26细胞,用G418加压进行筛选,并通过单克隆操作,建立稳定转染叶酸受体α基因的单克隆细胞株.利用反转录PCR及免疫荧光细胞化学染色检测稳定转染细胞中叶酸受体α基因的表达情况,并利用反转录PCR检测传代细胞中FRα基因表达的稳定性.结果 经转染、G418筛选以及单克隆化操作,得到单克隆FRα基因稳定转染细胞株,所得单克隆稳定转染细胞株可表达FRα mRNA及蛋白,并能够在多次传代后保持表达的稳定性.结论 成功构建了FRα稳定转染细胞株.
