基于受体药效团的CETP天然抑制剂的发现研究

胆固醇酯转移蛋白(cholesterol ester transfer protein,CETP)是HDL的重要调控因子,抑制其活性可有效提高HDL的含量.由于HDL通过胆固醇逆向转运对动脉粥样硬化发挥的重要遏制作用,CETP已成为治疗心血管疾病的热门靶点.该文以PDB数据库中编号为4F2A的CETP蛋白结构为研究对象,对其活性区域内的药效特征进行识别、聚类及筛选,建立了基于CETP蛋白结构的受体药效团.优药效团由6个疏水特征、1个氢键供体特征及9个排除体积组成,其辨识有效性指数N为3.33,综合评价指数CAI为2.31.同时,利用该模型对TCMD进行虚拟筛选,获得来源于315味中药的629个化合物.后,该研究基于分子对接技术探讨了活性区域的关键氨基酸残基以及中药活性化合物与受体的相互作用,进一步验证了研究结果的可靠性.其中枸杞子、五味子等部分含有潜在活性成分较多的中药已有文献报道确有降脂活性.该研究为从中药中发现CETP抑制剂、探讨中药降脂作用机制提供了数据支撑.

长寿人群CETP I405V基因多态性与血脂水平的相关性

目的 探讨广西红永河流域长寿群体的胆固醇酯转移蛋白(CETP)I405V基因多态性与血脂的关系.方法 研究对象为523例广西红水河流域长寿人群(HL),对照组为498例同地区非长寿人群(HNL),用PCR-RFLP方法进行CETP I405V基因分型,并分析其多态性对血脂的影响.结果 1)该地区人群的等位基因以Ⅰ(58.96％)为主,基因型以Ⅱ(34.28％)、Ⅳ(49.36％)为主.性别分层和BMI分层后,HL组的基因型及等位基因频率的分布均未发现明显差异;HNL组女性Ⅱ、W基因型频率高于男性,Ⅳ则低于男性(P＜0.01),HNL超重亚组VV、Ⅱ的频率高于正常体重亚组,Ⅳ反之(P＜0.05).2)不同基因型对血脂无显著影响.因组别不同、性别分层、BMI分层,血脂水平在不同基因型均出现不同变化趋势,但乏规律可循.结论 CETP I405V多态性对广西红水河流域长寿人群的血脂水平影响较小,其血脂格局可能源自其他未知遗传变异及其与环境的交互作用.

torcetrapib与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化(AS)是引起心肌梗死、脑梗死及冠心病等心脑血管疾病死亡的主要原因.近来对胆固醇酯转移蛋白(CETP)的抑制作用已成为治疗AS的新靶点,torcetrapib是治疗AS和脂蛋白紊乱的新的CETP抑制剂.家兔实验表明,torcetrapib对CETP活性的抑制达70%～80%,且能使HDL-C水平增加50%～100%.临床试验表明,torcetrapib单独服用或伍用其他抑制剂,均能使HDL-C水平增加,LDL-C水平降低,达到AS的治疗目标.

PCR- SSCP法检测CETP第15外显子基因突变

目的:检测胆固醇酯转移蛋白第15外显子基因突变及其性质.方法:利用PCR-SSCP方法检测CETP第15外显子的基因突变.根据双脱氧DNA链合成终止法对PCR产物直接测序,确定基因突变的性质.结果:16例高HDL-C个体中发现了2例杂合子突变,经测序证实为第1506位核苷酸A→G突变.结论:在高HDL-C个体中存在较高的CETP第15外显子基因突变,PCR-SSCP和DNA测序技术是确定基因突变存在和性质的简便易行的技术和方法.

天津地区国人CETP第14内含子+1位G→A突变的检测

目的:检测胆固醇酯转移蛋白第14内含子+1位G→A突变.方法:利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术检测该突变,首先扩增胆固醇酯转移蛋白目的基因片段,产物经限制性内切酶Ndel消化后,用琼脂糖凝胶电泳分析.结果:95例健康体检者中发现1例杂合子突变,突变率约为1.05%.结论:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术检测该突变简便、易行、可靠.

胆固醇酯转移蛋白小分子抑制剂的研究进展

胆固醇酯转移蛋白(CETP)通过介导脂质在不同脂蛋白之间的转运,调节脂代谢.抑制CETP的转运活性,可提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)水平,因而CETP抑制剂有望发展成为新型的治疗心血管疾病的药物.该文按照结构类型对近年来文献报道的代表性小分子CETP抑制剂进行综述.

家兔胆固醇酯转移蛋白基因克隆及其真核表达载体的构建

目的:克隆家兔胆固醇酯转移蛋白(CETP)基因,构建其真核表达载体,研究CETP基因的结构与功能,为进一步研究CETP在动脉粥样硬化(As)中的作用机制提供参考.方法:采用TRIzol提取家兔肝组织总RNA,采用RT-PCR方法将RNA逆转录为cDNA,以cDNA为模板,用LA Taq酶进行PCR扩增,克隆出CETP基因,将CETP cDNA片段克隆至pMD19-T载体上,对重组的CETP-pMD19-T测序后,登录GenBank进行序列比对,利用nnPredict软件分析预测CETP的二级结构.将CETP cDNA片段克隆至pcDNA3.1真核表达载体上,对重组质粒进行PCR及酶切鉴定.结果:测序及序列比对显示与M27486基因序列98％相符；家兔CETP基因cDNA全长1 659 bp,编码序列(CDs区)长1 494 bp,编码498个氨基酸.CETP的二级结构以α螺旋结构为主,相对分子质量为142119.4,pI为4.91.结论:成功克隆了家兔CETP基因,并成功构建了其真核表达载体,明确了CETP的二级结构.

高HDL-C个体CETP基因15外显子错义突变(442D∶G)的检测及临床意义

目的证实胆固醇酯转移蛋白(CETP)基因15外显子错义突变(442D∶G)是导致高α脂蛋白血症的重要因素之一.方法建立检测CETP基因15外显子错义突变(442D∶G)的聚合酶链反应-限制性内切酶酶切片断长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,检测50例高α脂蛋白血症(HDL-C≥1.7 mmol/L)个体CETP基因15外显子442D∶G错义突变的阳性率.结果 50例高α脂蛋白血症患者中,发现杂合子15例,纯合子1例;对照组70例,仅1例杂合子,差异有显著性(u<0.05).结论 CETP基因15外显子错义突变是导致高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的重要因素之一.

胆固醇酯转移蛋白纳米疫苗抗动脉粥样硬化的初步实验研究

目的·评估胆固醇酯转移蛋白(CETP)纳米疫苗是否能提高CETP半抗原免疫原性,并初步探讨其抗兔动脉粥样硬化的可行性.方法· 采用Fmoc法合成巯基修饰的CETP多肽;用交联剂Sulfo-SMCC将CETP多肽分别与载体蛋白——卵清蛋白(OVA)分子、OVA纳米颗粒链接;免疫新西兰大白兔,检测实验兔血清的抗体、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度.设PBS对照组(n=3)、传统疫苗组(n=3)、纳米疫苗组(n=3),进行各组间比较.结果·动态光散射粒度仪结果显示纳米疫苗粒径约70 nm, zeta电位约-8.81 mV,透射电子显微镜观察结果显示纳米疫苗近似球形;紫外分光光度计检测结果显示终产物大吸收峰发生偏移,SDS-PAGE结果显示终产物相对分子质量增加,皆证明抗原负载成功; ELISA结果显示自第3周开始纳米疫苗组的D(450 nm)明显高于传统疫苗组.结论·该纳米疫苗可以提高CETP半抗原的免疫原性,激发实验兔产生更高的抗体.

胆固醇酯转移蛋白与动脉粥样硬化相互关系的临床研究

由于胆固醇酯转移蛋白(CETP)可能与动脉粥样硬化(AS)发生和发展相关,目前国际上关于CETP的研究是一个热点,并已取得了很大进展.国内关于CETP的研究刚起步,尚未见报道.本研究采用ELISA法检测血浆CETP浓度,以动脉粥样硬化组和正常对照组为对象,对其血浆中的CETP、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A-I(apoA-I)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和载脂蛋白B(apoB)进行检测并分析,现将结果报告如下.

妊娠期高脂血症孕妇高密度脂蛋白胆固醇逆向转运功能的变化

目的 观察妊娠期高脂血症孕妇的高密度脂蛋白(HDL)胆固醇逆向转运功能的变化.方法 选取21例妊娠期高脂血症孕妇、21例妊娠期正常孕妇,采用ELISA法检测其血清HDL胆固醇逆向转运功能指标腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)、载脂蛋白A1(ApoA-1)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)、胆固醇酯转移蛋白(CETP),并进行对比分析.结果 妊娠期高脂血症孕妇血清ABCA1、ApoA-1、LCAT、CETP水平分别为(1.19±0.68)ng/mL、(0.80±0.62)μg/mL、(0.92±0.30)μmol/L、(621.48±320.31)ng/mL,妊娠期正常孕妇血清ABCA1、ApoA-1、LCAT、CETP水平分别为(2.30±1.56)ng/mL、(2.18±1.78)μg/mL、(2.19±1.87)μmol/L、(968.94±714.97)ng/mL,两者各指标相比,P均<0.05.结论 妊娠期高脂血症孕妇的HDL胆固醇逆向转运功能下降,是妊娠期高脂血症的发病机制,血清ABCA1、ApoA-1、LCAT、CETP可以作为妊娠期高脂血症的生物标志物.

广西红水河流域长寿人群CETPTaqIB基因多态性、血脂水平及相关性分析

目的 观察广西红水河流域长寿人群胆固醇酯转移蛋白(CETP)TaqIB基因的多态性,并探讨其基因型与该地区血脂水平和长寿的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对523例广西红水河流域90岁以上壮族长寿老人(长寿组)和498名普通健康壮族中老年人(对照组)进行基因分型,并检测血压、体质量、身高、体质量指数、CH、TG、HDL、LDL等指标.结果 研究人群中CETPTaqIB的基因型频率分别为B1B1 38.49％,B1B249.95％,B2B2 11.56％,等位基因频率分别为B1 63.47％、B2 36.53％.两组CETP基因TAQIB位点的3种基因型及等位基因频率的分布无明显差异(P＞0.05)；长寿组CH、HDL、LDL水平显著高于对照组(P＜0.05)；长寿组基因型为B2B2和B1B2的HDL水平均明显高于基因型为B1B1者,长寿组B1B1携带者的HDL水平及各种基因型的LDL水平显著高于对照组,而各基因型的TG水平则明显低于对照组(P均＜0.05).结论 CETPTaqIB的基因多态性与血脂水平关系密切,可能是红水河地区长寿的分子遗传学基础之一.

胆固醇酯转移蛋白与氟伐他汀降脂疗效的关系

目的:研究胆固醇酯转移蛋白(CETP)基因单核苷酸多态性(SNPs)与氟伐他汀调脂疗效的关系.方法:选取中国上海汉族人群中血脂异常患者121例,男49例,女72例,平均年龄(61.13±11.05)岁.在饮食控制4周后,予氟伐他汀40 mg/d,共随访8周.采用聚合酶链式反应扩增DNA后,以四色荧光法标记的双脱氧终止法对CETP基因外显子及其上下游100～200 bp区域进行测序,用以发现SNP位点并进行基因分型,研究其与氟伐他汀调脂疗效的关系.结果:(1)CETP基因共检出SNP位点10个,其中包括3个新的SNP:①位于第7内含子区的新发现的SNP1,序列为CTGGTGAGTG[C/T]GTTTCTGTCT;②位于第9内含子区的新的SNP2,与rs11076176是紧密连锁,序列为GCTGCTAGGG[A/G]ATCCAGATGG;③位于第12内含子区发现新的SNP3:序列为ATTATCCATCG[C/T]TTTTTTATTT.NCBI dbSNP未见报道.(2)CETP基因多态性与调脂疗效:①SNP1:治疗后TT基因型个体HDL-C水平升高,而CC+CT基因型的个体的HDL-C水平反而降低,治疗前后HDL-C水平变化分别为(16.65±14.35)%和(-2.49±20.77)%,P<0.05; ②rs289741:GG基因型基础TC水平与AA+GA基因型的个体相比较低,分别为(5.93±0.82)mmol/L和(6.87±1.86)mmol/L,P<0.01.治疗后GG基因型个体HDL-C水平升高,而AA+GA基因型的个体的HDL-C水平反而降低,治疗前后HDL-C水平改变分别为(10.25±19.03)%和(-2.22±20.03)%,P<0.05.结论:CETP基因的SNP与氟伐他汀的调脂疗效相关.

胆囊结石家系胆固醇酯转移蛋白和二乙基对硝基磷脂酶基因与胆石发生及血脂连锁的关系

目的探讨胆固醇酯转移蛋白(CETP)基因和二乙基对硝基磷脂酶(PON1)基因位点与胆囊结石发生及血浆脂质水平的连锁关系。方法采用多聚酶链式反应(PCR)-限制性内切酶酶切技术，对15个胆囊结石家系同胞对基因组DNA的CETP和PON1基因型与胆囊结石发生及血脂进行连锁分析。结果各组有与无胆囊结石的CETP和PON1位点基因型差异无显著性，各组CETP和PON1位点与胆囊结石发生无连锁关系(P值均＞0.05)。CETP位点与血浆总胆汁酸(TBA)(P=0.0009)、甘油三脂(TG)(P=0.0142)、载脂蛋白(Apo)C3(P=0.0120)、ApoE(P=0.0127)、脂蛋白(α)［Lp(α)］(P=0.0111)连锁，其截距分别是45.73、2.39、7600、719.3、69143，斜率分别是-45.73、-2.37、-7600、-646.6。PON1和TBA(P=0.0279)与ApoE(P=0.0177)连锁，其截距分别是27.93、647.7，斜率分别是-27.93、-612.9。结论 CETP与PON1位点与胆囊结石发生无连锁。CETP位点影响血浆TBA、TG、ApoC3、ApoE和Lp(α)水平，PON1仅影响血浆TBA和ApoE水平。两位点均与血浆高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)ApoA1和ApoA2水平无关。

长寿人群CETP基因I405 V多态性与血脂和长寿相关性的研究

目的：探讨广西红水河流域长寿人群胆固醇酯转移蛋白（ CETP） I405V位点的多态性，并探讨其基因型与该地区血脂水平和长寿的关系。方法：应用PCR－RFLP方法对广西红水河流域长寿家系（HL）及非长寿家系（HNL）进行CETP I405V位点基因分型，并分析各基因型对血脂水平的影响。结果：（1） CETP I405V位点的基因型及等位基因频率在HL和HNL间未发现显著差异。但HNL组女性II、VV基因型频率高于男性， IV则低于男性。 HNL组BMI≥24 kg／m2亚组VV、II的频率高于＜24 kg／m2亚组，IV反之（P＜0．05）。（2）血脂水平在不同基因型间无显著差异。但HNL组男性II基因型的TC和LDL－C水平有高于IV、VV的趋势，而女性无此差异。结论：CETP I405 V的基因型及等位基因频率在长寿人群和自然人群间无显著差异，该多态对红水河流域居民的血脂和寿限的影响有限。

269 胆固醇酯转移蛋白基因突变导致HDL胆固醇浓度升高是白种女性缺血性心脏病的一个危险因子

胆囊结石患者胆固醇酯转移蛋白基因多态性研究

为揭示胆囊结石病与遗传因素的关系,运用聚合酶链反应技术(PCR)和基因限制性片段长度多态性分析法(RFLPs)对104例胆囊结石患者和68例健康人进行了研究.结果显示:胆囊结石组B1等位基因频率52.3%,B1B1基因型频率28.8%,大于对照组B1等位基因频率34.6%(P＜0.05),B1B1基因型频率11.76%(P＜0.05),胆囊结石组B2等位基因频率47.7%,B2B2基因型频率24.2%小于对照组B2等位基因频率65.4%(P＜0.05),B2B2基因型频率42.6%(P＜0.05).胆囊结石组H1等位基因频率20%,H1H1基因型频率5%,H2H2基因型频率65%,H2等位基因频率80%与对照组H1等位基因频率17.9%,H1H1基因型频率2%,H2H2基因型频率65.9%,H2等位基因频率82.1%比较无显著性差异(P＞0.05).提示:B1等位基因是胆囊结石患者主导基因.B2等位基因是对照组的主导基因.H1及H2等位基因频率在胆囊结石患者及对照组中分布相同,无显著性差异(P＞0.05).

胆固醇酯转移蛋白基因taqIB多态性与胆囊结石病关系的临床实验研究

目的:揭示胆囊结石病与遗传因素的关系.方法:运用多聚酶链反应技术(PCR)和基因限制性片段长度多态性分析法(RFLPs)对104例胆囊结石病人和68例健康人进行调查研究.结果:发现胆囊结石组B1等位基因,B1B1基因型,B2等位基因,B2B2基因型频率与对照组相应等位基因及基因型频率比较有差异(0.5230vs0.3460 0.2880vs0.1176 0.4770vs0.6540 0.2420vs0.4264 P＜0.01).B1B1基因型HDL-ch和HDL2-ch水平降低,与B2B2基因型的HDL-ch、HDL2-ch比较有差异(P＜0.01).结论:B1等位基因和B1B1基因型与低HDL-ch、HDL2-ch水平相关.B1等位基因是部分中国汉族人胆囊结石病人的遗传易感因素.