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肝豆灵对高铜负荷小鼠神经干细胞活性氧水平及核因子E2相关因子2表达的影响
目的 观察肝豆灵对高铜负荷小鼠神经干细胞内活性氧(ROS)水平及核因子E2相关因子2(Nrf2) mRNA 及蛋白表达的影响.方法 体外培养高铜负荷小鼠神经干细胞模型.实验小鼠随机分为空白对照组、模型组和肝豆灵低、中、高剂量组,各给药组给予相应浓度肝豆灵药物血清灌胃.采用MTT法检测神经干细胞增殖水平,流氏细胞仪检测细胞内ROS水平,qRT-PCR检测Nrf2基金表达,Western blot检测细胞内Nrf2蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组小鼠神经干细胞增殖率显著下降,ROS水平明显升高,Nrf2基因、蛋白表达明显降低(P＜0.01);与模型组比较,肝豆灵各剂量组小鼠神经干细胞增殖率显著升高,ROS水平明显降低,Nrf2基因、蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 肝豆灵通过降低高铜负荷小鼠ROS含量、上调Nrf2的表达,从而促进小鼠神经干细胞的增殖.
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肝豆灵对铜负荷大鼠肝纤维化血清代谢组学的影响
目的 探讨肝豆灵治疗肝豆状核变性(WD)肝纤维化的可能作用机制.方法 75只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、肝豆灵组、肝豆灵加青霉胺组、青霉胺组,每组15只.除空白对照组外,其余各组复制铜负荷大鼠模型共12周,从第7周开始肝豆灵组给予肝豆灵0.486g/(kg·d),青霉胺组给予青霉胺0.09g/(kg·d),肝豆灵加青霉胺组给予以肝豆灵和青霉胺联合灌胃,剂量同上.各组均每日灌胃1次,共6周.第13周实验结束后,各组大鼠留取血清标本,运用代谢组学技术检测各组肝纤维化小分子代谢标志物的变化.结果 肝豆灵能明显提高铜负荷大鼠血浆亮氨酸、异亮氨酸、胆碱、葡萄糖、3-羟基丁酸的含量,能降低糖蛋白、脂质、乳酸盐、丙酮酸盐的含量.结论 肝豆灵对铜负荷大鼠小分子代谢物有明显的调节效应,对代谢异常的修复作用可能是治疗WD肝纤维化的作用机理之一.
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肝豆灵干预铜负荷大鼠认知障碍及海马细胞凋亡的研究
目的：观察肝豆灵（ GDL）干预铜负荷大鼠认知障碍及海马细胞凋亡的研究。方法 Wistar大鼠按照体重随机分为正常组、模型组、对照组和3个剂量实验组，复制铜负荷大鼠模型后，实验组给予 GDL 0．48，0．96，1．92 g? kg－1? d－1，对照组给予青霉胺0．09 g? kg－1? d－1，每日1次灌胃；正常组及模型组给予等量生理盐水，共6周。 Morris水迷宫测试大鼠空间学习及记忆能力，观察海马病理改变和原位末端标记（ TUNEL）法检测海马神经元凋亡。结果对照组和GDL各组能显著减少模型大鼠的平均逃避潜伏期（ P＜0．01）；高剂量GDL组和对照组能明显增加模型大鼠跨越原平台位置次数（ P＜0．01），而低中2个剂量GDL组无明显增加（ P＞0．05）；高剂量GDL组和对照组均极显著缩短模型大鼠的游泳总距离（P＜0．01），低中2个剂量GDL组也有较明显缩短（P＜0．05）。 GDL各组与对照组的凋亡细胞较模型组明显减少（P ＜0．01）。结论铜负荷大鼠模型的认知功能下降，GDL有改善其认知功能的作用。
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肝豆灵干预Wilson病模型大鼠NMR代谢组学研究
目的:以基于核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance,NMR)的代谢组学方法对肝豆灵干预Wilson 病(Wilson's disease,WD)模型大鼠进行研究,分析肝豆灵干预后,WD模型大鼠尿液中代谢物的变化,从小分子层面探讨肝豆灵对WD的治疗作用机制.方法:42只雄性Wistar大鼠,体重(180±20)g,随机被分为健康对照组(n=14)、模型组(n=14)和肝豆灵组(n=14).采用铜负荷法制作Wilson病大鼠模型,以NMR技术对大鼠尿液进行检测,经MestRe-C 2.3软件及自编软件对谱图进行手动调相、基线校正和谱峰对齐.对样品进行分段积分,将积分数据归一化后构成数据矩阵,并利用PCA方法对数据矩阵进行统计分析.结果:相对于模型组,肝豆灵组大鼠尿液色氨酸(tryptophan)、马尿酸盐(hippurate)、苯基丙氨酸(phenylalanine)、甘氨酸(glycine)、苯乙酰甘氨酸(PAG)含量有显著升高;乳酸(lactate)、甜菜碱(TMAO/betaine)、甲酸盐(formate)、二甲基甘氨酸(DMG)含量有所升高;柠檬酸盐(citrate)、肌氨酸酐(creatinine)、谷氨酰胺(glutamine)含量显著降低;丙酮酸盐(pyruvate)甲基胍(methylguanidine)、丙酮(acetone)、牛磺酸(taurine)含量有所降低.这些发生改变的代谢物可为进一步研究肝豆灵干预WD的作用机制提供参考.
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肝豆灵药物血清对体外高铜培养小鼠海马神经干细胞增殖的影响
[目的]建立铜负荷的海马神经干细胞培养模型，以海马神经干细胞增殖为切入点，研究化痰祛瘀药物肝豆灵对神经再生的影响。[方法]实验分为3组：正常对照组、铜负荷模型组、铜负荷模型加肝豆灵药物血清组。神经干细胞培养液中添加200μmol·L-1铜离子的方法建立铜负荷模型，5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)掺入法结合免疫荧光观察新增殖的BrdU阳性细胞数，甲基噻唑基四唑比色（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）实验检测相对细胞总数，并行统计学比较。[结果]高铜负荷可抑制体外培养神经干细胞内BrdU阳性细胞数，降低神经干细胞总数。而肝豆灵药物血清处理则可明显提高铜负荷组BrdU阳性细胞数，增加细胞数目。[结论]铜负荷可抑制海马神经干细胞增殖，化痰祛瘀方肝豆灵可以促进铜负荷培养小鼠海马神经干细胞增殖。
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肝豆灵联合驱铜治疗对肝豆状核变性肝纤维化疗效及其血清学指标的影响
目的:探讨肝豆灵和DMPS联合驱铜治疗对肝豆状核变性肝纤维化疗效及其血清学指标的影响.方法:将84例肝豆状核变性患者随机分为肝豆灵组48例(DMPS驱铜治疗加肝豆灵治疗)和对照组36例(单纯DMPS驱铜治疗),疗程54d,分别观察肝纤维化的中西医疗效、肝功能及其血清学指标的治疗前后变化,并做2组间比较.结果:肝豆灵组中西医治疗肝纤维化有效率56.25%,对照组有效率44.44%,2组比较差异有显著性意义(P＜0.05)；肝豆灵组治疗组的肝功能指标改善,其中ALT、AST、TBIL治疗前后的差异有显著性(P＜0.05),而ALB则无显著性差异(P＞0.05)；对照组的肝功能虽有改善,但其无统计学意义(P＞0.05).在肝纤维化血清学指标方面,肝豆灵组的HA、PⅢNP有明显下降(P＜0.05),而C-Ⅳ、LN水平无显著变化(P＞0.05).结论:肝豆灵具有良好的抗肝纤维化作用,但主要对反映肝纤维化炎症和活动性的指标HA和PⅢNP作用较好,但此结论可能与疗程较短有关.
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肝豆灵对铜负荷大鼠肝细胞Bax、 Bcl-2表达的影响
目的:观测肝豆灵对铜负荷大鼠肝细胞Bax和Bcl-2表达的影响,分析该方对铜负荷大鼠肝损伤的治疗作用机制.方法:采用铜负荷法制作大鼠模型,造模和药物干预结束后,以免疫组化技术测大鼠肝细胞Bax和Bcl-2表达.结果:与对照组相比,模型组肝细胞Bax和Bcl-2表达升高(P＜0.05).与模型组相比,肝豆灵组肝细胞Bax表达降低(P＜0.05),Bcl-2表达升高(P＜0.05).结论:肝豆灵对铜负荷大鼠肝损伤具有一定的干预作用,机制可能与下调Bax,上调Bcl-2的表达有关.
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肝豆灵对Wilson病模型小鼠海马神经再生的影响
目的:观察具有化痰祛瘀功效的肝豆灵对Wilson病模型小鼠海马齿状回区神经细胞的增殖、分化和存活的影响.方法:将Wilson病模型小鼠分为空白组、模型对照组、二巯丁二酸组、肝豆灵组、肝豆灵+二巯丁二酸组,每组20只,运用BrdU掺人法、免疫组织化学观察肝豆灵对Wilson病模型小鼠海马神经细胞增殖、分化和存活的影响.结果:模型组小鼠下丘脑海马齿状回新增殖的细胞数相对于空白组明显增加(P＜0.001),肝豆灵和二巯丁二酸均不能促进Wilson病模型小鼠神经细胞新生(P＞0.05).但肝豆灵和二巯丁二酸可以明显提高新生细胞的存活率(P＜0.001),并促进新生细胞向神经元分化(P＜0.001).肝豆灵组与二巯丁二酸组促进新生细胞存活和向神经元分化的作用无明显差异(P＞0.05),但肝豆灵+二巯丁二酸疗效优于单用肝豆灵和二巯丁二酸(P＜0.05或P＜0.01).结论:肝豆灵化痰祛瘀法可促进Wilson病模型小鼠新生神经细胞的存活和向神经元分化,效果优于二巯丁二酸,二者合用疗效更佳.
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肝豆灵对肝豆状核变性门脉血流动力学的影响
目的:研究肝豆灵联合DMPS治疗肝豆状核变性患者门脉血流动力学指标PVFV、SVFV的影响.方法:41例患者随机分为2组:DMPS组(A组)、肝豆灵组(B组),A组予以二巯基丙磺酸钠治疗,B组予以二巯基丙磺酸钠联合肝豆灵治疗,分别观察治疗前后门脉血流动力学指标PVFV、SVFV及肝功能部分指标,24h尿排铜,药物常见不良反应等方面的变化情况.结果:治疗后PVFV水平均显著下降,以B组下降为明显(P＜0.01),SVFV水平2组下降均明显(P＜0.01)；治疗后2组24h尿铜量均有显著增加(P＜0.01),且B组＞A组；2组不良反应发生率分别为40％,30％.结论:肝豆灵联合DMPS治疗能较好改善HLD患者门脉血流动力学异常,增加24h尿排铜量,不良反应较少,相对安全.
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多烯磷脂酰胆碱联合肝豆灵片治疗肝型肝豆状核变性32例
目的:探讨治疗肝型肝豆状核变性的有效方法.方法:采用多烯磷脂酰胆碱联合中成药肝豆灵片治疗肝豆状核变性32例,6d1个疗程,治疗9～10个疗程统计疗效.结果:32例显效率34.38％,有效率50.00％,无效率15.62％,无死亡病例.且治疗后ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL治疗后均较治疗前有明显的好转(P＜0.05或P＜0.01).结论:多烯磷脂酰胆碱联合肝豆灵治疗肝型肝豆状核变性疗效显著.
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肝豆灵对肝豆状核变性患者血清炎症因子水平的影响
目的:探讨中西医结合治疗对肝豆状核变性患者血清炎症因子水平的影响.方法:61例WD患者随机分为2组,WD组29例,健康对照组32例,均给予规定的低铜饮食,均予二巯基丙磺酸钠(DMPS),按照20mg/kg·d的标准加入5％葡萄糖500mL中,每天1次,6d为1个疗程;每个疗程休息2d;共计6个疗程.健康对照组同时加用肝豆灵片,每次6～8片,每天3次;共计6个疗程.分别观察治疗前后WD患者血清IL-6、TNF-α水平、药物不良反应的变化情况及临床疗效.结果:治疗后WD组、健康对照组有效率分别为69.0％、93.7％,健康对照组优于WD组(P＜0.05);2组治疗后IL-6、TNF-α水平均下降(P＜0.05或P＜0.01),且健康对照组IL-6、TNF-α水平与WD组有显著差异性(P＜0.05).WD组、健康对照组不良反应发生率分别为34.5％、和15.6％.结论:WD患者血清炎症因子IL-6、TNF-α水平异常升高;WD患者在铜代谢异常同时存在炎症反应,WD患者的组织损害与炎症反应的参与有一定的关系.肝豆灵片具有下调WD患者体内异常增高的炎因症因子水平的作用.
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肝豆灵对Wilson病患者前瞻性记忆功能的影响
目的 观察肝豆灵对Wilson病(Wilson's disease,WD)患者前瞻性记忆功能的影响.方法 将WD患者随机分为治疗组(肝豆灵加二巯丙磺酸钠治疗)33例和对照组(二巯丙磺酸钠治疗)31例,两组患者年龄、文化程度、MMSE评分、病程相匹配.治疗前、治疗12周后,分别对两组患者基于时间的前瞻记忆(timebased prospective memory,TBPM)和基于事件的前瞻记忆(event-based prospective memory,EBPM)进行评估.结果 与治疗前比较,两组患者治疗后TBPM评分均显著增加(P＜0.05),治疗组TBPM评分差值显著高于对照组(P＜0.05);两组患者治疗前后EBPM评分(均大于7分)比较,差异无统计学意义(P＞0.05),两组EBPM评分差值比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肝豆灵可以改善WD患者前瞻性记忆功能.
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中药肝豆灵对肝豆状核变性患者尿微量蛋白的影响
目的 观察肝豆灵对肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration,HLD)患者早期肾脏损害的干预作用.方法 将70例HLD患者随机分成治疗组(n＝35)和对照组(n＝35),对照组接受常规保肝排铜治疗,治疗组加用中药肝豆灵口服,连续治疗4周.治疗前后分别观察两组尿免疫球蛋白G(urinary immunoglobulin G,UIgG)、尿转铁蛋白(urinary transferrin,UTRF)、尿微量白蛋白(microalbuminuria,MAU)、尿α1微球蛋白(urinary alpha 1 microglobulin,Uα1 M)、尿β2微球蛋白(urinary beta 2 microglobulin,Uβ2M)的变化.结果 治疗后治疗组UTRF、MAU、Uα1M和Uβ2M均较治疗前显著降低(P＜0.05,或P＜0.01),而对照组仅UTRF、Uα1M和Uβ2M显著降低(P＜0.05,或P＜0.01).治疗后治疗组Uα1M下降程度显著大于对照组(P＜0.05).讨论 肝豆灵对HLD患者肾脏早期损害有一定干预作用.
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肝豆灵抑制Notch信号通路干预铜负荷致肝纤维化大鼠肝脏上皮-间质转化
目的 探讨肝豆灵抑制Notch信号通路干预铜负荷大鼠肝纤维化上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用机制.方法 将雄性SD大鼠40只随机分为正常组,模型组,肝豆灵小、中、大剂量组,除正常组给予正常饲料外,其他各组喂饲硫酸铜饮食复制铜负荷大鼠肝纤维化模型.检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)水平及肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量;分别采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察肝组织病理损伤及胶原沉积状况;采用RT-PCR检测肝组织转化生长因子-β1 (transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、Jagged1、Notch1、Notch3、Snail mRNA,采用Western blot检测Hes1、E-cadherin蛋白表达水平,采用免疫组织化学法检测α-SMA表达水平.结果 与正常组比较,模型组血清ALT、AST、ALP、HA水平及肝组织Hyp、胶原纤维含量均显著升高(P＜0.05),肝组织TGF-β1、Jagged1、Notch1、Notch3、Snail mRNA表达水平以及肝组织Hes1、α-SMA蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);与模型组比较,肝豆灵中、大剂量组E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),其余上述指标均显著降低(P＜0.05).结论 肝豆灵通过抑制Notch信号通路,干预EMT环节,减少肌成纤维细胞转化生成及活化增殖,降低胶原纤维沉积而抗肝纤维化.
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肝豆灵对铜负荷致肝损伤大鼠肝脏代谢产物的影响
目的 从代谢组学角度探讨肝豆灵对铜负荷大鼠肝损伤的干预机制.方法 将21只大鼠随机分为正常组、模型组和肝豆灵组,每组7只.正常组大鼠接受普通饲料喂养,其余两组大鼠均接受高铜饲料喂养以复制铜负荷模型,共计12周.从第7周开始,肝豆灵组以肝豆灵灌胃,正常组和模型组予以等容量生理盐水灌胃,直至模型复制结束.以超高效液相色谱/四级杆-飞行时间质谱技术,结合主成分分析和偏小二乘判别分析方法分析大鼠肝组织代谢物的变化.结果 模型组中溶血磷脂酰胆碱、油酸酰胺含量降低,色氨酸、苯丙氨酸、硬脂酰胺、牛磺酸鹅脱氧胆酸、甘氨胆酸、牛磺胆酸含量升高.肝豆灵组溶血磷脂酰胆碱、油酸酰胺含量升高,色氨酸、苯丙氨酸、硬脂酰胺、牛磺酸鹅脱氧胆酸、甘氨胆酸、牛磺胆酸的含量降低.结论 肝豆灵对铜负荷大鼠肝损伤具有一定的干预作用,其机制可能与调节胆汁酸代谢、氨基酸代谢、脂代谢途径有关.
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肝豆灵对Wilson病模型大鼠肝组织miRNA-122表达的影响
目的 研究肝豆灵对Wilson病(Wilson's disease,WD)大鼠肝组织miRNA-122表达的影响,探究其保护肝脏的机制.方法 将24只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、青霉胺组和肝豆灵组.铜负荷喂养8周后,分别用青霉胺、肝豆灵以成人等效剂量灌胃,空白对照组及模型组均以等量生理盐水灌胃,每组均灌胃4周.观察各组大鼠肝功能及肝组织miRNA-122的表达水平.结果 肝豆灵和青霉胺均可显著降低WD大鼠异常升高的血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBil)(P＜0.05,或P＜0.01),显著升高WD大鼠肝组织异常降低的miRNA-122表达水平(P＜0.01).肝豆灵降低血清ALT、AST和TBil的作用及升高肝组织miRNA 122表达的作用显著优于青霉胺(P＜0.05,或P＜0.01).结论 肝豆灵保护WD大鼠肝功能的作用与其上调肝组织miRNA-122的表达有关.
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肝豆灵对铜负荷肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的影响
目的 观察肝豆灵对铜负荷肝纤维化大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡的影响,探讨肝豆灵防治Wilson病肝纤维化的作用机制.方法 将75只大鼠分成空白组、模型组、肝豆灵组、青霉胺组及肝豆灵十青霉胺组,采用喂食硫酸铜饮食复制铜负荷大鼠模型,采用TUNEL法检测HSC的凋亡.结果 模型组可见大量HSC增生;与模型组比较,各治疗组HSC数量显著降低(P＜0.01),HSC凋亡指数显著升高(P＜0.01);肝豆灵十青霉胺组AI显著高于肝豆灵组和青霉胺组(P＜0.01).讨论 肝豆灵可促进铜负荷大鼠HSC的凋亡,其与青霉胺联合用药的作用更显著.
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肝豆灵对肝豆状核变性TX小鼠ERK信号通路及空间学习记忆的影响
目的 观察化痰祛瘀方肝豆灵对肝豆状核变性TX模型小鼠学习记忆及ERK信号调节通路的影响.方法 将小鼠分为正常对照组、模型组、二巯丁二酸组、肝豆灵组、肝豆灵+二巯丁二酸组,每组20只,选用具有化痰祛瘀功效的肝豆灵片,运用免疫印迹法和Morris水迷宫实验观察肝豆灵对肝豆状核变性模型小鼠学习记忆及细胞外信号调节激酶(extra-cellular-signal-responsive kinase,ERK)信号通路的影响.结果 与模型对照组比较,化痰祛瘀方肝豆灵能促进肝豆状核变性病模型小鼠ERK1/2磷酸化水平(P＜0.001),缩短找到水下平台的潜伏期(P＜0.05),延长在水下平台的停留时间(P＜0.05),肝豆灵+二巯丁二酸效果优于单用肝豆灵(P＜0.01、0.001).结论 化痰祛瘀方肝豆灵可能通过促进肝豆状核变性模型小鼠鼠ERK1/2磷酸化水平而改善空间记忆功能.
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聚类分析在中药复方研究中的应用
目的:研究中药药性量化方法和中药复方的配伍规律.方法:设计中药药性的性、味、归经、功能主治的量化方法,运用K-means模糊聚类方法对肝豆灵验方进行分析.结果:基于此模糊聚类方法对肝豆灵配伍规律分析与传统中医理论基本一致.结论:聚类分析对中药复方的配伍关系的研究提供了新的可靠途径.
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肝豆灵干预铜负荷大鼠肾损伤的代谢组学研究
目的 分析肝豆灵对铜负荷大鼠肾损伤的代谢组学影响,探讨肝豆灵的肾脏排铜机制.方法 实验大鼠被随机分为正常组、模型组和肝豆灵组.造模结束后,以TUNEL法测肾小管上皮细胞凋亡,核磁共振技术结合偏小二乘判别分析法分析大鼠肾组织小分子代谢物.结果 与正常组比较,模型组肾小管上皮细胞凋亡指数升高(P＜0.01);苯丙氨酸、丙氨酸、酪氨酸、谷氨酸、赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸、肌苷、天冬氨酸含量降低.与模型组相比,肝豆灵组肾小管上皮细胞凋亡指数降低(P＜0.01);苯丙氨酸、丙氨酸、酪氨酸、谷氨酸、赖氨酸、缬氨酸、亮氨酸、肌苷、天冬氨酸含量升高.结论 肝豆灵对铜负荷大鼠肾损伤具有一定的干预作用,其机制可能涉及对芳香族氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸)、支链氨基酸(亮氨酸、缬氨酸)的调节;抑制肾小管上皮细胞凋亡、调节肾脏氨的代谢.
