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肝豆灵药物血清对体外高铜培养小鼠海马神经干细胞增殖的影响
[目的]建立铜负荷的海马神经干细胞培养模型，以海马神经干细胞增殖为切入点，研究化痰祛瘀药物肝豆灵对神经再生的影响。[方法]实验分为3组：正常对照组、铜负荷模型组、铜负荷模型加肝豆灵药物血清组。神经干细胞培养液中添加200μmol·L-1铜离子的方法建立铜负荷模型，5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)掺入法结合免疫荧光观察新增殖的BrdU阳性细胞数，甲基噻唑基四唑比色（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）实验检测相对细胞总数，并行统计学比较。[结果]高铜负荷可抑制体外培养神经干细胞内BrdU阳性细胞数，降低神经干细胞总数。而肝豆灵药物血清处理则可明显提高铜负荷组BrdU阳性细胞数，增加细胞数目。[结论]铜负荷可抑制海马神经干细胞增殖，化痰祛瘀方肝豆灵可以促进铜负荷培养小鼠海马神经干细胞增殖。
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高铜对于肝细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响
目的 研究高铜对于Wnt/β-catenin信号通路及氧化应激的影响.方法 不同剂量的CuSO4培养BRL-3A细胞;用MTT法检测不同剂量CuSO4作用不同时间点对BRL-3A细胞生长和增殖的影响;用流式细胞仪检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化;用酶标仪检测丙二醛的含量和超氧化物歧化酶的活性;Western Blot法检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达情况.结果 ①MTT实验结果显示CuSO4在一定时间和浓度下对BRL-3A细胞生长和增殖有明显抑制作用(P<0.01);②流式细胞仪检测实验结果显示CuSO4可诱导BRL-3A细胞内产生大量的活性氧和显著降低线粒体膜电位(P<0.01);③酶标仪检测实验结果显示CuSO4可诱导MDA含量上升和SOD活性降低(P<0.05); ④Western Blot法检测实验结果显示CuSO4可显著降低BRL-3A细胞内总蛋白β-catenin、p-Ser 9-GSK-3β的表达(P<0.01),增加细胞内总蛋白GSK-3β、DKK1、Dishevelled3的表达,以及降低细胞核内蛋白p-(S33+S37)-β-catenin、c-Myc的表达(P<0.01). 结论 高铜能诱导肝细胞内线粒体氧化应激并且引起Wnt/β-catenin信号通路失活,从而诱导肝细胞损伤的发生.
关键词： Wilson病 Wnt/β-catenin信号通路 高铜 氧化应激 肝细胞损伤
