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临床分离志贺菌中产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因型及耐药性分析
目的 了解北京地区临床分离志贺菌携带CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因型及耐药特征.方法 收集2008-2011年本地区分离出的志贺菌83株,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M型ESBLs耐药基因,明确基因型,阳性产物序列在GenBank上进行比对确定基因亚型,并通过DNAman软件对核酸序列进行分析；对携带CTX-M型ESBLs耐药基因菌株按照Kirby-Bauer法进行药物敏感性试验,测定志贺菌对8种头孢类抗生素耐药情况.结果 83株志贺菌中,13株携带CTX-M型ESBLs基因,阳性率为15.66％.对DNA序列进行比对、分析均为CTX-M-9型中的CTX-M-14亚型,未发现单核苷酸多态性(SNPs)位点.药敏结果显示,13株携带CTX-M型ESBLs基因菌株对头孢噻吩、头孢唑林、头孢噻肟等头孢类抗生素耐药,对头孢西丁、头孢他啶、头孢吡肟和头孢哌酮等头孢类抗生素均敏感,部分菌株对氨曲南耐药.结论 本地区志贺菌中CTX-M型ESBLs以CTX-M-14亚型为主,基因结构稳定,携带CTX-M-14型ESBLs菌株呈多重耐药.
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广州地区大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶基因分型的研究
目的 对肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌(ECO)CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株进行耐药基因分型,从而调查广州地区目前临床分离菌对抗菌药物的耐药性.方法 收集广州地区9所医院临床分离所获产ESBLs肺炎克雷伯菌(KPN)和ECO CTX-M型菌株,应用纸片扩散筛选法和纸片扩散确证法对菌株进行确认,然后用PCR方法对ESBLs进行基因分型.结果 92株产ESBLs ECO,对氨苄西林、哌拉西林和头孢呋辛均高度耐药,耐药率分别为97.5%、89.5%和89.5%;42株产ESBLs KPN对氨苄西林(100.0%)和哌拉西林(100.0%)也呈高度耐药;PCR及测序结果显示,CTX-M-1群阳性株包括ECO 7株、KPN 9株,阳性率分别为7.6%和21.4%,基因型分布在ECO为CTX-M-3、CTX-M-15和CTX-M-55型,而在KPN为CTX-M-3和CTX-M-15型.结论 广州地区9所医院临床分离的134株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,对青霉素类和头孢菌素类抗菌药物的耐药率均达到很高水平,并且在广州地区首次分离获得CTX-M-55型耐药菌株.
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运用变性高效液相色谱快速检测CTX-M超广谱β内酰胺酶基因型
目的 应用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对确认产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株CTX-M型质粒酶进行基因分型,探讨其灵敏度和特异度,以建立快速检测CTX-M型ESBLs的新方法.方法 采用PCR技术从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出CTX-M型质粒的编码序列,用DHPLC技术对扩增产物进行分析和DNA测序,确定其基因突变的类型,通过比对两者结果后确定其基因型.结果 从34株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出35份CTX-M型ESBLs编码序列(其中1株同时扩增到2份CTX-M型编码序列).11份与标准菌株CTX-M-3一致;4份与标准菌株CTX-M-9一致;测序确定分别为CTX-M-3型和CTX-M-9型;20份表现为3种形态各异的异常洗脱峰,测序结果表明20份样本与其标准株对比均存在着基因突变,DHPLC中异常峰一致的样本均为同一基因亚型.结论 DHPLC可用于ESBLs基因分型的检测,能快速检测CTX-M的基因型,具有准确性高、简便快捷、经济等特点,有很大的临床应用价值.
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产CTX-M型ESBL肠杆菌科细菌所致的尿路感染门诊病例的口服与胃肠外给药选择
从20世纪90年代初开始,产CTX-M 型ESBLs肠杆菌科细菌成为社区尿路感染的重要病因,而门诊经验性治疗中存在病原菌对氟喹诺酮类药物、复方磺胺甲口 恶唑、口服头孢菌素类、阿莫西林-克拉维酸等耐药的问题.本研究通过考察不同抗菌药对产ESBLs菌株的抗菌作用以期为门诊尿路感染患者提供有效的抗菌药物选择.
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临床产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析及耐药基因和I类整合子的检测
目的 了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性及相关耐药基因之间的关系.方法 采用K-B琼脂扩散法检测临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用PCR技术检测相关耐药基因和I类整合子并用DNA序列分析确认其所产生基因型.结果 检测菌株中ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%.所有检测菌株对亚胺培南全部敏感;56株ESBLs阳性的菌株有44株扩增到TEM基因(78.6%),SHV型阳性的有2株(3.6%),CTX-M型阳性的有48株(85.7%),OXA型阳性的有1株(1.79%),intI1阳性菌株有35株(62.5%),占未检出PER和VEB型.结论 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs细菌有效的药物;TEM型和CTX-M型ESBLs为我院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要基因型,携带I类整合子基因是导致细菌产ESBLs的重要原因.
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CTX-M型阴沟肠杆菌的基因克隆及原核表达产物特性研究
目的 对阴沟肠杆菌所产CTX-M型β-内酰胺酶进行基因克隆、原核表达重组质粒的构建及其特性研究.方法 以产CTX-M型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌45号基因组DNA为模板,设计两对引物PCR扩增CTX-M,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列.再将CTX-M基因克隆到pGEX-6P-3表达质粒并转入感受态BL21,选择阳性菌落进行药物敏感试验和酶动力学检测.结果 PCR扩增出大小为876 bp和1 067 bp的基因片段,与GenBank上CTX-M-9和CTX-M-3酶的基因序列同源性为100%.CTX-M-3型重组菌株药敏试验结果 与原菌株相比,对青霉素类和头孢噻肟具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致.结论 重组质粒pGEX-6P-3/CTX-M构建成功,CTX-M-3型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性增加,亲和力下降.
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产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌分布与耐药性分析
目的:了解我院产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的分布和耐药性,为临床合理选用抗生素提供依据.方法:根据ESBLs已知基因序列设计CTX-M通用引物,对36株临床分离产ESBLs大肠埃希菌进行PCR扩增.采用琼脂平皿稀释法进行低抑菌浓度(MIC)测定.结果:31株大肠埃希菌产CTX-M酶,占产ESBLs菌株的86%.CTX-M-1组13株阳性,CTX-M-9组24株阳性,其中6株二者共同阳性;CTX-M-2组、CTX-M-8组和CTX-M-25组均为0株阳性.产CTX-M酶大肠埃希菌对碳青霉烯类和哌拉西林/他唑巴坦普遍敏感,对哌拉西林和喹诺酮类完全耐药,对头孢曲松和头孢噻肟MIC结果显示耐药明显,对其他三代、四代头孢菌素及头孢西丁耐药率介于45.16%～64.52%之间.结论:我院大部分产ESBLs大肠埃希菌产CTX-M酶,产CTX-M酶大肠埃希菌对头孢曲松和头孢噻肟耐药明显.
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青海地区产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌CTX-M基因型及耐药性研究
目的:了解青海地区医院分离产超广谱β—内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的CTX-M基因型及耐药性.方法:采用美国临床与实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)推荐的表型确证实验,收集产ESBLs大肠埃希菌(173株),提取质粒DNA;分别用CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9扩增引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增,扩增产物测序后在Genbank数据库进行比对确定基因型.结果:173株产ESBLs大肠埃希菌中检出100株携带CTX-M型基因,共有8种CTX-M基因亚型:CTX-M-14、CTX-M-55、CTX-M-15、CTX-M-27、CTX-M-24、CTX-M-64、CTX-M-3、CTX-M-123.检出比例较高的是CTX-M-14型(34株)、CTX-M-55型(29株)和CTX-M-15型(15株),分别占总检测菌株数的19.65％、16.76％和8.67％.其中4株同时携带两种CTX-M型亚型基因.所有实验菌株药敏结果对亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢替坦、呋喃妥因耐药率较低,头孢曲松的耐药率高.本地区流行的CTX-M-14型、CTX-M-55型、CTX-M-15型三组菌株对于环丙沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他定、头孢吡肟、氨曲南的耐药率差异有统计学意义(P＜0.05).结论:①青海地区产ESBLs大肠埃希菌携带CTX-M基因比例高,CTX-M基因亚型种类多;②CTX-M-14型、CTX-M-55型和CTX-M-15型是青海地区产ESBLs大肠埃希菌主要流行的CTX-M基因亚型;③本地存在同时携带两种CTX-M亚型基株菌;④本地临床治疗产ES-BLs大肠埃希菌引起的感染时可首选亚胺培南、阿米卡星、呋喃妥因、哌拉西林/他唑巴坦、头孢替坦;⑤CTX-M-14型、CTX-M-55型和CTX-M—15型对于环丙沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他定、头孢吡肟、氨曲南的耐药率具有统计学差异.
