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基于网络药理学预测二妙丸“一方多效”的分子机制
目的:基于网络药理学思路与方法,研究二妙丸中有效成分、靶点、通路之间的关系,预测其可能的“一方多效”药理机制.方法:依托中药分子机制的生物信息学分析工具服务器(BATMAN-TCM)对二妙丸进行成分-靶点的预测和筛选,借助检索相互作用的基因/蛋白质的搜索工具平台(STRING)构建靶蛋白互作网络,利用BiNGO和MCODE插件对靶基因进行基因本体(G0)生物过程富集和聚类分析,通过注释、可视化和集成发现的数据库(DAVID)平台对关键靶点京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路进行富集分析.结果:二妙丸活性成分作用于血清白蛋白(ALB),丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1),肿瘤坏死因子(TNF),前列腺素内环氧合酶2(PTGS2),5-羟色胺受体2A(HTR2A),腺苷脱氨酶(ADA),糖皮质激素受体(NR3C1)等37个关键靶点;参与炎症反应、神经传导、金属阳离子稳态平衡、氧化还原、脂质代谢、核苷酸代谢等GO生物过程;调控TNF,TRP通道炎症调控,FcεRI信号通路,Ⅱ型糖尿病,钙离子信号通路,5-羟色胺以及多种信号转导、肿瘤、细胞色素P450通路.结论:二妙丸除具有治疗痛风、关节炎、湿疹等炎症疾病外,还可能具有抗糖尿病周围神经病变、治疗神经系统、胃肠系统、心血管系统疾病的“一方多效”作用.
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二妙丸加味治疗糖尿病肌病42例
糖尿病肌病是糖尿病代谢异常造成肌力减退并使肌肉功能和结构发生异常而引发横纹肌功能障碍伴发的一系列临床表现.乏力与疲劳症状常早于或同时与"三多一少"出现,休息后也难以消除,糖尿病患者早期既有感觉,常易忽视.2000年2月～2002年7月,笔者采用二妙丸加味治疗糖尿病肌病42例,疗效满意,现报道如下.
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二妙丸合冰黄肤乐软膏治疗阴部湿疹39例疗效观察
阴部湿疹可分为阴囊湿疹中医叫肾囊风或绣球风、女阴湿疹和肛门周围湿疹三种[1],具有多形性皮疹及渗出倾向、伴剧烈瘙痒、易反复发作,顽固难治.我们用金钵二妙丸内服加外用冰黄肤乐软膏治疗阴部湿疹39例,取得满意疗效,总结如下.
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二妙丸联合氟芬那酸丁酯软膏治疗女性外阴湿疹35例
女性外阴部湿疹是较常见的皮肤病,多呈亚急性、慢性过程,瘙痒难忍,反复发作,顽固难治.我科于2010年12月-2011年11月采用二妙丸口服联合5％氟芬那酸丁酯软膏外用治疗女性外阴湿疹35例,并以单用5％氟芬那酸丁酯软膏外用为对照,比较两种方法疗效,现将观察结果总结如下.
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二妙丸与四妙丸的组方及临床合理应用
二妙丸(散)和四妙丸均以燥湿清热为主,用于湿热病症.二妙丸(散)用于湿热证湿重于热的各种病症,而四妙丸则是以二妙为底,主要治疗湿热痿痹症等.在药理作用方面,由于二妙丸具有明显的免疫抑制作用,对于某些以变态反应为诱因的疾病疗效颇佳;而四妙丸中因加味的牛膝、薏苡仁能增强免疫功能,故有明显的免疫调节作用,不宜用于以变态反应为主要病因的疾病.
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高效液相色谱法同时测定二妙丸中盐酸小檗碱和黄柏碱的含量
目的:建立用高效液相色谱法同时测定二妙丸中盐酸小檗碱和黄柏碱含量的方法.方法:色谱柱为Venusil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相为乙睛-0.05 mol· L-1磷酸二氢钾-三乙胺(用磷酸调pH =4)系统梯度洗脱；流速:1 mL· min -1；检测双波长:盐酸小檗碱为265 nm,黄柏碱为285 nm.结果:盐酸小檗碱的平均回收率为100.55％,RSD为2.76％(n=6),线性范围为1.623 ～81.17 μg·mL-1,r=1.000 0;黄柏碱的平均回收率为99.32％,RSD为0.67％(n=6),线性范围为4.930～49.30μg·mL-1,r=0.999 9.结论:该方法灵敏简便、准确可靠、重复性好,可用于二妙丸的质量控制.
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超高效液相色谱法双波长法同时测定二妙丸中5种成分的含量
目的 建立二妙丸中盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱、盐酸巴马汀、木兰花碱及苍术素等5种成分的含量测定方法.方法 采用超高效液相色谱法,色谱柱:Waters BEH(2.1 mm×1OOmm,1.7 μm),乙腈-0.1％磷酸(每100 mL加十二烷基硫酸钠0.1g)为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-,盐酸黄柏碱、木兰花碱、盐酸小檗碱、巴马汀检测波长为280 nm;苍术素检测波长为340 nm;柱温:30℃.结果 盐酸小檗碱、黄柏碱、巴马汀、木兰花碱及苍术素5种成分在一定范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系;精密度,稳定性,重现性等均符合方法学要求;平均回收率在96.8％ ～99.3％之间,RSD均小于2.8％.结论 建立的方法简便快捷,准确度高,重现性好,可为二妙丸的质量控制提供依据.
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高效液相色谱法测定二妙丸中盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量
目的建立同时测定二妙丸中盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的高效液相色谱方法.方法采用AgilentExtend C18色谱柱(4.6 mm×150mm,5μm),以水-乙腈(55:45,每100 mL中含磷酸二氢钾0.34 g,十二烷基硫酸钠0.17 g)为流动相,紫外检测波长345 nm,柱温35℃,流速1 mL·min-1.结果盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的理论塔板数分别为6 085,6 995和6 970.盐酸药根碱回归方程为Y=141 547X-7 456.9,r=0.999 1,线性范围6.1～122 ng;盐酸巴马汀回归方程为Y=93 047X+47 140,r=0.999 5,线性范围0.128～1.28μg;盐酸小檗碱回归方程为Y=86 106X+87 243,r=0.999 6,线性范围0.12～1.2μg.3组分的平均回收率分别为99.69%,100.23%和99.32%,RSD分别为3.97%,2.04%和2.25%(n=6).结论该法操作简单,可以同时测定盐酸药根碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量,精密度高,重复性好,检测快速,定量准确,可用于二妙丸的质量控制.
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二妙丸合红花清肝十三味丸治疗急性湿疹72例
1 资料与方法1.1 临床资料本组患者共143例,2008年2月～5月在中国中医科学院望京医院皮肤科门诊就诊,均符合急性湿疹诊断标准[1],年龄18～59岁,平均37.7岁.对二妙丸、红花清肝十三味丸、盐酸西替利嗪过敏;或合并严重内脏疾病;1个月内曾使用抗组织胺和皮质类固醇激素等治疗湿疹的药物者予以排除.将患者随机分为2组,治疗组72例,对照组71例.2组患者的性别、年龄、病程等资料差异均无显著性(P>0.05),具有可比性.
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二妙丸HPLC指纹图谱及UPLC-LTQ-Orbitrap成分分析
目的 建立二妙丸的HPLC指纹图谱质量评价方法,并对二妙丸中的化学成分进行UPLC-LTQ-Orbitrap定性分析.方法 指纹图谱采用HPLC法,色谱柱为Shiseido C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为330nm,以黄柏、苍术混合对照药材生成的色谱图为标准对照图谱,采用“中国药典委员会相似度评价软件(2012A)”对样品进行相似度评价;采用UPLC-LTQ-Orbitrap技术对二妙丸中化学成分进行定性分析,色谱柱为Thermo Scientific Syncronis C18柱(100 mm×2.1 mm,1.9 μtm),乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,经DAD检测器后采用LTQ-Orbitrap Elite质谱正离子模式采集,各成分的一级全扫描离子在离子阱内进行CID多级质谱、FT检测高分辨质谱数据分析.结果 所建立的指纹图谱有10个共有色谱峰,20批样品的相似度在0.869～0.992.通过对照品指认、文献比对以及高分辨质谱数据解析,鉴定了21个化学成分,分别为neo-chlorogenic acid、木兰箭毒碱、竹叶椒碱、木兰花碱、3-O-feruloylquinic acid、蝙蝠葛碱、demethyleneberberine、oxyberberine、非洲防己碱、药根碱、小檗红碱、巴马汀、小檗碱、丁香酸、咖啡酸、(E)-4-(3-hydroxyprop-1-en1yl)-2-methoxyphenol、白术内酯Ⅱ、acetosyringone、白术内酯Ⅰ、selina-4(14),7(11)-dien-8-one、苍术素.结论 建立的二妙丸HPLC指纹图谱专属性强,重现性好,结合液质联用技术的定性分析,可全面评价二妙丸的内在质量.
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苍术、黄柏及二妙丸超细微粉的生物药剂学的研究
目的 为了表征苍术、黄柏及二妙丸的超细微粉，了解其理化特性。方法 采用扫描电子显微镜、生物显微鉴别、粒径、松密度及比表面积测定等方法对中药普通粉和超细微粉进行了表征。结果 超细微粉颗粒大小均匀，90%小于20 μm，比表面提高60%～190%，松密度约为0.42 g/cm3，绝大多数细胞被破碎。结论 苍术、黄柏及二妙丸经超细微化后，粉末颗粒大小均匀，球性度及均质度明显改善；松密度及比表面显著提高，植物细胞破壁率高。
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二妙丸不同配伍比例对大鼠高尿酸血症的影响
[目的]研究二妙丸不同配伍比例对高尿酸血症大鼠尿酸的影响。[方法]采用酵母膏15 g/kg+腺嘌呤100 mg/kg+氧嗪酸钾300 mg/kg联合用药制备大鼠高尿酸血症模型。将100只雄性SD大鼠随机分为10组，分别是空白对照组、模型组、苍术∶黄柏1∶1组（简称苍黄1∶1组）、苍术∶黄柏1∶2组（苍黄1∶2组）、苍术∶黄柏2∶1组（苍黄2∶1组）、苍术∶黄柏1∶3组（苍黄1∶3组）、苍术∶黄柏3∶1组（苍黄3∶1组）、苍术∶黄柏1∶0组（苍黄1∶0组）、苍术：黄柏0∶1组（苍黄0∶1组）、阳性药组（别嘌呤醇15 mg/kg）。除空白对照组给予同体积生理盐水外，其他各组大鼠分别连续7 d给予酵母膏15 g/kg+腺嘌呤100 mg/kg灌胃造模，同时各比例组给予生药4.8 g/kg二妙丸，于后1 d灌胃1次氧嗪酸钾300 mg/kg 1次，1 h后取材，通过检测大鼠血清尿酸（BUA）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆固醇（T-CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）水平，观察大鼠尿液中尿肌酐（UCr）、尿尿素氮（UUN）、24 h尿量（24 h UV）、24 h尿酸排泄量（24 h UUA）水平，及肝肾质量和肝肾脏器系数，研究二妙丸不同配伍比例对大鼠高尿酸血症的影响。[结果]与模型组比较，二妙丸各比例治疗组及阳性药组大鼠的BUA、XOD（除苍黄3∶1、1∶0、0∶1组）、SCr、24 h UV（除苍黄0∶1组、阳性药组）、24 h UUA、T-CHO、TG（除阳性药组）、HDL-C、LDL-C、肝脏质量及肝脏脏器系数（除阳性药组）、肾脏质量和肾脏脏器系数水平显著降低（P＜0．05或P＜0．01）。与模型组比较，各治疗组均能显著提高大鼠UCr（除苍黄1∶0组）、UUN（除苍黄3∶1组）水平（P＜0．05或P＜0．01），而大鼠ALT（除苍黄1∶2组）、AST水平有升高趋势但并无显著性差异（P＞0．05）。[结论]综合以上指标，初步表明二妙丸不同配伍比例具有显著降低高尿酸血症大鼠BUA、XOD水平并促进肾脏尿酸排泄、改善肾功能、调节血脂水平的作用，其中苍黄1∶2组效果较为显著。
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中药二妙丸质量标准的研究
为更好的控制传统中药二妙丸的质量,提高二妙丸的质量标准,建立了二妙丸中苍术药材的薄层色谱鉴别,并使用高效液相色谱法测定了制剂中的盐酸小檗碱含量.采用硅胶G薄层板,以石油醚(60-90℃)-醋酯乙酯(20:1)为展开剂,建立了苍术药材的特征性色谱鉴别.采用反相高效液相色谱法,intersilODS-3C18柱(5μm,250×4.6mm),流动相为乙腈-磷酸二氢钠二氢钠-SDS(45:55:0.01);流速为1.0ml/min;检测波长为345nm;柱温30℃.供试品使用1%盐酸甲醇提取.经方法学验证,本方法具有良好的线性、精密度、稳定性、回收率.结果显示,该方法分离效果较好,分析快速方便,为二妙丸的质量控制提供了依据.
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"腰突方"外敷结合中药治疗腰椎间盘突出症90例
目的:观察"腰突方"外敷结合内服中药治疗腰椎间盘突出症的临床疗效.方法:将160例腰椎间盘突出症病例随机分为两组,治疗组90例采用"腰突方"外敷结合内服中药治疗,10 d为1个疗程,3个疗程后评价疗效;对照组70例用中药内服及牵引理疗治疗,疗程同治疗组.结果:治疗组治疗后总有效率为93.3%;对照组治疗后总有效率为88.6%;两组病例治疗后总有效率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:"腰突方"外敷结合内服中药治疗腰椎间盘突出症,优于中药内服及牵引理疗治疗.
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二妙丸加味治疗慢性湿疹40例
目的 探讨二妙丸加味治疗慢性湿疹的疗效.方法 全部40例慢性湿疹患者均采用二妙丸加味治疗.结果 痊愈18例(45％)、显效19例(47.5％)、有效3例,总有效率92.5％.结论 二妙丸加味治疗慢性湿疹疗效确切,值得临床推广应用.
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二妙丸对痛风症大鼠血清炎症介质的影响研究
目的:在二妙丸降低血尿酸抗痛风的作用基础上,探讨二妙丸对痛风症大鼠血清中炎症介质的影响.方法:采用乙胺丁醇和腺嘌呤造模法,开展二妙丸抗痛风的药理药效的研究.同时采用高效毛细管电泳法,对大鼠血清蛋白含量进行测定.结果:二妙丸具有降低血尿酸抗痛风的药效,并初步探究二妙丸治疗痛风的作用与血清蛋白含量有关.结论:通过研究二妙丸对痛风大鼠炎症介质的影响,为二妙丸抗痛风作用机制的研究提供科学依据.
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二妙丸中盐酸小檗碱在痛风大鼠体内药代动力学研究
目的:研究二妙丸中盐酸小檗碱在痛风大鼠体内药代动力学的参数,以探讨病理状态中盐酸小檗碱在痛风大鼠体内的变化规律.方法:以吴茱萸次碱为内标,采用HPLC法测定二妙丸在痛风大鼠体内的盐酸小檗碱含量,色谱柱Agilent C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(40∶60)(每100 mL含0.34 g磷酸二氢钾,含0.17 g十二烷基磺酸钠);流速:1.0 mL/min;检测波长:349 nm;柱温:30 ℃.结果:二妙丸中盐酸小檗碱在痛风大鼠血浆中的线性范围为1.5～48.0μg/mL,提取回收率较好,日内日间精密度的RSD均小于10％,其主要的药动学参数:Tmax(h)为1.500,Cmax(mg/L)为3.546,MRT 0～24(h)为9.078,MRT 0～∞(h)为57.639.结论:二妙丸中盐酸小檗碱在痛风大鼠体内的药代动力学呈二室模型分布.
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双波长融合HPLC测定二妙丸中盐酸小檗碱、苍术素含量
目的:采用全时段双波长融合法建立二妙丸中盐酸小檗碱、苍术素的含量测定方法,该方法可用于控制二妙丸的质量.方法:采用反相高效液相色谱法,Welch LP-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以0.8％醋酸水(A)-乙腈(B)流动相梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:265、340 nm;使用Matlab编程软件进行双波长融合.结果:双波长融合后,可同时测定二妙丸中盐酸小檗碱、苍术素的含量,其线性范围分别为1.02～10.2、0.244～1.952 mg/mL;平均加样回收率分别为98.68％(RSD=1.64％)、98.66％(RSD=1.8％).结论:该方法可为二妙丸的质量控制提供了更为简便、合理、可靠的方法.
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黄柏、苍术不同提取、配伍方法比较研究
目的:该实验研究黄柏和苍术的不同提取、配伍方法.方法:采用多组分加权分析法判断不同提取、配伍方法(即先配伍后提取的方法和先分别提取后合并的方法)的优劣.采用紫外分光光度法测定不同提取、配伍方法中黄柏的总生物碱的含量;采用HPLC法测定不同配伍方法中主要化学成分的含量.结果:黄柏和苍术采用先分提再合并的配伍方法较好,各评价指标均较高.结论:黄柏、苍术配伍建议采用先分别提取再合并的方法进行配伍.该方法可作为黄柏、苍术药对配伍研究的基础.
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二妙丸治疗痛风症大鼠作用机制研究
目的:在二妙丸降低血尿酸抗痛风作用的基础上,初步探讨二妙丸对痛风症大鼠血清中金属元素代谢的影响及变化规律.方法:采用乙胺丁醇和腺嘌呤造模法,开展二妙丸抗痛风的药理药效研究.并在此基础上采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对药理药效中的各组大鼠血清中金属元素含量进行聚类统计分析,找出具有差异的金属元素.结果:二妙丸具有降低血尿酸抗痛风的药效,并探究了痛风症可能与体内金属离子的作用相关.结论:该实验结果为二妙丸从金属离子的角度对其能够降低血尿酸抗痛风的作用机制研究提供科学依据.
