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芪蛎消瘿汤对NOD.H-2h4小鼠甲状腺CD4+T细胞亚群影响的实验研究
目的:从CD4+T细胞亚群角度,探讨芪蛎消瘿汤治疗自身免疫甲状腺炎(AIT)的作用机制.方法:60只SPF级NOD.H-2h4小鼠,随机分成以下4组:正常(NC)组、模型(MC)组、常规剂量芪蛎消瘿汤组(ZY1,20.8 g·kg-1)、和3倍剂量芪蛎消瘿汤组(ZY3,62.4 g·kg-1),正常组饲以双蒸水,其余各组自由饮用含0.05％碘化钠水8周,8周后自发形成AIT动物模型,再给处理因素8周后处死小鼠,留取各组NOD.H-2h4小鼠血清、甲状腺.放免法(RIA法)测小鼠血清总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4),固相化学发光酶免疫法(IRMA法)测定小鼠血清促甲状腺激素(TSH);光镜下观察甲状腺细胞形态;免疫组化法测定小鼠甲状腺γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素4(IL-4)蛋白表达;RT-PCR法检测小鼠甲状腺INF-γ,IL-4mRNA表达;Western blot法测定小鼠甲状腺组织叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)蛋白表达.结果:各组间血清TT3,TT4及TSH值比较无明显差异.HE染色显示MC组甲状腺组织淋巴细胞浸润,MC组AIT的发生率明显高于NC组(P＜0.01).MC组INF-γ,IL-4 mRNA及蛋白表达较NC组显著下降(P＜0.01);与MC组比较,ZY1,ZY3组INF-γ,IL-4的蛋白表达升高(分别P ＜0.01,P＜0.05);且ZY1组,ZY3组INF-γ,IL-4mRNA表达显著升高(P＜0.01).MC组甲状腺组织Foxp3的蛋白表达量较NC组明显下降(P＜0.01);ZY1,ZY3组Foxp3表达较MC组明显升高(P＜0.01).结论:芪蛎消瘿汤治疗AIT的机制可能与上调INF-γ,IL-4,Foxp3的表达,影响NOD.H-2h4小鼠Th1,Th2,Treg细胞亚群水平相关.
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调节性T淋巴细胞在肾脏疾病的研究进展
调节性T淋巴细胞是新发现的一类具有免疫负向调节作用的T淋巴细胞亚群,其在调节免疫平衡及维持免疫内环境的稳态中发挥了重要的作用,近年来的研究结果表明,其参与了多种肾脏疾病的发生与发展,为治疗肾脏疾病提供了一个新的前景.
关键词： 调节性T淋巴细胞 肾脏疾病 叉头翼状螺旋转录因子 -
前列腺素E2对CD4+ CD25+调节性T细胞免疫功能影响的实验研究
目的 探讨前列腺素E2对CD4+ CD25+调节性T细胞免疫功能的影响.方法 分离正常BALB/c小鼠脾脏CD4+ CD25+Treg,利用固相包被抗CD3和加入可溶性CD28辅助活化,予以PGE2刺激.根据刺激剂量不同,分成对照组、A(7 μmol/L)、B(14 μmol/L)、C(28 μmol/L)组,观察PGE2对Treg的增殖、IL-10、IL-2分泌和Foxp3表达的影响.结果 PGE2刺激12 h,3组细胞较对照组增殖反应差异均无统计学意义(P＞0.05);B、C组IL-2表达显著降低(P＜0.05),而Foxp3表达明显升高(P＜0.05);C组IL-10分泌升高(P＜0.05);刺激24h,B、C组细胞增殖反应较对照组显著增强(P＜0.05);A、B、C组IL-2分泌均下降(P＜0.05),而Foxp3表达均升高(P＜0.05);C组IL-10分泌升高(P＜0.05);刺激72 h,3组增殖反应、IL-10以及Foxp3表达均显著升高(P＜0.05),而IL-2分泌下降(P＜0.05).结论 PGE2能直接增强CD4+ CD25+ Treg的免疫抑制功能,从而可能进一步对效应T细胞免疫功能产生影响.
关键词： 前列腺素E2 调节性T细胞 免疫功能 叉头翼状螺旋转录因子 -
不同细胞刺激剂对小鼠调节性T细胞功能活化的影响
目的 研究体外实验中不同细胞刺激剂对小鼠调节性T细胞(Treg)表面T淋巴细胞毒性相关抗原-4(CTLA-4)及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达的影响,并对不同细胞刺激剂在Treg抑制活性发挥中的作用进行比较.方法 免疫磁珠法分离健康清洁级BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg.采用植物凝集素(PHA,20 mg/L)、刀豆蛋白A(ConA,5 g/L)及固相包被抗CD3(1 mg/L)刺激Treg,观察刺激后24、48和72 h CTLA-4及Foxp3表达的时间-效应关系.结果 PHA刺激对小鼠Treg细胞表面CTLA-4及Foxp3表达均无显著影响(P均＞0.05);而ConA表现出一过性的Treg活化作用,24 h CTLA-4表达明显上调(P＜0.01),但随刺激时间延长作用减弱,48 h和72 h后其表达已接近未刺激前的范围,同时ConA未能明显诱导Foxp3表达(P＞0.05);抗CD3可有效刺激Treg活化,在24、48和72 h CTLA-4及Foxp3表达均明显上调(P＜0.05或P＜0.01),其中以作用24 h和48 h表达上调尤为显著(P均＜0.01).结论 抗CD3在体外实验中能明显刺激Treg活化并诱导其抑制性相关分子CTLA-4及Foxp3的表达,为进一步探讨CD4+CD25+Treg的免疫调节效应提供了可能.
关键词： 调节性T细胞 T淋巴细胞毒性相关抗原4 叉头翼状螺旋转录因子 抗CD3 -
再生障碍性贫血患者CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞及Notch1表达水平的变化
目的 测定再生障碍性贫血(AA)患者治疗前后外周血CD4+ CD25+ CD127low调节性T细胞(Treg)的数量及叉头翼状螺旋转录因子(FOXP3)mRNA、Notch1 mRNA的表达水平,探讨Treg在AA发病中的作用及其机制.方法 流式细胞术检测29例初发AA患者、14例环孢素(CsA)治疗后恢复期及11例治疗后未恢复期患者外周血中CD4+ CD25+ CD127low T细胞、CD4+ CD25+ T细胞的数量,并与正常对照比较;采用RT-PCR检测FOXP3 mRNA和Notch1 mRNA的表达水平,分析两者相关性.结果AA初发组及治疗后未恢复组患者外周血中活化CD4+ CD25+ T细胞占CD4+ T细胞比例分别为(4.3±0.7)%、(4.2±0.6)%,明显高于正常对照组[(2.4±0.8)%](P＜0.05).CsA治疗后恢复组患者比例下降为(2.6±0.7)%(P＜0.05),与对照组比较差异无统计学意义.AA初发组及未恢复组CD4+ CD25+ CD127low T细胞在CD4+ T细胞中的比例分别为(2.4±1.2)%、(2.5±1.1)%,较正常对照组[(7.1±2.7)%]及恢复组[(5.3±1.0)%]明显降低(P值均＜0.01);但后两组比较差异无统计学意义.AA初发组患者FOXP3 mRNA及Notch1 mRNA分别为(0.260±0.011)和(0.018±0.005),较正常对照[(1.307±0.011)和(0.308±0.028)]表达明显下调(P值均＜0.01),治疗后分别为(1.287±0.012)和(0.281±0.013),表达较初发组显著提高(P值均＜0.01),与对照组比较差异无统计学意义(P值均＞0.05).AA患者CD4+ CD25+ CD127low T细胞、FOXP3均与Notch1表达呈正相关性(P值均＜0.01).结论AA患者外周血CD4+ CD25+ CD127low Treg减少,其抑制作用减弱,导致自身反应性T细胞过度活化,抑制造血.其作用机制之一可能与靶细胞表面Notch1分子表达降低相关.
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胆管结石性黄疸患者围术期内调节性T细胞免疫功能变化临床研究
目的 观察胆管结石性黄疸患者围术期外周血中总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)水平与外周血中调节性T细胞(Treg)免疫功能变化特点,探讨胆红素对Treg细胞免疫功能的影响.方法 选取自2015年2月至2018年2月解放军309医院收治的60例胆管结石性黄疸患者为研究对象,按照TB水平将其分为低(L)、中(M)、高(H)3组,每组各20例;另选取20例因胆囊结石伴胆囊炎行腹腔镜胆囊切除术的患者作为对照组.分别在术前1 d,术后1、3、7 d采血,检测各组患者外周血中TB、DB水平,以及Treg比例和细胞表达叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)的强度,观察各指标变化特点.结果 胆管结石性黄疸患者经手术治疗后,外周血中TB、DB水平较术前逐渐降低(P<0.05).术前,胆管结石性黄疸患者外周血中Treg比例显著高于对照组(P<0.05),以H组高;经手术治疗后细胞比例较术前呈现明显降低趋势(P<0.05),于术后7 d时接近对照组水平.胆红素水平对Treg表达Foxp3强度的影响表现为,L组中Foxp3表达强度由强到弱,M组中Foxp3表达强度未见显著变化,H组中Foxp3表达强度由弱转强.结论 不同程度黄疸的胆管结石患者外周血中Treg的细胞比例及Foxp3表达强度在围术期发生了明显的变化,但不同浓度的胆红素水平影响Treg发生免疫功能变化的特点不同.
关键词： 胆管结石 胆红素 调节性T细胞 免疫调节 叉头翼状螺旋转录因子 -
调节性T细胞对LPS诱导的小鼠早产模型胎盘炎症反应的影响
目的 研究调节性T细胞对脂多糖(LPS)诱导的小鼠早产模型胎盘炎症反应的影响.方法 孕17 d小鼠分组为腹腔注射PBS组(Control组),腹腔注射LPS(LPS组),腹腔注射LPS并尾静脉注射PBS组(LPS+ PBS组),腹腔注射LPS并尾静脉注射Treg组(LPS+ Treg组).构建LPS腹腔注射诱导的17 d孕小鼠早产模型.在第2剂LPS注射后1、6、12 h及出生时留取胎盘组织,检测Treg细胞标志物叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)、白血病抑制因子(LIF)、血红素加氧酶-1(HO-1)和白介素6(IL-6) mRNA及蛋白表达水平.结果 ①LPS组早产率100％,Control组未发生早产,LPS+ Treg组早产率与LPS组和LPS+ PBS组差异无统计学意义(P＞0.05).②LPS组与LPS+ PBS组胎盘组织中Foxp3、HO-1、LIF在第二剂LPS注射后1、6、12 h及出生时表达显著下降,IL-6表达显著增高;LPS+ Treg组Foxp3、HO-1、LIF表达明显增高,IL-6表达显著降低.结论 在LPS腹腔注射诱导的早产小鼠模型中,胎盘组织Treg减少可能是早产的机制之一,HO-1、LIF参与了Treg在母胎界面维持的独特的免疫微环境;Treg过继治疗可通过降低IL-6的表达减轻胎盘组织炎症反应.
关键词： 叉头翼状螺旋转录因子 脂多糖 早产 胎盘 小鼠模型 -
调节性T细胞对脓毒症中T淋巴细胞凋亡的影响
目的:探讨CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Treg)对脓毒症过程中效应性T细胞(Teff)凋亡的影响.方法:应用SPF级健康雄性BALB/C小鼠制备盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症模型.小鼠随机分为正常对照组、假伤组、CLP组、CLP+ PC61 (Treg特异性抑制剂)组、CLP+ HRPN(PC61的同型对照蛋白IgG)组.免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD4+ CD25+ Treg.采用流式细胞术观察T淋巴细胞毒性相关抗原(CTLA)-4及转录因子叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达以及CD25比例的变化,并检测各组小鼠CD4+ CD25-T细胞的凋亡率.ELISA法检测外周血中白细胞介素(IL)-10、IL-2、IL-4和干扰素(IFN)-γ的含量变化.结果:CLP+ PC61组术后48 h小鼠生存率(90％)较CLP组(60％)明显升高;CLP+ PC61组CD4+ CD25+ Treg中Foxp3及CTLA-4表达恢复至正常对照组水平,与CLP组差异有统计学意义(P＜0.05),并且CLP+ PC61组CD25表达水平低.CLP+ PC61组IL-2、IFN-γ水平显著升高,与CLP组差异明显(P＜0.05),但IL-4、IL-10水平较CLP组出现不同程度地下降(P＜0.05).此外,CLP+ PC61组效应性T细胞凋亡率明显低于CLP组(P＜0.05).结论:拮抗小鼠体内调节性T细胞活性可有效地减轻脓毒症状态下效应性T细胞凋亡,提高小鼠生存率.
关键词： 调节性T细胞 效应性T细胞 叉头翼状螺旋转录因子 T淋巴细胞毒性相关抗原4 凋亡 -
围术期叉头翼状螺旋转录因子3mRNA检测与慢性移植肾肾病的关系研究
目的：探讨肾移植患者围术期外周血单核细胞（PBMC）中叉头翼状螺旋转录因子（Foxp3）表达水平与慢性移植肾肾病（CAN）的关系。方法选取该院经临床表现及病理确诊为CAN的35例患者作为CAN组，同时选取35例移植肾功正常患者作为对照组。应用实时荧光定量PCR技术对患者围术期外周血PBMC中Foxp3 mRNA进行检测比较，为剔除研究Foxp3表达水平对CAN的影响时的干扰因素，对CAN的相关临床影响因素进行了分析。结果 CAN组围术期Foxp3 mRNA表达低于正常对照组，两组相比差异具有统计学意义（P＜0．01）。对CAN影响因素筛选显示，两组急性排斥反应（AR）比较，差异具有统计学意义，进行再次分组比较显示，有无AR对CAN组及对照组中Foxp3水平无影响。结论肾移植患者围术期外周血PBMC中Foxp3 mRNA水平与远期慢性移植肾肾病具有相关性，可以作为预测移植后慢性移植肾肾病发生危险程度的一个指标，指导个体化治疗。
关键词： 肾移植 肾功能衰竭 慢性 叉头翼状螺旋转录因子 -
CD4+Foxp3+调节性T细胞在不足月胎膜早破患者外周血中的表达及意义
目的:检测不足月胎膜早破(pPROM)患者外周血中CD4+ Foxp3+调节性T细胞的表达,探讨其在pPROM早产中的作用及意义.方法:选取2013年9月至2014年1月在中国医科大学附属盛京医院住院病例及门诊正常体检病例共60例,其中pPROM患者(孕34～36周)30例(pPROM组),正常妊娠对照组30例(孕34～36周).采每位受试对象抗凝外周血5 ml,分离外周血单个核细胞.使用流式细胞术检测外周血中CD4+ Foxp3+调节性T细胞的表达.结果:pPROM组与正常妊娠对照组相比,外周血中CD4+ Foxp3+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例降低,差异有统计学意义(P=0.0093);pPROM组中分娩发动≥48小时者CD4+ Foxp3+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例高于分娩发动的时间＜48小时者(P=0.0246);pPROM组中Apgar评分＞7分者和≤7分者CD4+ Foxp3+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例差异无统计学意义(P＞0.05).结论:pPROM患者外周血中CD4+ Foxp3+调节性T细胞的表达降低,参与pPROM的发病.pPROM患者CD4+Foxp3+调节性T细胞的表达高低与分娩发动时间有关,而与新生儿出生Apgar评分无明显关系.
关键词： 不足月胎膜早破 调节性T细胞 叉头翼状螺旋转录因子 流式细胞术 分娩动因
