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酸角壳提取物对蔗糖负荷大鼠血糖及α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的影响
目的 研究酸角壳提取物对蔗糖负荷大鼠糖吸收的抑制作用.方法 采用蔗糖负荷大鼠模型观察酸角壳提取物对蔗糖负荷后不同时间点血糖的影响;采用酶标法测定酸角壳提取物对正常大鼠肠黏膜和内容物中α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的影响,评价酸角壳提取物对肠道α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的影响.结果 各剂量酸角壳提取物能显著降低蔗糖负荷后15分钟大鼠的血糖水平(P＜0.01).酸角壳提取物能明显抑制小肠上段和中段α-葡萄糖苷酶以及小肠中段α-淀粉酶的活性,在给药30分钟到1小时的抑制作用为显著.结论 酸角壳提取物能够显著降低蔗糖负荷后大鼠的血糖水平,其作用可能与抑制肠道α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性有关.
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玉竹水溶性成分分离及其糖苷酶抑制活性
目的:研究玉竹中具有降血糖作用的生物碱成分并进行分离鉴定.方法:组合运用多种离子交换树脂色谱对玉竹水提物进行分离纯化,采用NMR和MS等光谱技术鉴定化合物结构;采用PNPG法和DNS法对所分离生物碱成分进行抗α-葡萄糖苷酶和抗α-淀粉酶活性筛选.结果:从玉竹水提物中分离得到8个化合物,其中2个多羟基生物碱,2个酰胺类化合物,3个氨基酸以及甜菜碱.其结构分别鉴定为1-deoxynojirimycin(1),fagomine(2),L-azetidine-2-carboxylic acid(3),l,2(S)-pyrrolidinedicarboxamide(4),(2S)-citrullinamide (5),丝氨酸(6),γ-氨基丁酸(7)和甜菜碱(8).对化合物1,2,4,5,8分别进行了α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性筛选.其中化合物1和2有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性,半数抑制浓度(IC50)分别为0.098,0.272 mol· mL-,作用效果优于阳性药阿卡波糖(IC500.493 mol· mL-).此外,化合物1对α-淀粉酶有抑制活性,IC50为0.681 mol·mL-1,但抑制活性较阿卡波糖(IC500.035 mol·mL-1)弱.结论:化合物1～8均为首次从玉竹中分离得到.化合物1和2有显著的抗α-葡萄糖苷酶活性.因此,多羟基生物碱类成分是玉竹发挥降血糖作用的药效物质基础.
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胡芦巴生品、酒制品抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的有效部位筛选及其酶动力学分析
目的:比较胡芦巴生品和酒制品对α-葡萄糖苷酶,α-淀粉酶抑制活性作用的差别,筛选抑制活性的有效部位,并研究其酶反应动力学.方法:利用萃取法获得胡芦巴生品和酒制品80％甲醇提取物的石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层、水层4个不同极性部位,采用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型和α-淀粉酶抑制模型,测定生胡芦巴和酒胡芦巴4个不同极性部位对α-葡萄糖苷酶,α-淀粉酶活性的抑制作用.通过酶促动力学与Lineweaver-Burk曲线推断各有效部位对α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶抑制类型.结果:生胡芦巴和酒胡芦巴只有水层对α-葡萄糖苷酶有抑制作用,酒制品对α-葡萄糖苷酶的抑制作用优于生品,生胡芦巴和酒胡芦巴水层萃取物对α-葡萄糖苷酶作用为非竞争可逆.生胡芦巴和酒胡芦巴的乙酸乙酯层和正丁醇层对α-淀粉酶有抑制作用,酒制品的抑制作用优于生品,且均为非竞争可逆.结论:胡芦巴经酒制后可在一定程度上增加对α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶活性的抑制作用,酒胡芦巴水层萃取物有开发成α-葡萄糖苷酶抑制剂的价值,酒胡芦巴的乙酸乙酯和正丁醇提取物具有开发成α-淀粉酶抑制剂的价值.
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酶法提取山药中多糖的工艺研究
目的:研究从山药中提取山药多糖的工艺条件,利用α-淀粉酶和超声提取山药多糖,通过考察不同因素对浸出率的影响规律并在此基础上运用正交实验选出优化的因素组合.方法:以山药多糖收率为指标,通过正交试验来优化α-淀粉酶液化的佳条件,并研究酶超声提取联合提取的效果,以得出优化的佳提取工艺.结果:α-淀粉酶作用的佳条件为:55℃,pH 5.5,加酶量10 mg,反应时间1.0 h,酶辅助浸提结束后,对体系进行超声处理5 min,多糖得率可达6.7920%,较单独酶辅助提取提高了99.35%.结论:酶处理后采用超声提取可显著提高山药多糖得率.
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人面果叶子的化学成分研究
采用正、反相硅胶柱色谱及半制备高效液相色谱等方法从人面果叶子95％乙醇提取物的乙酸乙酯部位分离得到15个化合物,分别鉴定为5,7,4'-trihydroxy-6-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-flavone(1)、1,5-二羟基-3-甲氧基口山酮(2)、1,3-二羟基-5-甲氧基口山酮(3)、山柰酚(4)、二氢山柰酚(5)、3,24,25-trihydroxytirucall-7-ene(6)、对羟基桂皮酸(7)、异香草酸(8)、(Z)-2-(2,4-dihydroxy-2,6,6-trimethylcyclohexylidene)(9)、volkensiflavone(10)、藤黄双黄酮(11)、3,8"-双柚皮素(12)、白果素(13)、fukugiside (14)和GB2a glucoside (15).化合物1为新化合物,命名为5,7,4'-trihydroxy-6-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-flavone.化合物5,6,9,13为首次从藤黄属植物中分离得到.化合物4,7～8,10～12,14～15为首次从人面果中分离得到.研究了10个化合物对α-淀粉酶的抑制作用,结果显示,化合物13对α-淀粉酶具有抑制活性,化合物13和阿卡波糖对α-淀粉酶的半数抑制浓度分别为8.12,4.32 μmol·L-1.
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人参总皂苷对粘虫体内蛋白质含量及消化酶活性的影响
目的:测定人参总皂苷对粘虫Mythimna separata体内蛋白质总含量及消化酶(纤维素酶和α-淀粉酶)活性的影响,探讨人参总皂苷的生态学作用.方法:在室内模拟粘虫的自然生长条件,采用载毒叶碟法饲喂4龄粘虫,通过Folin-酚试剂盒法测定粘虫体内蛋白质总含量,二硝基水杨酸法测定α-淀粉酶活性,滤纸法测定纤维素酶活性.结果:人参总皂苷能够显著降低粘虫体内蛋白质总含量,对粘虫体内消化酶(纤维素酶和α-淀粉酶)活性具有抑制作用,并且差异性显著.处理组蛋白质总含量、纤维素酶和α-淀粉酶活性显著低于对照组,且参总皂苷对α-淀粉酶和纤维素酶活性的抑制率与人参总皂苷浓度呈正相关,即20 g·L-1组＞l0g· L-1组＞5 g·L-1组.结论:人参总皂苷对粘虫体内蛋白质含量和消化酶活性的抑制,可能是引起粘虫表现拒食和生长发育不良的重要原因之一.
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吸入性肺炎相关生物学标记物的研究进展
口咽及胃内容物的反流、误吸可导致化学性、阻塞性和(或)感染性肺炎的发生,以上统称为吸入性肺炎.吸入性肺炎在临床上具有较高的发病率和病死率,但由于缺乏典型临床表现及特异性标记物,对于吸入性肺炎的诊断及不同类型的区分仍较困难.pH值监测及胃蛋白酶是目前常用的两种检测指标,α-淀粉酶、可溶性髓样细胞触发受体-1及呼出气冷凝液中白细胞三烯等具有良好的研究、应用前景.
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人胰腺α-淀粉酶的cDNA克隆和原核表达的初步研究
目的获得人胰腺α-淀粉酶(AMY2A) 基因并进行原核表达.方法采用基因工程技术,根据人AMY2A基因序列设计并合成特异性引物;从人胰腺组织中提取总RNA,反转录成cDNA第一链;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人胰腺AMY2A基因,经BamHⅠ和KpnⅠ双酶切、连接并插入原核表达载体pGEX-5T,构建pGEX-5T-AMY2A重组表达载体,在大肠杆菌BL21中异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达AMY2A蛋白.包涵体经尿素变性、复性及谷胱苷肽琼脂糖柱亲和层析纯化、AMY2A酶活性测定和免疫印迹分析.结果重组质粒测序和酶切结果显示AMY2A基因已正确插入pGEX-5T,重组蛋白、复性及纯化产物SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)在84 000处有一条明显的蛋白表达条带,AMY2A检测具有酶活性,免疫印迹分析表明重组蛋白具有人胰腺淀粉酶抗原性.结论作者已克隆并在大肠杆菌中初步表达并获得纯化的谷胱苷肽转移酶(GST)-AMY2A融合蛋白.
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健康人腮腺α-淀粉酶、溶菌酶的增龄性改变
目的观察不同年龄组正常腮腺α-淀粉酶、溶菌酶的分布、含量及增龄性变化的规律。方法将51例腮腺标本分为4个年龄组，用免疫组化的方法标记α-淀粉酶、溶菌酶，观察记录不同年龄组α-淀粉酶、溶菌酶的染色强度。结果 4个年龄组之间α-淀粉酶、溶菌酶染色阳性率差异有显著性，随着年龄增长，其染色阳性率呈逐渐减低的趋势。结论 HE切片上染色、形态相似的浆液性腺泡之间，实际在功能上存在着很大的不同。α-淀粉酶、溶菌酶增龄性变化的特点与定量组织学研究结果相符合。
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应激生理指标皮质醇和 α-淀粉酶的研究进展
随着社会竞争的日益激烈,工作和生活节奏加快,人们所承受的压力和挑战越来越多,暴露于日常生活应激的频率和强度也越来越大.持续、过强的应激暴露能破坏人体的生物学保护机制,并产生一系列生理、神经内分泌、神经生化、免疫功能及心理行为等方面的变化,终引发一系列危害身心健康的疾病.鉴于应激已成为多种慢性疾病的重要病因或诱因,对应激生理指标特别是反映应激水平的客观检测指标的应用研究,将为应激相关疾病的防治提供依据.文献报道有多种应激生理指标,如皮质醇、α-淀粉酶、儿茶酚胺、热休克蛋白、促炎细胞因子等,该文针对应激反应主要的两条通路:下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴和交感通路,将代表性的皮质醇和 α-淀粉酶作为应激生理指标作一综述.
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尿胰蛋白酶原-2测定及其在急性胰腺炎临床应用
目的通过用血尿淀粉酶与尿胰蛋白酶原-2进行对比分析,探讨尿胰蛋白酶原-2在急性胰腺炎时的临床诊断价值.方法急性胰腺炎病人71例,已排除其他胰腺疾病的腹痛患者29例.尿胰蛋白酶原-2采用免疫层析法,淀粉酶采用麦芽四糖法.结果71例急性胰腺炎中有65例尿胰蛋白酶原-2阳性;60例血淀粉酶阳性;53例尿淀粉酶阳性.尿胰蛋白酶原-2的诊断敏感度为91.5%,特异性是82.7%;血淀粉酶的诊断敏感度为84.5%,特异性是79.3%;尿淀粉酶的诊断敏感度为74.6%,特异性是75.8%.结论尿胰蛋白酶原-2的敏感度与特异性均高于血和尿淀粉酶,是诊断急性胰腺炎的较好指标.
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正交实验法研究山楂提取物对α-淀粉酶活性的影响
目的:通过了解山楂提取物对α-淀粉酶活性的影响获得山楂提取物与α-淀粉酶的复合制剂配方原则.方法:通过正交实验法研究不同山楂60%乙醇回流提取物浓度、反应温度、pH对α-淀粉酶活性的影响.结果:pH 6.8、温度40℃、加入20%的山楂提取物的α-淀粉酶反应活性高.结论:该试验结果为山楂α-淀粉酶复方制剂的配制提供了有价值的配方和配方条件.
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大豆胚轴提取物的降糖作用及其机制研究
目的:研究大豆异黄酮(soybean isoflavones,SI)和皂甙(soyasaponins,SS)的降糖作用机制.方法: 普通饲料中添加20 g/kg富含SI和SS的大豆胚轴提取物(soybean hypocotyl extracts,SHE),饲喂Wistar正常大鼠和GK/Jcl(Goto-Kakizaki)2型糖尿病大鼠20 w,观察其血糖和葡萄糖耐量变化及对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性. 结果: 长期食用SHE能显著降低2型糖尿病大鼠血糖水平,明显改善其葡萄糖耐量,同时能改善正常大鼠葡萄糖耐量.在糖尿病相关酶的抑制试验中,B类、E类和DDMP(2,3-dihydro-2,5-dihydroxy-6-methyl-4H-pyran-4-one)皂甙显示很强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其50%抑制浓度(IC50)值为10～40 (mol/L;异黄酮苷元也有很强的α-葡萄糖苷酶抑制作用,其IC50值为20～150 (mol/L,异黄酮葡萄糖苷形式对α-葡萄糖苷酶的抑制活性则较弱.SI和SS还具有较弱的α-淀粉酶抑制作用,浓度为1 g/L时,抑制率为10%～20%.结论: SHE具有降低糖尿病大鼠血糖水平和改善糖耐量的作用,其部分作用机制可能是通过SI和SS对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用而实现的.
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唾液生化指标对跳伞训练应激水平的评估
目的 采用唾液生化指标对跳伞训练应激水平进行评估,研究跳伞训练伞兵应激水平的 变化特点.方法 参加跳伞训练的新兵20名,1个月内共完成8次跳伞,其中第1次、第4次和第7次跳伞当天登机前2h(驻地)、登机前1h(机场)、着陆后0.5 h(着陆场)采集唾液标本,检测唾液中皮质醇、嗜铬粒蛋白A浓度以及α-淀粉酶活力.结果 3次跳伞过程,从登机前至着陆后,唾液皮质醇、嗜铬粒蛋白A浓度以及α-淀粉酶活力均明显升高；随着跳伞次数的增多,登机前2h和着陆后0.5 h唾液皮质醇、嗜铬粒蛋白A浓度以及α-淀粉酶活力明显降低,登机前1h不同跳伞次数之间3种生化指标变化均不明显.结论 新兵跳伞训练从登机前至着陆后,应激水平明显升高；随着跳伞次数的增多,新兵在驻地以及跳伞着陆过程中应激水平明显降低,但在机场登机前应激水平没有明显变化.
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油橄榄叶抗糖尿病活性部位筛选
目的 筛选油橄榄叶抗糖尿病活性部位.方法 应用回流提取法和大孔吸附树脂技术,从油橄榄叶中提取6个部位(A～F).对6个部位进行α-淀粉酶抑制实验、蛋白质非酶糖基化抑制实验和四氧嘧啶致小鼠糖尿病模型实验,综合评价和筛选抗糖尿病活性部位.结果 C～F部位对α-淀粉酶、蛋白质非酶糖基化均显示明显的抑制活性,其中以D部位活性强,且呈量效关系.C、D部位降血糖作用较明显,旦以D部位活性显著.结论 油橄榄叶具有潜在抗糖尿病活性,其中D部位的活性尤为显著.
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卤族元素等对酶法测定血清氯化物的干扰实验
目的:研究卤族元素溴、碘和氟离子以及硫氰酸和迭氮离子对α-淀粉酶及其底物2-氯-4-硝基苯-α-D-麦芽三糖苷(CNP-G3)测定氯离子的干扰情况.方法:使用混合血清建立对照组和加入不同浓度可疑干扰物质的实验组进行比较.结果:样品中加入可疑干扰物终浓度达10 mmol/L的溴化钾、83.3 mmol/L的碘化钾、50.0mmol/L的氟化钠或氟化钾、10 mmol/L的硫氰酸钾和15.87 mmol/L的迭氮钠对酶法测定氯化物无任何干扰;氟对硫氰酸汞比色法测定氯化物无干扰,其余均呈现正干扰.结论:α-淀粉酶/CNP-G3法测定血清氯化物在抗卤族元素等干扰方面具有显著的优越性.
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2-氯-4-硝基苯-麦芽三糖苷作为α-淀粉酶底物的实验研究
目的:研究α-淀粉酶及其底物2-氯-4-硝基苯-麦芽三糖苷(CNP-G3)酶促反应过程中的激动剂、抑制剂、适pH、米氏常数等.方法:以测定酶促反应速度的方式分别进行研究.结果:阳离子中仅钙离子和氨离子对α-淀粉酶有轻度的激活作用,阴离子中的氯离子对α-淀粉酶有强大的激活作用,约是迭氮钠的4倍,醋酸离子也有弱激活作用,硫酸、磷酸氢、碳酸离子无激活作用;乙二胺四乙酸是酶的强抑制剂;酶的适pH为5.9～6.1;酶以CNP-G3为底物时的Km值约为0.22 mmol/L;麦芽糖对α-淀粉酶有显著的抑制作用;EGTA为钙离子螯合剂,可调节反应速率.结论:α-淀粉/CNP-G3酶促反应系统研究可用于酶活性和激动剂测定.
关键词： α-淀粉酶 2-氯-4-硝基苯-麦芽三糖苷 激动剂 Km值 -
绿茶提取物对糖尿病大鼠糖耐量的影响及机制研究
目的研究绿茶提取物对糖尿病大鼠糖耐量的影响及其机制.方法给糖尿病大鼠口服蔗糖或淀粉和绿茶提取物后,观察绿茶提取物对糖尿病大鼠糖耐量的影响,并用比色法测定绿茶提取物对α-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.20)和α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)的抑制活性.结果绿茶提取物可明显改善蔗糖或淀粉负荷糖尿病大鼠的血糖水平.在糖尿病相关酶的抑制试验中,绿茶提取物显示有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC50)值为0.13 g/L;绿茶提取物对α-淀粉酶的抑制活性则较弱,浓度为1 g/L时,其对α-淀粉酶的抑制率为21%.结论绿茶提取物能够降低糖尿病大鼠糖负荷血糖,可能由其对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用所致.
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夏枯草提取物对α-淀粉酶抑制作用的初步研究
胃的探讨夏枯草提取物对α-淀粉酶的抑制作用.方法 采用水提和水提醇沉方法 得到夏枯草水提物、浸膏、粗多糖,通过Van Loon's碘比色法检测α-淀粉酶活性,以夏枯草水提物测定该酶动力学.结果 夏枯草水提物对α-淀粉酶有抑制作用,呈量效关系.对该酶抑制类型为反竞争性抑制.夏枯草浸膏对α-淀粉酶抑制作用较水提物明显.结论夏枯草水提物、浸膏对α-淀粉酶存在抑制作用,有效部位可能在浸膏部分,为深入研究夏枯草提取物抑制单糖吸收作用提供了依据.
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中国被毛孢胞内多糖提取物中淀粉的酶法去除研究
冬虫夏草是由中国被毛孢(Hirsutella sinensis或Ophicordyceps sinensis)寄生在蝙蝠蛾幼虫上形成的复合物[1],具有降血糖、抗肿瘤、保肺等多种功效[2-4],而多糖是冬虫夏草的主要活性物质之一[5].中国被毛孢现已能规模化培养,但培养基中一般需要加入淀粉[6],而未被分解利用的淀粉则会被带入粗多糖提取物中,降低有效多糖的纯度和质量,因此研究如何针对性地去除提取物中淀粉,对其质量分析和品质提高具有指导意义.
