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CD137分子对衰老小鼠T细胞活化的影响
目的观察CD137分子对衰老小鼠脾脏T细胞活化的影响,探讨该分子对衰老T细胞功能的调节作用.方法通过注射D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型.分离青龄组、自然衰老组、对照组、衰老模型组小鼠的脾脏T细胞,分别用ConA或ConA+CD137单抗活化24 h,采用流式细胞术测定T细胞的凋亡率,ELISA测定细胞培养上清IL-2浓度.结果自然衰老组及衰老模型组小鼠的脾脏T细胞静息培养及活化培养后的凋亡率均显著高于青龄组及对照组;ConA+CD137单抗活化组的衰老T细胞的凋亡率低于ConA活化组,其培养上清IL-2浓度高于ConA活化组.结论 CD137作为T细胞活化的共刺激分子能促进衰老T细胞活化后的存活及IL-2的分泌,这有助于提高衰老T细胞的功能.
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067 CD137研究新进展
CD137是近年新发现的肿瘤坏死因子受体超家族的新成员,是一种新的共刺激信号分子.它参与T细胞的活化、分化、增殖、凋亡、信号传导及细胞外粘附;活化的CD137参与调节细胞因子对粒细胞的抗凋亡作用;CD137作为一个独特的潜在的单核细胞存活因子,可诱导单核细胞存活、增殖与粘附;CD137作为一种重要的受体亦参与调节树突状细胞(DC)的功能;CD137的配体(CD137L)表达于癌细胞表面,在肿瘤免疫及治疗中起作用;自身免疫病中慢性活化的自身反应T细胞表达CD137,CD137的异常表达与免疫疾病的发生存在某种关系;CD137在改善骨髓移植后异源T细胞的移植物抗宿主病(GVHD)和移植物抗白血病(GVL)等异源免疫反应中亦起重要作用.
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人CD137L在肿瘤细胞上的表达及其功能研究
为研究不同来源人肿瘤细胞系表面CD137L的表达和功能.采用RT-PCR、FACS方法检测人CD137L在肿瘤细胞的表达,运用ELISA的方法检测CD137L对T细胞释放IFN-γ的影响及对肿瘤细胞分泌IL-8的影响.结果:来源于肝癌、肺癌、结肠癌、白血病的9种人肿瘤细胞系均可不同程度表达CD137L,但CD137L的表达水平与肿瘤细胞系的来源无相关,同一组织来源的细胞系,有的高表达,有的低表达.胚胎细胞系ECV 304中度表达CD137L,而正常新分离的PBMC不表达.功能研究发现:L78肿瘤细胞上表达的CD137L在CD3单抗存在的情况下与T细胞上的CD137L结合,能提高T细胞释放IFN-γ的水平,其作用具有剂量依赖性,这种作用可被抗-CD137L阻断;而CD137L表达水平与L78相似的Hep G2.2.15细胞在CD3单抗存在下并不能增强T细胞IFN-γ的分泌,进一步分析发现Hep G2.2 15同时表达较高水平的CD137(大约为91.6%),而L78几乎不表达CD137.肿瘤细胞上CD137L与表达在CHO细胞表面的CD137相互作用对肿瘤细胞分泌IL-8的水平产生不同的影响,使Hep G2.2.15分泌IL-8的水平约增加2倍(从15 pg/ml增加到30 pg/ml),但对肿瘤细胞HLE、A2分泌IL-8没有明显影响.CD137L在肿瘤细胞上的表达是普遍现象,其表达可能与细胞的快速生长有关;某些肿瘤细胞系表达的CD137L是有功能的,一方面可通过CD137受体向T细胞传递信号,另一方面又可将信号传向表达配体的肿瘤细胞.
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CD137介导的共刺激途径在肿瘤免疫治疗中的应用
应用免疫调节分子增强抗肿瘤免疫反应是治疗癌症的新策略.CD137介导的信号通路是一重要的共刺激途径.CD137属于肿瘤坏死因子受体超家族成员,表达在活化的T细胞、自然杀伤细胞、单核细胞表面,通过连接其天然配体CD137L或用CD137激动性单克隆抗体激活CD137,既能提供共刺激信号激活T细胞,使T细胞活化增殖并分泌细胞因子,同时它介导的反向共刺激信号诱导抗原提呈细胞(antigen preseting cell,APC)增殖并分泌细胞因子.动物实验表明,干预CD137共刺激途径可调节T细胞和APC的功能产生抗肿瘤免疫作用,单独干预CD137共刺激途径或与其他治疗方式联用将成为肿瘤免疫治疗的新方式.
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类风湿关节炎患者TH细胞亚群上CD137的表达变化
目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血中TH1/TH2亚群细胞上CD137的表达变化特点及其临床意义.方法 应用流式细胞术检测32例RA患者及34名正常对照者外周血CD4+iFN-γ+(TH1)细胞和CD4+IL-4+(TH2)细胞上CD137的表达水平.结果 正常组中TH1+CD137+和TH2+CD137+细胞水平无明显差异;而在RA组中TH1+CD137+细胞水平明显高于TH2+CD137+水平.TH1+CD137+在RA活动组的水平明显高于稳定组和正常组(表达百分率分别为95.57±11.56、69.12±7.85和53.22±6.83,P＜0.01);而TH2+CD137+在RA稳定组的水平明显高于活动组和正常组(表达百分率分别为62.91±8.56、56.32±6.93和51.90±4.13.P＜0.01).RA活动期TH1+CD137+细胞百分率与急性期指标ESR、CRP及活动期指标Stroke指数正相关(r=0.865,P＜0.01;r=0.854,P＜0.01;r=0.103.P＜0.05);而稳定期TH2+CD137+也与RA活动期指标RF星正相关关系(r=0.306,P＜0.05).结论 RA患者外周血中TH1、TH2亚群细胞上CD137的表达存在异常.同时CD137的表达异常与RA患者不同病程和病情活动度相关.提示CD137参与了RA免疫反应的发展.尤其是在疾病的活动期,CD137有助于CD4+T细胞向TH1细胞的偏移,从而加速促炎性细胞因子IFN-γ的分泌.而在稳定期,CD137可能通过刺激体液免疫来维持免疫反应.
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CD137分子对树突状细胞趋化因子分泌的调节作用
目的 探讨CD137分子对树突状细胞(DCs)上趋化因子分泌的调节作用.方法 采用CD137-Fc融合蛋白刺激DCs.Transwell方法分析CD137-Fc诱导DCs分泌的趋化因子对不同免疫细胞的趋化作用.RT-PCR和ELISA方法分析CD137-Fc分子对DCs上不同趋化因子mRNA表达的影响.结果 Transwell实验结果显示,CD137-Fc刺激的DCs培养上清对自体T细胞、单核细胞和DCs的趋化能力明显增加(P＜0.05).RT-PCR和ELISA检测结果显示,CD137-Fc刺激DCs 3d后,趋化因子M1P-1 α、MIP-1β、MDC和IL-8的表达水平显著增加.结论 CD137可通过诱导DCs分泌MIP-1 α、MIP-1β、MDC和IL-8等趋化因子促进DC募集T细胞、单核细胞和DCs等免疫细胞,进而放大DC介导的免疫反应.
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CD137在Treg细胞上的表达及对其功能的抑制作用
目的 探讨CD137分子在CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)上的表达及其生物学意义.方法 抗人CD137单抗加入PHA活化的T细胞培养体系中,流式细胞术分析细胞表型的变化,细胞计数分析细胞的增殖.结果 流式细胞术分析(FACS)结果显示,PHA活化后CD137在Treg细胞表面上调表达.细胞计数结果表明,抗CD137单抗加入PHA活化的T细胞培养体系中T细胞增殖的总数明显增加,而FACS结果显示,其中Treg细胞的含量明显下降,并下调CD95的表达.结论 Treg细胞活化后,CD137表达明显增加,其介导的共刺激信号可发挥抑制Treg细胞功能的作用,进而促进其它T亚群的增殖.
关键词： CD137 CD4+CD25+T细胞 Treg -
CD137分子对单核细胞上CXCR4表达及功能的调节作用
目的 探讨CD137分子对单核细胞上CXCR4表达及功能的调节作用.方法 采用CD137-Fc融合蛋白刺激单核细胞,流式细胞术(FACS),RT-PCR方法检测CXCR4分子在单核细胞上的表达.Transwell方法分析CD137-Fc激发的单核细胞迁移能力的改变.结果 FACS,RT-PCR检测结果显示,CD137-Fc刺激单核细胞48h后,CXCR4蛋白分子及mRNA的表达显著下调.Transwell实验结果显示,CD137-Fc刺激后的单核细胞对趋化因子SDF-1α的趋化能力明显下降(P＜0.05).结论 CD137可下调单核细胞上CXCR4表达,进而抑制单核细胞对趋化因子SDF-1α的趋化能力.
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计算机模拟重组人CD137L蛋白与其鼠源受体的相互作用研究
研究重组人协同刺激分子CD137配体(rhCD137L)蛋白与其鼠源受体CD137( mCD137)发生相互作用的结构基础.分别以小鼠核因子受体激活剂RANK蛋白和人CD137L的X-射线晶体结构为模板,应用Discovery Studio (DS) Modeling 2.5软件同源模建mCD137和rhCD137L的三维结构模型;进行能量优化后,采用Ramachandran图和Profiles 3D对模建结构进行合理性评估;通过ZDOCK模块进行分子对接,预测rhCD137L-mCD137的候选结合结构域.结果表明,rhCD137L中存在多个可与mCD137发生相互作用的候选结合位点,其中包括D80-A82、L84、以及参与其与人源受体CD137发生相互作用的A'B Loop环(Q98-T130)和Q230.与已知人源CD137L-CD137间的相互作用不同,rhCD137L还与mCD137形成了2个氢键.CD137L虽然可以与鼠源受体发生相互作用,但与人源受体的结合模式并不完全相同.该结果为今后深入研究CD137通路发挥协同刺激作用的信号体系以及基于该信号途径新型分子靶向药物的设计提供了理论基础.
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CD137与心肌缺血-再灌注损伤
心肌缺血-再灌注损伤是冠状动脉溶栓术、冠状动脉内支架植入、冠状动脉旁路移植术等进行有效的心肌再灌注缩小心肌梗死面积治疗后发生的损伤。 CD137通过创建促进炎症反应的环境、提高基质金属蛋白酶的释放等参与了心肌缺血-再灌注损伤，本文就CD137与心肌缺血-再灌注损伤机制之间的关系进行综述。
关键词： 心肌缺血-再灌注损伤 炎症反应 血管内皮功能障碍 CD137 -
CD137信号下调乳腺癌患者外周血Treg细胞的免疫抑制功能
目的 探讨CD137信号对CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)的生物学效应及机制.方法 采用激发型抗人CD137单抗加入PHA刺激的乳腺癌患者外周血T细胞培养体系及Treg细胞培养体系中,利用细胞计数及~3H-TdR掺入法分析T细胞的增殖,流式细胞术分析细胞膜分子和Foxp3表达,ELISA分析细胞因子的分泌.结果 CD137分子表达于乳腺癌患者外周血CD4~+CD25~+Treg细胞膜;抗人CD137单抗加入PHA活化的乳腺癌患者T细胞培养体系后,T细胞增殖明显增加,Foxp3~+Treg细胞比例明显下降;激发CD137信号可下调CD4~+CD25~+Treg细胞的Foxp3表达,抑制Treg细胞产生TGF-β1和IL-10,以及下调Treg细胞对PHA刺激的CD4~+CD25~-T细胞增殖的抑制效应.结论 CD137信号可抑制Treg细胞的免疫抑制功能,CD137可能是对Treg细胞进行免疫干预的重要靶点.
关键词： CD137 CD4~+CD25~+调节性T细胞 乳腺癌 -
急性冠脉综合征患者血清TNF受体-配体家族高表达的临床意义
目的 探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清可溶性肿瘤坏死因子(TNF)受体-配体家族CD40L、OX40L及CD137水平变化的临床意义.方法 ELISA法检测稳定型心绞痛组(SA组,50例)、不稳定心绞痛组(UA组,50例)、急性心肌梗死组(AMI组,80例)患者和正常对照组(C组,40例)的血清可溶性CD40L、OX40L及CD137水平.结果 UA组血清CD40L为(18.6±4.7)ng/ml,OX40L为(22.5±4.3)ng/ml,CD137为(27.8±7.1)ng/ml;AMI组血清CD40L为(20.7±5.2)ng/ml,OX40L为(24.2±4.6) ng/ml,CD137为(30.2±6.5) ng/ml.两组上述三项指标均明显高于SA组的(6.6±2.1) ng/ml、(9.5±2.5) ng/ml和(7.2±2.3)ng/ml和C组的(7.0±2.2)ng/ml、(9.1±2.4) ng/ml和(7.3±2.4)ng/ml(P＜0.05).ACS患者血清CD40L、OX40L及CD137水平与心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平及冠脉复杂狭窄显著相关.结论 血清CD40L、OX40L及CD137水平升高是冠脉斑块不稳定的活动性标志物.
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树突状细胞疫苗联合抗CD137抗体治疗肾细胞癌的实验研究
目的:探讨抗CD137抗体是否能加强树突状细胞疫苗的抗肿瘤效应.方法:将Renca肾癌细胞注入Balb/c小鼠皮下.3天后,小鼠被随机分为4组,分别给予未治疗、树突状细胞疫苗治疗、抗CD137抗体治疗、树突状细胞疫苗联合抗CD137抗体治疗.肿瘤种植后20天,小鼠被处死,获取脾脏分析T细胞活性.通过测量肿瘤大小来评定抗肿瘤效应.结果:相比于未治疗,各种治疗显著增加了T细胞活性,抑制了肿瘤生长,尤以联合治疗的作用为强.结论:联合治疗通过增加T细胞活性来提高抗肿瘤效应.
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激活型人源化抗人CD137单克隆抗体的研制与生物学活性鉴定
目的 制备鼠抗人CD137抗体,并对该抗体进行人源化改造.方法 构建hCD137-pCDNA3.4真核表达质粒,经293F细胞表达纯化及鉴定后,获得CD137蛋白.制备pHAGE-CMV-MCS-IRES-ZsGreen-hCD137的慢病毒,感染HEK-293FT细胞,获得用来筛选杂交瘤的CD137转基因细胞株.将CD137蛋白免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价,将免疫小鼠的脾脏和骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用ELISA方法及流式细胞术对小鼠杂交瘤进行筛选.将筛选后的杂交瘤细胞接种小鼠,获得腹水.对抗体亚型和抗体效价进行测定,并通过竞争结合抑制实验等方法对所获的CD137单抗的生物学特性进行分析鉴定.提取该mAb杂交瘤细胞株的总RNA逆转录成cDNA,进行鼠抗人CD137抗体可变区序列克隆,构建人源化抗体重链和轻链表达载体,瞬时转染HEK-293FT,检测分析各重组人源化抗体与抗原的亲和力.结果 获得1株CD137单抗(6F5),该抗体与CD137L有竞争作用.蛋白结合表位在A.A 30-100.6F5能够激活NF-κB信号通路,对外周血单个核细胞增殖具有显著促进作用,且人源化后抗体的亲和力不变.结论 成功制备1株CD137人源化抗体,该人源化抗体为下一步开展体内肿瘤治疗奠定了基础.
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CD137表达与慢性乙型肝炎患者肝脏免疫病理损伤程度的相关性研究
目的：：探讨CD137表达与慢性乙型肝炎( chronic hepatitis B,CHB)患者肝脏免疫病理损伤程度的相关性。方法：采用ELISA法检测受试者外周血中CD137L的水平；免疫荧光法检测肝组织中CD137的表达；Western blot法检测肝组织中CD137和CD28蛋白水平表达；荧光定量PCR检测肝组织中CD137和CD28 mRNA的表达。结果：重度CHB组患者血清CD137L的表达水平均明显高于健康对照组、轻度和中度CHB组患者(P<0.01)。肝组织中CD28 mRNA在中度CHB组和重度CHB组患者的表达水平均较健康对照组及轻度CHB组患者明显升高(P<0.01)。重度CHB组患者CD137 mRNA表达水平均较健康对照组、轻度CHB组和中度CHB组患者显著升高(P<0.01)。肝组织中CD28蛋白在中度CHB组和重度CHB组患者的表达水平均较健康对照组及轻度CHB组患者明显升高(P<0.01)。重度CHB组患者CD137蛋白表达水平均较健康对照组、轻度CHB组和中度CHB组患者中CD137蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论：CD137的活化参与CHB患者肝组织免疫病理损伤过程,与其损伤程度有相关性。
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人树突状细胞与CD137单抗联合体外抗宫颈癌的实验研究
目的:研究树突状细胞(DCs)联合CD137单抗对HeLa宫颈癌细胞系体外生长的抑制作用.方法:外周血单核细胞体外经细胞因子GM-CSF、IL-4的诱导获得DCs,流式细胞术检测DCs相关表型及协同刺激分子CD137的表达.MTT法分别检测DCs以及DCs联合CD137单抗对HeLa细胞的生长抑制作用.结果:诱导5～7d后的悬浮细胞具有典型的树突状细胞形态.流式细胞术检测结果显示,MHCⅡ类分子HLA-DR的表达率为中等水平,单核-巨噬细胞系表面标志CD14表达率小于5%;CD137的表达率为9.77%,LPS诱导成熟后CD137的表达率增加为36.06%.当DCs与HeLa细胞的效靶比为1.25:1、2.5:1、5:1、10:1时,DCs对HeLa细胞的抑瘤率分别为6.17%、5.75%、23.46%、21.48%;当效靶比为5:1时,DCs联合CD137单抗抑制HeLa细胞生长的作用,比DCs单独抑制HeLa细胞生长的作用明显增强,其抑瘤率由255.44%提高到57.07%(P＜0.05).结论:DCs联合CD137单抗,体外具有显著的抗宫颈癌作用,为宫颈癌的防治提供了新思路.
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人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CD137、CD137L的表达特点
目的:建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术,并初步探讨其表面CD137、CD137L的表达特点.方法:利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞,体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养,对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析,并检测CD137及CD137L的表达.结果:诱导培养5～7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态,无明显的增殖趋势;流式细胞仪分析显示,MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64.02%,单核-巨噬细胞系特异性表面标志CD14表达率仅为2.34%;人类DCs表面CD137L表达率为41.03%;CD137表达率为9.77%,LPS刺激后表达率增加为36.06%.结论:人外周血单核细胞,体外经GM-CSF、IL-4诱导,可获得大量的未成熟DCs,其中含有少量的单核-巨噬细胞;此DCs增殖能力很弱,表明单核细胞为DCs的非增殖性前体;体外培养的人类DCs可中等量表达CD137L,并有CD137的表达,LPS刺激可诱导CD137表达的增加.为进一步研究DCs以及CD137、CD137L的生物学特性和功能奠定了基础.
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重组可溶性人CD137在CHO细胞中的表达
目的:获得表达人可溶性CD137抗原的dhfr-CHO细胞株.方法:将CD137-hIgG1Fc-pCD-NA3重组质粒及pSV2-dhfr质粒,运用脂质体介导法共转染CHO细胞.用G418筛选出阳性克隆,MTX递增浓度诱导人可溶性CD137在dhfr-CHO细胞的表达.运用RT-PCR检测CD137 mRNA转录水平,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测人CD137可溶性蛋白在CHO细胞中的表达.结果:重组质粒转化细胞进行RT-PCR后,得到一大小为558bp的特异性条带,与人CD137胞膜外区一致;重组质粒转化细胞进行SDS-PAGE得到一大小约为37KDa的条带,与人CD137-hIgG1Fc融合蛋白大小基本一致.结论:获得了表达人可溶性CD137的dhfr-CHO细胞株,为获得纯化的CD137抗原、制备CD137单抗奠定了基础.
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人CD137L在肿瘤细胞的表达及其对肿瘤细胞分泌IL-8的影响
目的:检测人CD137L在肿瘤细胞的表达及其功能.方法:采用RT-PCR、FACS方法检测人CD137L在肿瘤细胞的表达,用ELISA方法检测CD137L对肿瘤细胞分泌IL-8的影响.结果:9种不同来源的人肿瘤细胞系均不同程度表达CD137L,其中,BEL 7402、HL-60、A2 细胞系呈高水平表达;HepG2.2.15、L 78、HT-29细胞系中度表达;U937、H6、HLE细胞系低表达.胚胎细胞系ECV 304中度表达,而新分离的正常外周血单个核细胞不表达.CD137L的表达水平与肿瘤细胞系的来源无关,同一组织来源的细胞系,有的高表达,有的低表达.肿瘤细胞上的CD137L对肿瘤细胞本身IL-8的分泌可产生不同的影响:可使HepG2.2.15分泌IL-8的水平增加,但对HLE、A2,只能微弱地增强肿瘤细胞释放IL-8.结论:CD137L在肿瘤细胞上的表达是普遍现象,其表达可能与细胞的快速生长有关;肿瘤细胞的CD137L可增强某些细胞系分泌IL-8.
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CD137L对结肠癌细胞株Colo205生物学行为的影响
目的 探讨CD137L对结肠癌细胞株Colo 205生物学行为的影响及其在结直肠癌发生发展中的可能意义.方法 Colo 205细胞在未包被、CD137/Fc包被或IgG1Fc包被的培养板中培养24、48及72 h后,CCK-8法测定细胞增殖;培养48h后,ELISA法检测培养上清液中IL-8的浓度,transwell侵袭实验检测细胞侵袭力.结果 CD137/Fc组细胞增殖与空白组及IgG1Fc组相比均显著增强;IgG1Fc组细胞增殖情况与空白组相比差异无统计学意义.CD137/Fc组的Colo 205细胞培养上清液中IL-8的浓度为(195.3±24.3)ng/ml,显著高于IgG1Fc组及空白组(P值均为0.000);IgG1Fc组培养上清液中IL-8的浓度为(52.7±11.4)ng/ml,空白组培养上清液中IL-8的浓度为(54.7士12.5)ng/ml,两组IL-8浓度差异无统计学意义(P=0.891).侵袭实验结果示,CD137/Fc组的迁移细胞数为(105±10)个/视野,显著高于IgG1Fc组及空白组的透膜细胞数(P值均为0.000).IgG1Fc组的透膜细胞数为(57±3)个/视野,空白组透膜细胞教为(60±6)个/视野,两组差异无统计学意义(P=0.602).结论 CD137L能显著促进Colo 205细胞的增殖、IL-8分泌及增强细胞的侵袭力,CD137L可能在结直肠癌的发生进展及转移中发挥作用.
