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非小细胞肺癌组织CD137L表达及其临床意义
目的:观察人非小细胞肺癌( NSC LC)组织中CD137L的表达,探讨CD137L与NSCLC临床病理参数和预后的关系.方法:采用免疫组织化学技术分析61例NSCLC组织中CD137L的表达.将免疫组化检测结果与患者的临床病理特征以及生存时间进行统计学分析.结果:CD137L阳性表达定位于细胞质,部分位于细胞核.在NSCLC组织中的阳性表达率为45.90％(28/61),统计学分析显示,NSCLC组织CD137L表达与年龄、性别和病理类型等无明显相关性(P＞0.05),而与临床分期相关(P=0.027),且CD137L表达阳性患者生存期较表达阴性患者延长,P=0.023.结论:CD137L在NSCLC组织中有表达,其阳性表达率可能与临床分期相关；CD137L阳性表达与患者预后呈正相关,对判断NSCLC的预后有一定的参考价值.
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CD80 CD86和CD137L基因联合表达对小鼠肝癌种植模型肿瘤免疫原性的影响
目的 探讨CD80、CD86和CD137L基因联合表达对肿瘤免疫原性的影响.方法 按接种变异瘤株不同,将BAL B/c小鼠随机分成A组(H22-Wt细胞)、B组(H22-neo细胞)、C组(H22-CD80/CD86+细胞)、D组(H22-CD137L+细胞)、E组(H22-CD80/CD86/CD137L+细胞)5组,建立H22-BAL B/c小鼠荷肝癌模型,A、B组为对照组.观察小鼠成瘤率、成瘤潜伏期、荷瘤鼠存活率及肿瘤增殖情况.通过复种试验观察转基因对H22变异株免疫原性和机体免疫保护作用的影响.结果 E组首次接种成瘤率仅有50.0%,显著低于其余4组(P＜0.01).首次接种后,C组荷瘤鼠肿瘤生长受到明显抑制,有2只荷瘤鼠肿瘤完全消退.E组肿瘤生长所受抑制较C组更为明显,肿瘤峰值体积显著小于C组,且有3只荷瘤鼠肿瘤完全消退.其余3组荷瘤鼠未见肿瘤完全消退.与A、B、D组相比,C、E组荷瘤鼠生存率显著改善(P＜0.01),而C、E两组荷瘤鼠生存率差异无统计学意义(P＞0.05).复种试验表明,C、E组荷瘤鼠再次成瘤率低于对照组,E组与C组差异也有统计学意义(P＜0.01);第3次接种后,E组成瘤率显著低于C组(P＜0.01).E组中5只首次接种未成瘤的小鼠,于第21天重复接种H22-Wt细胞,小鼠100%排斥肿瘤,于第56天第3次接种H22/Wt细胞,小鼠仍然100%排斥肿瘤.结论 CD80+CD86和CD137L单独或者联合表达均可显著降低野生型H22细胞株致瘤性,CD80、CD86和CD137L基因联合表达显著改善了野生型H22细胞的免疫原性.
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CD80 CD86和CD137L基因联合表达增强细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性的机制
目的 探讨CD80、CD86和CD137L基因联合表达增强宿主细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的机制.方法 BAL B/c小鼠随机分为5组,A组接种H22-Wt细胞,B组接种H22-neo细胞,C组接种H22-CD80/CD86+细胞,D组接种H22-CD137L+细胞,E组接种H22-CD80/CD86/CD137L+细胞.分别于第14、35、56和84天,每组每次随机选取2只小鼠处死取材.原位末端标记法(TUNEL)和DNA ladder法检测脾淋巴细胞凋亡.电泳迁移率法(EMSA)检测T细胞核因子KB(NF-KB)活性.结果 TUNEL检测结果显示,接种后第14天,A、B组脾淋巴细胞即出现大量凋亡,D组凋亡虽然较A、B组明显减少,但仍远高于C、E组.随接种时间推移,C组脾淋巴细胞凋亡逐渐增多,而E组这一趋势不明显,至第84天,C组和E组的脾淋巴细胞凋亡指数分别为30.8±9.2和14.4±4.5.DNA ladder检测结果显示,接种后第14、35、56和84天,C组和E组均检测出典型阳性结果,其中以C组第35、56和84天凋亡明显.EMSA检测结果显示,A、B组T细胞NF-KB活性很低,D组显著高于A、B组,C、E组则显著高于A、B和D组.随着接种时间推移,E组NF-KB活性一直维持较高水平,而C组呈现逐渐下降趋势,至第84天,C组和E组的T细胞NF-KB活性分别为14.01±1.04和41.16±5.78.结论 H22-CD80/CD86/CD137L+变异株接种荷瘤鼠后,CD28信号和CD137信号的协同作用可显著增强活化T细胞NF-KB活性,这可能是CD80、CD86和CD137L基因联合表达显著增强宿主CTL杀伤活性的机制之一.
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CD137/CD137L在食管癌中表达与预后的相关性分析
目的 研究食管癌中CD 137/CD 137L的表达情况,并分析两者在食管癌中表达的意义及其与预后的关系.方法 以购自上海芯超生物科技有限公司的食管癌组织芯片为研究对象,采用免疫组织化学方法检测组织芯片中87例食管癌组织及其相应的癌旁组织中CD137/CD137L的表达情况;采用x2检验或Fisher's精确检验的方法分析食管癌及癌旁组织中CD137/CD137L的表达与临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法分析CD137/CD137L的表达与食管癌患者预后的关系.结果 在87例食管癌组织和相应的癌旁组织中CD137的阳性表达率分别为36.8％和72.4％,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).在87例食管癌组织和相应的癌旁组织中CD137L的阳性表达率分别为57.5％和96.6％,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).食管癌中CD137表达阳性率与浸润深度相关(P＜0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、临床分期均不相关(P＞0.05).食管癌中CD137L表达与临床分期相关(P＜0.05),而与年龄、性别、肿瘤部位、分化程度、浸润深度均不相关(P＞0.05).CD137表达与食管癌患者的预后不相关(P=-0.6301),CD137L表达与食管癌患者的预后相关(P=0.0368).结论 CD137L的表达水平是影响食管癌患者预后的独立因素;CD 137/CD 137L可能在食管癌的抗肿瘤免疫中发挥重要作用.
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体外阻断CD137-CD137L途径控制小鼠移植物抗宿主病的研究
目的 探讨体外阻断活化的供鼠T淋巴细胞CD137-CD137L共刺激途径控制小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)及其机制.方法 供、受鼠的淋巴细胞体外混合培养,分别加入抗CD137L单抗或不加抗CD137L单抗培养后与供鼠骨髓细胞混合移植给受鼠.采用流式细胞术检测移植后受鼠T细胞亚群的变化,RT-PCR法检测细胞因子mRNA表达水平的变化,观察移植后受鼠GVHD的临床及病理改变.结果 与未用抗CD137L单抗组相比,应用抗CD137L单抗组CD3+CD8+T细胞明显降低(P＜0.01);IFN-γ表达水平明显减低(P＜0.01),IL-10的表达水平明显升高(P＜0.01).移植后未预防GVHD组(A组)小鼠移植后15 d内均死于aGVHD.采用甲氨蝶呤+环孢素预防GVHD组(B组)小鼠100%发生aGVHD,但临床及病理改变程度较A组轻,平均存活时间[(9.5±2.5)d]较A组[(7.5±1.5)d]略有延长.采用抗CD137L单抗预防GVHD组(C组)受鼠aGVHD的发生率为70%,程度比A、B两组轻,与A、B两组相比生存率明显提高(P＜0.01),平均存活时间[(16.0±2.5)d]明显延长(P＜0.01),30%的小鼠生存时间大于30 d.结论 抗CD137L单抗体外阻断CD137-CD137L共刺激途径能有效控制小鼠GVHD,可能与影响Ⅰ类和Ⅱ类T细胞因子平衡有关.
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CD137L分子在人肺癌细胞系A549上的表达及其生物学功能的研究
目的 研究共刺激分子CD137L分子在人肺癌细胞系A549上的表达及其生物学功能.方法 流式细胞术(FACS)和RT-PCR方法检测CD137L分子在A549上的表达.采用CD137-Fc融合蛋白刺激A549上的CD137L分子,ELISA实验分析细胞因子的分泌.结果 FACS实验结果显示CD137L分子表达在A549上,RT-PCR实验结果进一步证实了上述发现.ELISA实验结果显示,CD137-Fc可刺激A549IL-8的分泌.结论 A549表面CD137L分子在蛋白分子水平和mRNA水平均有表达;并可发挥调节IL-8分泌的功能.
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CD137L在非小细胞肺癌增殖、迁移、侵袭中的作用及机制
目的 研究CD137L在非小细胞肺癌中的表达,及其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,探讨其可能的分子生物学机制.方法 通过体外构建CD137L高表达慢病毒载体[A549-TC-1(+)]及CD137L-RNA干涉慢病毒载体[A549-TC-1(-)]和空白载体(A549-control),分别转染肺癌A549细胞.采用Western blot检测3组细胞CD137L蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖情况;Matrigeltranswell小室侵袭实验研究肺癌细胞侵袭能力;ELISA方法检测细胞上清IL-6和IL-8的水平.结果 Western blot结果显示:与A549细胞相比,CD137L蛋白在A549-TC-1(+)细胞中表达明显增多,A549-TC-1(-)细胞中表达明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05),在转染A549-control中无明显变化,表明3种病毒载体可用于后续实验.MTT细胞增殖实验及Matrigel Transwell小室侵袭实验结果显示:与A549-control相比,A549-TC-1(+)细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显增强,A549-TC-1(-)细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,差异均有统计学意义(P＜0.05).ELISA检测结果显示:A549-TC-1(+)细胞中细胞因子IL-6、IL-8的水平明显高于A549-TC-1(-)细胞组和正常A549细胞组.结论 CD137L对非小细胞癌细胞的增殖、侵袭具有正性调节功能,其作用机制可能与促进IL-6、IL-8的分泌进而增强肿瘤的生长、增殖和侵袭能力有关.
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CD137L在食管癌的表达及其临床病理学意义
目的：检测CD137LmRNA和蛋白在食管癌及癌旁组织中的表达，研究CD137L的表达水平与食管癌的临床病理特征、预后等临床参数之间的关系。方法应用免疫组织化学染色法及实时荧光定量PCR检测食管癌组织和癌旁正常食管黏膜组织中CD137L的表达。结果 CD137L在61例食管癌中的表达率是52.5%(32/61)，在30例癌旁组织中CD137L蛋白的表达为阴性，CD137L在食管癌组织的表达与患者的年龄、性别及是否有淋巴结转移等无明显相关性(P＞0.05)，与鳞状细胞癌的分化程度(P＝0.001)及临床分期相关(P=0.048)。18例食管癌组织中CD137LmRNA的相对表达水平为0.075±0.355，显著高于癌旁组织的0.031±0.383(P＜0.05)。结论 CD137L表达在食管癌细胞膜和细胞质，CD137LmRNA在食管癌组织中高表达，提示CD137L在食管癌发展过程中起到非常重要的作用。
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CD137L在急性髓细胞白血病中的突变表达及临床意义
目的 检测CD137L在急性髓细胞白血病细胞系及临床患者中的突变表达,为临床急性髓细胞白血病的诊断和治疗提供依据.方法 设计引物建立sCD137L突变检测方法,采用RT-PCR检测THP-1细胞CD137L的表达;收集临床AML病例,经Ficoll分离后得到单个核细胞,定性检测临床患者sCD137基因突变.结果 在THP-1细胞检测到两种sCD137L的突变类型,命名为m1 和m2.m1型突变在AML患者发生率较低;m2型突变发生率依下列次序递减:M2＞M1=M6＞M4＞M5＞M3;m2型突变与AML疾病进展密切相关(P＜0.05~0.01).结论 sCD137L变化与AML疾病发展和发生类型相关,开展临床检测sCD137L有助于监控AML的治疗和预后判断.
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hTERT启动子调控下CD137L表达载体的构建及其在卵巢癌细胞中的表达
目的 研究hTERT启动子调控下CD137L表达载体的构建及其在人卵巢癌细胞系中的表达,探讨CD137L靶向基因治疗的可行性.方法 采用RT-PCR法从K562细胞中克隆CD137L全长基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建的质粒为pcDNA3-hCD137L,用HindⅢ和Xba Ⅰ双酶切后将CD137L再定向插入pBTdel-279中,构建成hTERT启动子调控下CD137L表达载体pBTdel-279-hCD137L,采用酶切法和测序法鉴定.用Fugene6转染试剂盒将两种重组质粒分别瞬时转染人卵巢癌细胞株OVCR3和人胚肺成纤维细胞株HELF,RT-PCR和流式细胞仪检测CD137L的表达.结果 测序证实所克隆的CD137L基因序列与GENE-BANK中的序列相符.经限制性内切酶酶切,电泳后显示片段插入正确,证实构建成功.pcDNA3-hCD137L转染后OVCR3细胞和HELF细胞均可检测到CD137L的表达,但pBTdel-279-hCD137L转染后仅在OVCR3细胞中检测到其表达,在HELF细胞中无表达.流式细胞显示pBTdel-279-hCD137L转染效率低于pcDNA3-hCD137L.结论 hTERT启动子调控下CD137L表达载体构建正确,并可在卵巢癌细胞中较高表达,为探讨靶向基因治疗提供了实验依据,但hTERT启动子活性仍低于CMV启动子.
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CD137L对结肠癌细胞株Colo205生物学行为的影响
目的 探讨CD137L对结肠癌细胞株Colo 205生物学行为的影响及其在结直肠癌发生发展中的可能意义.方法 Colo 205细胞在未包被、CD137/Fc包被或IgG1Fc包被的培养板中培养24、48及72 h后,CCK-8法测定细胞增殖;培养48h后,ELISA法检测培养上清液中IL-8的浓度,transwell侵袭实验检测细胞侵袭力.结果 CD137/Fc组细胞增殖与空白组及IgG1Fc组相比均显著增强;IgG1Fc组细胞增殖情况与空白组相比差异无统计学意义.CD137/Fc组的Colo 205细胞培养上清液中IL-8的浓度为(195.3±24.3)ng/ml,显著高于IgG1Fc组及空白组(P值均为0.000);IgG1Fc组培养上清液中IL-8的浓度为(52.7±11.4)ng/ml,空白组培养上清液中IL-8的浓度为(54.7士12.5)ng/ml,两组IL-8浓度差异无统计学意义(P=0.891).侵袭实验结果示,CD137/Fc组的迁移细胞数为(105±10)个/视野,显著高于IgG1Fc组及空白组的透膜细胞数(P值均为0.000).IgG1Fc组的透膜细胞数为(57±3)个/视野,空白组透膜细胞教为(60±6)个/视野,两组差异无统计学意义(P=0.602).结论 CD137L能显著促进Colo 205细胞的增殖、IL-8分泌及增强细胞的侵袭力,CD137L可能在结直肠癌的发生进展及转移中发挥作用.
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CD137L在喉癌中的表达及其临床病理学意义
目的:检测CD137L在喉癌中的表达,探讨其在喉癌发生和发展中的作用.方法:应用免疫组织化学染色法检测50例喉癌肿瘤组织和9例癌旁正常喉黏膜CD137L的表达.结果:CD137L在50例喉癌中阳性表达率为100%,而在9例癌旁正常喉黏膜组织中CD137L蛋白表达为阴性,与癌旁正常喉黏膜组织比较,喉癌CD137L阳性表达率明显增高,差异有统计学意义(P<0.01).CD137L表达与患者年龄、性别和肿瘤生长部位无相关性,而与病理学分级、肿瘤T分期和有无淋巴结转移相关.结论:CD137L在喉癌组织的表达在喉癌发展过程中发挥重要作用.
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ABS-ELISA检测46例结直肠癌患者血清可溶性CD137L浓度
目的 建立一种灵敏、可靠的检测血清可溶性CD137L(sCD137L)浓度的方法. 方法建立链霉亲和素-生物素-ELISA检测27例结肠癌患者、19例直肠癌患者以及15例健康对照者血清sCD137L水平. 结果 46例结直肠癌患者血清sCD137L的平均浓度为(1091.48±519.32)pg/ml,显著高于健康对照组[(4.36±2.94)pg/ml](P<0.01).结论 结直肠癌患者血清sCD137L水平显著升高,血清sCD137L浓度在结直肠癌的诊断及疗效评估、预后判断中可能具有一定的临床价值.
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大肠癌组织CD137L的表达及意义
[目的] 检测大肠癌组织及癌旁组织中CD137L mRNA及蛋白的表达情况,探讨其在大肠癌发生进展中的意义. [方法] 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应及冰冻切片免疫组化的方法检测大肠癌组织及癌旁组织中CD137L的表达情况,并分析其表达情况与各临床因素的相关性. [结果] 54例大肠癌组织中CD137L mRNA的相对表达水平为 0.035 ± 0.013,显著高于癌旁组织的0.008 ± 0.005(P ＜ 0.05).但在不同性别、年龄、肿瘤发生部位、Dukes分期、病理分化及血清CEA水平情况下,CD137L mRNA的表达水平无显著性差异(P ＞ 0.05).随机抽取8例大肠癌肿瘤组织及3例癌旁组织,进行免疫组化检测,结果显示6例CD137L蛋白呈阳性表达,CD137L表达于肿瘤细胞表面;3例癌旁组织该分子的表达均为阴性.[结论] CD137L mRNA在大肠癌组织中高表达,CD137L分子表达于大肠癌肿瘤细胞表面,提示该分子可能在大肠癌的发生进展中发挥作用.
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T细胞表达CD137L分子介导对血管内皮细胞的活化刺激效应
目的探讨活化T细胞表面表达的CD137L分子对内皮细胞功能的影响.方法将活化的T细胞与内皮细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-1、IL-8的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达变化,并观察用融合蛋白CD137-Fc阻断CD137-CD137L共刺激通路后内皮细胞分泌细胞因子的变化.结果活化的T细胞刺激了内皮细胞活化,诱导了内皮细胞合成和分泌细胞因子IL-1、IL-8以及粘附分子ICAM-1的表达;可溶性融合蛋白CD137-Fc成功地阻断了CD137-CD137L的相互作用,内皮细胞合成和分泌细胞因子的能力降低.结论证明CD137-CD137L的相互作用在内皮细胞与T细胞的相互作用中发挥了重要的作用,提示CD137与其配体交联具有刺激内皮细胞活化的生物学功能.
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内皮细胞表达CD137分子介导对T细胞的抑制效应
目的研究内皮细胞表达的CD137分子与活化的T细胞表达的CD137L交联后对T细胞的刺激效应.方法将活化的内皮细胞与活化的T细胞共培养,ELISA检测共培养上清中IL-2、IL-10和IFN-γ的含量;流式细胞仪检测内皮细胞表面标志分子CD25、CD69的表达变化;CCK-8试剂盒检测T细胞存活率,并观察用融合蛋白抗-CD137阻断CD137-CD137L共刺激通路后T细胞分泌细胞因子的变化.结果采用细胞共培养后,T细胞分泌IL-2、IL-10和IFN-γ的水平下降,而且CD25、CD69的表达水平降低,T细胞存活率下降,应用抗-CD137单克隆抗体阻断CD137-CD137L相互作用后,IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌水平升高,CD25、CD69的表达上调,T细胞存活率上升.结论活化的内皮细胞诱导表达CD137蛋白分子与活化的T细胞上诱导表达的CD137L相互作用,通过CD137L向T细胞内传递抑制信号,抑制了T细胞合成和分泌细胞因子的功能.表明CD137-CD137L信号通路在内皮细胞与T细胞的信号作用中有着重要的地位.
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CD137L突变体在咽喉癌及癌旁组织的表达及意义
目的：探讨咽喉癌CD137L两种突变体的表达水平和临床意义。方法：对70例咽喉癌组织芯片，通过免疫组织化学的方法，采用不同抗体，测定其CD137L N端和C端表达情况。Image-Pro Plus软件中的Pa-thology批处理程序计算各病例的IOD值。结果：咽喉癌病理组织中，CD137L N端表达阳性占87．7％，C端表达阳性占78．5％。喉癌及癌旁组织之间相比均有显著差异（P＜0．01）。其表达情况与年龄、性别及肿瘤生长部位无显著相关性，与病理类型和肿瘤分级有一定相关性。在不同的咽喉癌患者，两种抗体检测的IOD值差值显著不同。结论：CD137L突变体的表达在不同患者呈现不同特点，其发生剪接突变的比率和机制不同。
