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乙酰葛根素对大鼠脑缺血再灌注VEGF表达的影响
目的 探讨脑缺血再灌注后乙酰葛根素的脑保护作用及其机制.方法 线栓法制作脑缺血再灌注模型,分别对假手术组、脑缺血再灌注组、葛根素组、乙酰葛根素低(10 mg·kg-1)、中(50mg·kg-1)、高剂量(250mg·kg-1)干预组实验标本作HE染色,采用免疫组化方法观察测定各组大鼠脑内的VEGF的表达情况并进行神经功能缺损评分.结果 脑缺血再灌注组与假手术组比较,VEGF表达增多(P<0.01),药物干预组较缺血再灌注组VEGF表达均增多(P<0.01),且神经元损伤较轻,且三个剂量的表达有显著差别(P<0.01).结论 乙酰葛根素对脑缺血再灌注有明显的保护作用,诱导VEGF表达可能是其对脑缺血再灌注损伤起保护作用的机制之一.
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乙酰葛根素对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响及机制研究
目的:探讨脑缺血再灌注后乙酰葛根素的脑保护作用及其机制.方法:线栓法制作脑缺血再灌注模型,为假手术组、脑缺血再灌注组、胞磷胆碱组(0.6 mg·kg-1)、乙酰葛根素低、中、高剂量(10,50,250 mg·kg-1),ig 10 d干预组.采用TUNEL法检测脑组织细胞凋亡情况,采用免疫组化方法观测各组大鼠脑内PI3-K(磷脂酰肌醇-3-激酶)和Akt(丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶)的表达情况并进行神经功能缺损评分.结果:乙酰葛根素3个剂量组神经功能评分比模型组显著改善(P＜0.01),凋亡细胞数也显著下降(P＜0.01),脑组织PI3-K和Akt表达显著升高(P＜0.01),且呈量效关系,高剂量组较胞磷胆碱组疗效显著(P＜0.05).结论:激活PI3-K/Akt信号通路可能是乙酰葛根素减少神经细胞凋亡、起到神经保护作用的机制之一.
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乙酰葛根素对Aβ25-35诱导BV-2小鼠小胶质细胞株caspase-8和caspase-3表达的影响
目的 观察乙酰葛根素对β淀粉样蛋白(Aβ25.35)诱导的BV-2小鼠小胶质细胞株caspase-8和caspase-3表达的影响.方法 将细胞分为对照组、模型组(采用凝聚态Aβ25-35刺激BV-2小鼠小胶质细胞株建立细胞模型)、乙酰葛根素低、中、高剂量干预组及caspase-8抑制剂(Z-IETD-fmk)组共6组.用Western blot检测caspase-8、caspase-3蛋白表达;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测caspase-8、caspase-3 mRNA表达.结果 与对照组相比,模型组caspase-8、caspase-3蛋白表达明显上调(P＜0.01),caspase-8、caspase-3基因表达明显增加(P＜0.01);与模型组相比,乙酰葛根素各剂量组均可不同程度地明显下调caspase-8、caspase-3蛋白表达(P＜0.01),明显抑制caspase-8、caspase-3基因表达(P＜0.01).结论 乙酰葛根素可剂量依赖性地抑制Aβ25-35诱导BV-2小鼠小胶质细胞株caspase-8、caspase-3的表达.
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乙酰葛根素对阿尔茨海默病大鼠蛋白激酶C-δ及白细胞介素-6表达的影响
目的 研究乙酰葛根素对β-淀粉样肽1-42(Aβ1-42)海马立体定位注射所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的药物作用和对炎症因子蛋白激酶C-δ(PKC-δ)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响.方法 将40只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、乙酰葛根素低、高剂量组.用Aβ1-42双侧海马注射制备AD大鼠模型,Morris水迷宫测定不同时期各组大鼠的学习记忆能力,ELISA测定血清IL-6含量的变化,Western blotting测定PKC-δ表达的变化.结果 模型大鼠应用Aβ1-42注射14d后,Morris水迷宫逃避潜伏期与术前及对照组比较显著延长,穿越平台次数显著减少(P＜0.01)；应用乙酰葛根素10d后,血清中IL-6的表达量模型组显著高于对照组、乙酰葛根素低、高剂量组(P＜0.01)；海马匀浆中PKC-δ的表达量模型组显著高于对照组、乙酰葛根素低、高剂量组,乙酰葛根素低、高剂量组表达仍高于对照组(P＜0.05).结论 乙酰葛根素能显著改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,对阿尔茨海默病有显著的预防和保护作用,机制可能与调控PKC-δ/Caspase通路,抑制β-淀粉样肽的神经毒性,降低PKC-δ、IL-6的表达,从而发挥抗痴呆的作用.
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乙酰葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑组织及血清NO和NOS的影响
目的观察乙酰葛根素对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤的NO保护作用.方法采用大脑中动脉内拴线阻断法(MCAO)造成大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,测定脑组织匀浆和血清中NO含量及NOS水平的变化,并进行病理组织学观察.结果脑缺血再灌注24,48 h后,模型组脑组织匀浆中NO,NOS活性及血清中NO水平较对照组均有显著性升高(P＜0.01),给药组能降低其水平,且与模型组相比有显著性差异(P＜0.05).结论乙酰葛根素能通过降低NO毒性,发挥脑保护作用,减轻缺血再灌注损伤.
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乙酰葛根素在大鼠体内的药动学研究
目的 考察乙酰葛根素ig和iv给药后葛根素在大鼠体内的药动学特征.方法 大鼠ig给予400 mg/kg或尾iv给予160 mg/kg乙酰葛根素.采用高效液相色谱(HPLC)法检测血浆样品中葛根素.结果 乙酰葛根素在大鼠体内代谢为葛根素,葛根素药动学过程符合二室模型,主要药动学参数:ig给药葛根素AUC0～∞为(44.76±4.13) mg·h·L-1,iv给药葛根素AUC为(36.67±5.3) mg·h·L-1,ig给予乙酰葛根素后大鼠体内葛根素的暴露水平(生物利用度)为48.12％,ig给药的Cmax为(12.07±0.15) μg/mL,tmax(1±0.33)h,t1/2为(2.52±0.21)h.结论 HPLC法可作为乙酰葛根素在大鼠体内药动学的检测手段,ig乙酰葛根素后,葛根素在大鼠体内的暴露水平得到显著提高.
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乙酰葛根素参与大鼠脑缺血再灌注保护作用的抗凋亡介导机制研究
目的 研究乙酰葛根素对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及其相关机制.方法 采用线栓法建立体内脑缺血再灌注模型.TTC染色缺染区面积表示梗死体积的大小,Western blot法测定beclin-1、bcl-2和bcl-xl蛋白的含量及乙酰葛根素对其影响.结果 与模型组相比,乙酰葛根素可以减小梗死体积;降低beclin-1的表达,同时增加Bcl-2、Bcl-xl蛋白的表达,并呈浓度依赖性.结论 乙酰葛根素通过升高抗凋亡相关蛋白发挥对脑缺血再灌注模型鼠的保护作用.
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乙酰葛根素对血管紧张素Ⅱ致血管内皮细胞凋亡的抑制作用
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在不同浓度和不同作用时间下,对血管内皮细胞凋亡及凋亡调控基因的作用及乙酰葛根素对血管内皮细胞凋亡的抑制作用.方法 采用流式细胞学技术,观察乙酰葛根素对AngⅡ致血管内皮细胞凋亡、Fas和Bcl-2表达的影响.结果 AngⅡ可明显促进血管内皮细胞凋亡及Fas和Bcl-2的表达,且其作用呈剂量依赖性和时间依赖性;乙酰葛根素抑制AngⅡ引起的血管内皮细胞凋亡及Fas和Bcl-2的表达.结论 乙酰葛根素明显抑制AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡和凋亡调控基因表达.
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乙酰葛根素对氧糖剥离诱导海马神经元凋亡的影响
目的 研究新型异黄酮类化合物乙酰葛根素对氧糖剥离神经元的保护作用及其机制.方法 采用氧糖剥离建立细胞模型.DAPI法观察神经元凋亡率,RT-PCR法检测NF-κBp65、HIF-1α及p53mRNA的表达,Western blot法测定Hsp70蛋白的含量及乙酰葛根素对其的影响.结果 与模型组相比较,乙酰葛根素可以减少凋亡细胞数;降低NF-κBp65、HIF-1α及p53mRNA表达;乙酰葛根素(低,中和高浓度组) 增加Hsp70蛋白的表达.结论 乙酰葛根素降低NF-κBp65、HIF-1α、p53的表达和升高Hsp70蛋白表达.
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乙酰葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后一氧化氮和内皮素生成的影响
目的:探讨乙酰葛根素在脑缺血再灌注损伤后对一氧化氮(NO)和内皮素(ET)生成的影响.方法:采用大脑中动脉内栓线阻断法造成大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(假手术组除外)后,随机将实验大鼠分为6组,连续灌胃给药10 d:损伤组[生理盐水5 ml/(kg·d)];对照组[葛根素50 mg/(kg·d)];乙酰葛根素高、中、低剂量组[乙酰葛根素250、50、10 mg/(kg·d)];假手术组[生理盐水5 ml/(kg·d)].采用生化法测定脑缺血1 h再灌注24 h及48 h大鼠脑组织匀浆和血清中NO水平,用放射免疫法测定血浆中ET水平,并进行脑组织病理学检查.结果:损伤组大鼠脑缺血1 h再灌注24 h及48 h,脑组织匀浆和血清NO、血浆ET水平均明显高于假手术组(P＜0.01);与损伤组相比,高、中、低剂量乙酰葛根素组血浆ET及脑组织匀浆NO水平显著降低(P＜0.05),血清NO再灌注24 h也明显降低(P＜0.01);高、中剂量乙酰葛根素组再灌注48 h血清NO显著降低(P＜0.01).结论:乙酰葛根素可减少脑缺血再灌注损伤后期不同时间段NO和ET的生成,提示,乙酰葛根素对局灶性脑缺血灌注损伤具有一定的保护作用.
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乙酰葛根素对Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞Caspase-3表达的影响
目的 探究乙酰葛根素对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导BV-2小胶质细胞形态及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)表达的影响.方法 用凝聚态Aβ25-35诱导体外培养的BV-2小胶质细胞作为阿尔茨海默病炎症细胞模型,将细胞分为对照组、模型组、Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-fmk)组以及乙酰葛根素低(0.1 μmol/L)、中(0.4 μmol/L)、高(1.6 μmoL/L)剂量共6组,采用倒置相差显微镜观察小胶质细胞形态变化,应用Western blotting检测Caspase-3蛋白表达水平.结果 形态学结果显示,Aβ25-35可激活小胶质细胞使其由静息态变为阿米巴样,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素可改善Aβ25-35诱导的小胶质细胞形态改变.Western blotting结果显示,与对照组相比,模型组Caspase-3表达显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素各剂量组Caspase-3表达均显著降低(P＜0.01);与Caspase-3抑制剂组相比,乙酰葛根素低、中剂量组Caspase-3表达均显著升高(P＜0.01),高剂量组则无统计学意义.结论 乙酰葛根素可抑制Aβ诱导BV-2小胶质细胞激活,其机制可能与降低Caspase-3表达有关,且以高剂量组效果较好.
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乙酰葛根素对 Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞形态及 TNF-α的影响
目的：研究乙酰葛根素对Aβ25-35诱导的BV-2小胶质细胞的形态、TNF-α蛋白及基因表达的影响。方法将BV-2小胶质细胞进行培养，用Aβ25-35诱导小胶质细胞建立细胞模型，加入不同浓度的乙酰葛根素，使用倒置相差显微镜观察BV-2小胶质细胞的形态、Western blot 检测TNF-α蛋白表达水平、荧光定量PCR检测TNF-αmRNA表达。结果乙酰葛根素可以抑制Aβ25-35诱导的BV-2小胶质细胞的激活，降低TNF-α蛋白及mR-NA的表达（ P＜0．05）。结论乙酰葛根素对Aβ25-35诱导的BV-2小胶质细胞可以发挥一定的保护作用，本研究为阿尔茨海默病（ AD）的药物治疗提供了实验依据。
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乙酰葛根素对 Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞活性的影响
目的：研究乙酰葛根素对β淀粉样蛋白（ Aβ25-35）诱导的BV-2小胶质细胞活性的影响。方法体外培养BV-2小胶质细胞，用Aβ25-35诱导小胶质细胞建立AD细胞模型，加入不同浓度的乙酰葛根素，显微镜下观察细胞的形态变化；MTT法检测细胞的存活率；ELISA法检测细胞中IL-1β，TNF-α的含量。结果 Aβ诱导后小胶质细胞由分枝状的静息状态转变为阿米巴样的激活状态，而乙酰葛根素可以减轻细胞发生的变化，细胞状态介于空白组与模型组之间；MTT显示乙酰葛根素不会对小胶质细胞的存活率产生影响；ELISA结果显示，与空白组相比，模型组的IL-1β，TNF-α表达水平明显升高，而乙酰葛根素能够降低Aβ诱导IL-1β，TNF-α的表达水平。结论乙酰葛根素能够抑制Aβ25-35诱导的小胶质细胞激活减轻炎性因子的分泌，对阿尔茨海默病具有保护作用。
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乙酰葛根素对大鼠脑缺血再灌注后C-fos和ICAM-1表达水平的影响
[目的]研究乙酰葛根素对大鼠脑缺血再灌注后原癌基因(C-fos)、细胞间粘附分子-1 (ICAM-1)表达水平的影响.[方法]采用腔内线栓法制备急性大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,选用健康Wistar大鼠105只,随机分为6组:正常对照组(5只)、假手术组(20只)、缺血再灌注模型组(20只)、高剂量药物组(20只)、中剂量药物组(20只)、低剂量药物组(20只).其中假手术组、缺血再灌注模型组及高、中、低剂量药物组按照缺血再灌注后2、6、12、24h四个不同时间点分为4个亚组(n=5).高、中、低剂量药物组于术前分别给予不同剂量的乙酰葛根素腹腔内注射,于缺血再灌注后按时间点取材,常规HE染色并在光学显微镜下观察各组脑组织病理形态学改变,应用免疫组化法检测C-fos及ICAM-1的表达水平.[结果]缺血再灌注模型组与假手术组比较,C-fos、ICAM-1表达均升高(P＜0.01),高、中、低剂量药物组较缺血再灌注模型组C-fos、ICAM-1表达均明显下降(P ＜0.01或P＜0.05),且神经元损伤较轻.[结论]乙酰葛根素对脑缺血再灌注有明显的保护作用,其机制可能是与在脑缺血急性期抑制了C-fos、ICAM-1的表达有关.
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乙酰葛根素对Aβ25-35诱导的BV-2小胶质细胞NF-κBp65和iNOS表达的影响
目的:研究乙酰葛根素对β-淀粉样蛋白诱导的小鼠BV-2小胶质细胞核转录因子-κBp65和诱导型一氧化氮合酶表达的影响.方法:体外培养小鼠BV-2小胶质细胞,用凝聚态β-淀粉样蛋白(amyloid-β25-35,Aβ25-35)诱导小胶质细胞活化建立阿尔茨海默病炎症细胞模型.实验细胞随机分为6组:空白对照组,Aβ25-35组,Aβ 25-35+乙酰葛根素(浓度分别为:0.1,0.4,1.6 μmol/L)剂量组和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)抑制剂(Z-DEVD-fmk)组.在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;硝酸还原酶法检测乙酰葛根素对一氧化氮(nitric oxide,NO)的影响;利用Western Blot分析乙酰葛根素对NF-κBp65和iNOS蛋白表达的影响;通过Real-time PCR分析乙酰葛根素对NF-κBp65和iNOS基因表达的影响.结果:Aβ25-35诱导后小胶质细胞由静息状态转变为阿米巴样,乙酰葛根素可减轻细胞发生的形态改变.乙酰葛根素呈剂量依赖性的抑制炎性因子NO的产生,抑制NF-κBp65和iNOS的表达.结论:乙酰葛根素可以改善BV-2小胶质细胞的形态变化,减轻BV-2小胶质细胞的炎性反应,其机制可能与其抑制NF-κB信号通路的激活有关,且具有剂量依赖性.
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乙酰葛根素对氧糖剥离致神经元损伤的干预作用
本文主要通过三组实验来研究乙酰葛根素氧糖剥离对神经细胞损伤的干预作用。研究方法在氧糖剥离的基础上建立细胞模型；利用6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）法观察神经细胞的凋亡率；利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测细胞核因子（或称为K基因结合核因子）、蛋白质（HIF-1α）以及P53基因的表达；利用蛋白印迹法或免疫印迹的实验方法测定热休克蛋白70（Hsp70）的含量以及三种不同浓度的乙酰葛根素对热休克蛋白70的影响。
