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吉非替尼对斑马鱼胚胎发育及肿瘤耐药基因表达的影响
目的 研究吉非替尼对斑马鱼早期胚胎发育及abcb4肿瘤耐药基因表达的影响.方法 实验动物采用斑马鱼,实验分为吉非替尼组、阿霉素和吉非替尼的混合液组、空白对照组.将吉非替尼稀释成不同浓度梯度的药液,分别处理受精后0.5～1.5 h(0.5～1.5 hpf)的斑马鱼胚胎,观察胚胎和幼鱼的死亡率、孵化率及畸形率变化.统计各浓度不同时间点的胚胎死亡率,计算出IC50的数值;统计48 hpf和72 hpf的胚胎孵化率及120 hpf的畸形率;收集不同组别的斑马鱼胚胎,通过实时荧光定量PCR,检测斑马鱼胚胎中abcb4基因的表达量.结果 计算出吉非替尼在斑马鱼胚胎中的IC50为16.18 μmol/L.与对照组比较,高剂量吉非替尼(≥20 μmol/L)显著抑制胚胎的孵化,并有明显的胚胎致死效应和致畸效应;吉非替尼组的斑马鱼胚胎abcb4基因的mRNA水平变化不显著,而阿霉素和吉非替尼的混合液组的abcb4基因的mRNA水平有明显变化(P＜0.05).结论 吉非替尼对斑马鱼早期胚胎中abcb4肿瘤耐药基因的表达水平无明显影响(P＞0.05),但是吉非替尼能逆转易耐药药物阿霉素的耐药作用,提示使用斑马鱼可以构建肿瘤耐药模型.
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二合一银杏水的生殖毒性和诱变性研究
目的:研究二合一银杏水的生殖毒性和诱变性.方法:采用8000、40000和200000ml.kg-1三个剂量组、一个阴性对照组和一个敌枯双阳性(0.5ml.kg-1)对照组,进行了SD大鼠传统致畸试验;微核试验设5000、10000和20000ml.kg-1三个剂量组,连续染毒5d后,常规制片观察微核千分率和骨髓抑制情况;雄性小鼠精子畸形试验的三个剂量组为8000、40000和200000ml.kg-1,连续染毒5d,于首次染毒后第35d处死动物,常规观察畸形精子率及其畸形类型构成比.Ames试验采用试验菌株TA97、TA98、TA100和TA102进行了加与不加S9的标准平板掺入法试验,设0.02、2、10和50μl/皿四个剂量组.结果:二合一银杏水对孕母鼠的体重和妊娠均无影响;除了高剂量组有可能引起大鼠胎鼠骨化迟缓增加外,未见其他发育毒性;对小鼠骨髓细胞无抑制作用,微核试验获阴性结果(P＞0.05);小鼠精子畸形试验和Ames试验亦均获阴性结果.结论:二合一银杏水在大鼠传统致畸试验中,对孕母鼠无毒性,对胎仔无发育毒性;小鼠骨髓细胞微核试验、精子畸形试验、Ames试验均获阴性结果.在体内外试验中、体细胞和生殖细胞中均未见诱变性和发育毒性,与有关报道基本一致.
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多水平统计模型在发育毒性实验研究中的应用
目的:探讨多水平统计模型在发育毒性实验研究资料分析中的应用.方法:根据发育毒性实验研究资料存在层次结构的特点,探讨了两水平方差成分模型在此类资料中的应用.结果:获得"窝别效应"及其标准误的估计,以及在考虑了"窝别效应"之后处理因素作用有无及其大小的估计.结论:对于发育毒性实验研究资料,多水平统计模型能估计出考虑了"窝别效应"之后的处理因素作用大小,使得实验结果评价更客观.
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城市生活污水对水生动物斑马鱼的发育毒性研究
[目的]探讨城市生活污水对斑马鱼的毒性效应.[方法]利用斑马鱼作为受试对象,在实验室控制条件下,观察不同浓度的生活污水对斑马鱼的发育毒性.[结果]在早期生命阶段,高浓度的生活污水对斑马鱼有急性毒性效应.在性发育阶段,暴露组雄鱼的体长(F=5.85.P<0.05)和体重均高于对照组(F=5.85,P<0.05),并随污水浓度增高而增加;暴露组雌性个体的性腺指数明显高于对照组(F=5.94,P<0.01),且随污水浓度的升高而增加.在整生命期暴露期.暴露组雌鱼卵子教、体长和体重均低于对照组;雌鱼的性腺指数有所增高,而雄鱼的却略微降低.[结论]城市生活污水可能对水生动物的各个发育阶段产生生殖毒性.
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维生素C对重铬酸钾发育毒性拮抗作用研究
本实验应用大、小鼠全胚胎培养方法研究维生素C拮抗重铬酸钾对大、小鼠胚胎的发育毒性.结果表明,10倍于重铬酸钾浓度的维生素C可有效地拮抗重铬酸钾对大、小鼠胚胎的发育毒性.加入维生素C后,重铬酸钾浓度分别在15mg·L-1和18mg·L-1以上时才对大、小鼠胚胎生长发育及形态分化有明显的影响.而在未加入维生素C时,重铬酸钾浓度在0.5mg·L-1和1.5mg·L-1,即可影响大、小鼠胚胎的生长发育.表明维生素C可有效地拮抗重铬酸钾对大、小鼠胚胎的发育毒性.
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城市生活垃圾健康危害研究进展
人类目前正承受着垃圾处理的巨大压力,特别是城市垃圾的问题已严重困扰城市.垃圾对人们日常生活特别是身体健康方面的影响也越来越受到重视.本文就垃圾产生遗传毒性,发育毒性甚至诱发肿瘤等方面的研究展开综述.
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吡嗪酰胺对斑马鱼胚胎发育和氧化应激效应的影响
目的 本文研究吡嗪酰胺(PZA)对斑马鱼胚胎的发育毒性及其产生机制.方法 采用受精后4h的斑马鱼胚胎进行吡嗪酰胺不同浓度的暴露,分别于暴露后24、48、72和96h进行死亡率、孵化率的统计.给药96h后进行斑马鱼幼鱼形态评分、行为学分析、活性氧簇(ROS)和氧化应激指标检测.结果 表明吡嗪酰胺显著抑制斑马鱼胚胎孵化,导致斑马鱼幼鱼发育畸形(如卵黄囊吸收迟滞、鱼鳔缺失、心包水肿和体节模糊等),同时吡嗪酰胺的暴露造成斑马鱼幼鱼运动行为能力的降低.吡嗪酰胺的暴露能够引起斑马鱼体内ROS、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平的变化.结论 吡嗪酰胺对斑马鱼胚胎有明显的发育毒性,并呈剂量和时间依赖性,氧化应激在吡嗪酰胺发育毒性中起着重要的作用.
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盐酸西部曲明对小鼠生殖发育毒性的实验研究
目的研究新药盐酸西部曲明在小鼠妊娠后期、分娩及哺乳期内摄入是否对母代妊娠、分娩、授乳,胎仔发育后期、幼仔新生期存活和生长发育有不良影响.方法孕鼠随机分为32 mg/kg、2.83 mg/kg、0.25 mg/kg三个受试物组和一个阴性对照组.母鼠从妊娠15 d到分娩后21 d持续饮水内给药.观察并记录孕鼠的一般状况、分娩情况、哺乳情况,出生后仔鼠的窝平均生长指数、生理发育情况和神经行为发育情况等指标.结果各受试物组与对照组相比较,一般状况、母鼠死亡率、异常分娩率、出生存活率、哺乳存活率、子代生长指数、子代各项生理发育指标、行为发育指标和断乳后食物利用率均无显著性差异(P＞0.05). 结论盐酸西部曲明对小鼠生殖发育、神经行为发育没有不良影响;但在大大高于临床预期用药量的高剂量下,盐酸西部曲明可能有一定的母体毒性.
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锌缺乏与过量对体外培养的小鼠胚胎肢芽发育的影响
目的:观察锌缺乏与过量对体外培养的小鼠胚胎肢芽发育的影响,为锌的合理营养提供实验依据.方法:应用恒温旋转胚胎培养葙对12 d孕龄小鼠胚胎前肢芽进行培养,观察锌缺乏与过量对胚胎肢芽发育的影响,并进行Neubert评分.结果:锌浓度为43.0～ 86.0 μmol/L时,对胚胎肢芽发育具有明显的促进作用；锌缺乏(0.0 μmol/L)能导致胚胎肢芽发育评分下降,肢芽细胞分化,组织器官形态分化均受到不同程度抑制；辞过量(172.0～215 μmol/L以上)时,能使VYS血管形成及神经系统、心脏、肢芽的器官形态分化受抑,所有生长发育和组织器官形态分化指标值均明显低于对照组(P＜0.05)；肢芽各软骨的发育分化差,Neubert评分少.结论:锌缺乏和锌过量均可影响小鼠胚胎肢芽的发育和分化.
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外来化合物氰戊菊酯(杀虫剂)、苯对小鼠精子畸形率影响的观察和研究
目的 以小鼠精子正常形态学的改变来判断受试化合物对精子的毒性作用.方法 采用雄性昆明种小鼠随机分组.通过分析统计实验组与对照组小鼠精子畸形率以确定受试化合物是否对精子有损害,双盲法操作.结果 实验 (1)组小鼠精子畸形率(34.75±10.34)‰,实验 (2)组小鼠精子畸形率(39.11±6.95)‰,对照组小鼠精子畸形率(16.64±4.95)‰.实验组与对照组小鼠精子畸形率(P<0.05)存在明显差别.结论 氰戊菊酯、苯对小鼠精子具有畸变作用.
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不同水平锌缺乏对大鼠胚胎心脏发育的影响
目的 探讨缺锌对大鼠胚胎心脏的发育毒性及其作用阈剂量和荆量-效应关系.方法 50只健康清洁级SD雌性大鼠,随机分成5组:1极低锌组,2低锌组,3中等低锌组,4边缘低锌组,5常锌组,分别饲以不同含锌量的饲料.锌耗竭性饲养25天后交配,孕第19天时活杀取胚鼠,通过切片观察胚胎心脏畸形情况.结果 各低锌组血锌值和血清碱性磷酸酶活性显著低于常锌组(血锌比较,t值分别为49.44、27.92、21.10、8.14,均P<0.05;血清碱性磷酸酶比较,t值分别为86.79、52.37、38.32、13.35,均P<0.05).同等条件下血清碱性磷酸酶活性变化更为明显.极低锌组、低锌组和中等低锌组与常锌组相比,胚心畸形率均明显增高(X2分别为35.62、16.93、5.91,均P<0.05);边缘低锌组与常锌组间比较则无显著性差异X2=0.00,P>0.05).胚心畸形主要表现为发育延迟、心房缺如、室间隔缺损、心室缺损等.结论 血清碱性磷酸酶活性是反映体内锌水平的敏感指标,与血锌值结合能较准确地反映体内的锌水平.母体中等以上低锌能增加胚心畸形的发生,孕鼠低锌对胚胎的毒性作用存在较明显的剂量-效应关系.
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甲氧滴滴涕对孕鼠生殖及其胎鼠发育的影响
目的:研究甲氧滴滴涕(MXC)染毒对孕小鼠生殖和胎鼠发育的影响.方法:将交配成功的雌鼠于孕12～17 d每日给予不同剂量的MXC(0,20,100,200 mg/kg)灌胃,并设芝麻油溶剂为对照组,观察各组孕鼠体质量和黄体等计数测定,同时观察各组F1子代仔鼠的体质量和肛门生殖器距离等,采用放射免疫法检测孕鼠血清雌二醇(E2)和孕酮(P)含量.结果:生殖影响:随染毒剂量增加,母鼠子宫着床数减少,雄性胎鼠肛殖距(AGD)缩短,孕鼠血清中E2和P水平升高,呈不同剂量间差异,具有统计学意义(P＜0.05).发育影响:随染毒剂量增加孕鼠体质量增长减少,活胎数下降,不良妊娠结局(死胎、吸收胎数)增多,呈不同剂量间差异,具有统计学意义(P＜0.05).结论:MXC可干扰孕小鼠的生殖功能,导致生殖和胎仔发育毒性.
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应用小鼠胚胎体外培养技术研究氟的胚胎发育毒性
目的探讨无机氟的发育毒性及机理.方法妊娠8.5 d大鼠胚胎于体外旋转培养系统中给予不同剂量的氟化钠,培养48 h后,测定卵黄囊直径,胚胎体长和头长,用Maele-Fabry形态学评分系统进行器官形态评分,评价胚胎器官分化发育情况.结果随着氟剂量的增加,反映胚胎生长发育和器官分化的各项指标呈现出下降趋势,有一定的剂量效应关系.其中,卵黄囊及血管网发育分化对氟较敏感,剂量为5.0mg·L-1时与对照比较已有显著性差异.大于或等于10.0 mg·L-1时对多数指标影响显著,Maelele-Fabry形态学总评分与对照相比呈现显著差异.胚胎畸形发生率在剂量为15.0 mg·L-1明显升高,主要表现为神经管闭合不全和体翻转不全.结论无机氟有潜在的致畸性和发育毒性.
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牛蒡子苷元对大鼠和家兔的胚胎-胎仔发育毒性研究
目的 以受精大鼠和家兔为实验系统,评价牛蒡子苷元对动物胚胎-胎仔发育的影响,为其药用价值的进一步开发提供参考.方法 100只受精雌鼠分为溶媒对照组和牛蒡子苷元高、中、低剂量(64、16、4 mg/kg)组,每组25只;72只受精雌兔分为溶媒对照组和牛蒡子苷元高、中、低剂量(25、10、4 mg/kg)组,每组18只.全部动物于妊娠第6天(GD6)开始给药,每天ip给药1次,大鼠连续给药至GD15,停药至GD20解剖检查,家兔连续给药至GD18,停药至GD29解剖检查.试验期间,每天观察动物一般状态,定期检测动物体质量和摄食量,解剖时计数卵巢黄体数量、检查着床数和活胎数,测量活胎顶臀长和尾长,检查活胎外观、内脏和骨骼.结果 给药期间,动物除给药方法导致的注射部位炎症反应外,其他未见异常体征变化;与溶媒对照组比较,牛蒡子苷元未引起大鼠和家兔体质量异常增长;母本动物受孕率、平均黄体数量和受精卵着床丢失率也未见异常改变;窝均活胎率、死胎率和吸收胎率,胎仔顶臀长和尾长也未见明显改变;也未见受试物导致的胎仔外观、内脏和骨骼畸形.结论 牛蒡子苷元未见潜在的大鼠和家兔胚胎-胎仔发育毒性.在本试验条件下,牛蒡子苷元大鼠和家兔胚胎-胎仔发育毒性的无明显损害作用剂量(NOAEL)分别为64和25 mg/kg.
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新药生殖发育毒性安全性评价的仪器确认要点
围绕药品非临床研究质量管理规范(GLP)体系下生殖发育毒性评价所使用仪器确认展开讨论,提供开展仪器确认所需要的关键事项:根据研究目的,选取合适种属的实验动物;动物数量应满足统计学需求;准确选取实验受试物,购入标准品或阳性药物;确定实用性强、干扰因素少的确认方法;把握实验关键点、排除其他因素对确认的干扰;建立准确度高可重现性好的评价标准;根据实验室基本情况以及研究目的,在标准作业程序(SOP)中规定不同仪器确认所需要的周期.现有生殖毒性仪器确认规范性、标准化成为实验室管理的新难点,需要努力推进其标准化规范化进程.
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药物发育毒性体外替代方法研究进展及组合策略
随着3Rs原则的实施,药物非临床生殖发育毒性研究中的整体动物试验面临严重挑战,体外替代研究逐步成为研究热点.生殖发育毒性周期长,涵盖面广,现有的任何一种体外方法无法全面模拟药物在体内作用的全过程,无法全面反映其对于生殖发育周期中性成熟、受精、配子发生、合子发育、出生后发育及性功能等方面的影响.形成一套完整的生殖发育毒性体外替代法评价是解决体外替代法预测结果接近体内检测结果的关键,在整合体外替代研究时,应考虑体细胞与生殖细胞,不同进化阶段的物种,多个生殖毒性周期,体内外代谢活化差异等因素.根据受试物特性、分布、用途、适用范围,其他毒理学实验及毒代动力学资料,技术水平,管理部门的要求等特点进行实验设计,通过一系列反应不同试验终点的组合实验(Integrated testing strategy,ITS)综合评定药物体外生殖发育毒性,但目前尚无合理的组合方案.对生殖发育毒性体外试验研究进展及应用策略需考虑要点进行综述,以推动替代技术在药物非临床安全性评价中的应用.
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FDA《药物雄性介导发育毒性风险评估指导原则》介绍
美国食品药品监督管理局(FDA)于2015年6月发布了《药物雄性介导发育毒性风险评估指导原则》(草案),阐述了当前FDA对男性人群使用药物后产生的潜在相关发育毒性风险评估的策略与方法,拓展了对传统雄性生殖与发育毒性的认识与评价.该指导原则对于指导研究者进行药物临床和非临床雄性生殖与发育毒性评价具有重要意义,而我国目前对此类毒性风险尚未特殊关注.简介该指导原则主要内容,以供研究者参考.
关键词： 美国食品药品监督管理局(FDA) 发育毒性 雄性介导 药物 指导原则 -
孕期糖皮质激素暴露对子代睾丸发育影响的研究进展
睾丸是雄性机体调控生殖内分泌功能的重要器官.孕期母体摄入的过量合成类糖皮质激素(GC),或遭受内外环境剧变而产生的大量内源性GC,可通过胎盘进入胎儿体内,而过量的GC对睾丸发育具有抑制作用并可延续到出生后.其发生主要与宫内神经内分泌系统和局部因子的调节不当有关,并与表观修饰改变密切相关.本综述概述了GC的睾丸发育毒性,为指导优生优育、生殖健康并制定调节生殖内分泌系统功能策略奠定了基础.
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2,4-二氯苯氧乙酸对初断乳SD大鼠生殖器官发育的影响及相关机制
目的:研究2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)对初断乳SD大鼠生殖器官发育的影响及相关机制.方法:3周龄SPF级SD大鼠80只,随机分为溶剂对照组(1％羧甲基纤维素)和18.125、36.25、72.5 mg/kg 3个2,4-D染毒组,每天经口灌胃1次,连续染毒28 d.试验期间观察并记录动物一般行为,体质量变化及阴道开口时间等指标.染毒结束后,取睾丸、附睾、子宫、卵巢计算湿质量及脏器系数;采用全自动生化仪检测血清中卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)和胆固醇的含量;采用苏木精-伊红染色法(HE)对大鼠睾丸、附睾、卵巢、子宫进行病理学检测.结果:与对照组比较,至染毒28 d结束时,36.25 mg/kg 2,4-D染毒组雄鼠、72.5 mg/kg组雄鼠和雌鼠体质量均明显降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05);36.25 mg/kg 2,4-D染毒组阴道开口时间提前,72.5 mg/kg2,4-D染毒组阴道开口时间延迟且阴道开口率较低,差异具有统计学意义(P＜0.05);72.5mg/kg染毒组血清T水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05);72.5 mg/kg组雌性SD大鼠胆固醇含量增加,差异有统计学意义(P＜0.05);36.25 mg/kg组雌性大鼠血清中E2含量明显增加,而72.5 mg/kg组中E2含量下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05);光镜下,雄鼠附睾组织曲系精管内(层数)生精细胞较少,72.5 mg/kg2,4-D染毒组大鼠子宫腔较大,子宫壁较薄.结论:在本实验条件下,2,4-D可干扰大鼠生殖器官的发育,雌性大鼠较雄性明显,其机制可能是抑制胆固醇合成睾酮从而抑制性激素的合成,进而影响生殖系统发育.
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利用胚胎干细胞试验模型评价矮壮素的发育毒性
目的:利用胚胎干细胞试验模型评价矮壮素的发育毒性.方法:以DMSO为阴性对照,使用不同剂量(7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1 000 μg/mL)的矮壮素染毒小鼠胚胎干细胞D3(ES-D3)和3T3成纤维细胞,观察矮壮素对ES-D3细胞向心肌细胞分化的影响,以及对ES-D3和3T3细胞的细胞毒性,在此基础上,根据发育毒性判别公式对矮壮素致畸性进行判定.提取ES-D3分化抑制试验中的拟胚体总RNA,进行real-time PCR,在基因水平检测矮壮素对ES-D3向各胚层分化的影响.结果:1000μg/mL矮壮素染毒可明显促进体外培养ES-D3、3T3细胞增殖;250 μg/mL的矮壮素作用下,观察到具有心肌细胞收缩的拟胚体数仅占接种拟胚体总数的69.4％;1 000 μg/mL矮壮素能够影响ES-D3向心肌细胞分化的基因标志物(Nkx2.5,α-MHC)的表达.结论:无法利用判别公式对矮壮素进行发育毒性评价;矮壮素在不引起3T3、ES-D3细胞毒性的水平下,影响ES-D3向心肌细胞的分化,有产生胚胎毒性的可能.
