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长春碱增加班马鱼肿瘤耐药基因abcb4的表达
目的通过研究长春碱(VBL)对斑马鱼早期发育过程中abcb4肿瘤耐药基因表达的影响,为进一步建立抗肿瘤药物多药耐药筛选的斑马鱼模型奠定重要的实验基础.方法将长春碱稀释成不同浓度梯度的药液,在受精后0.5~1.5 h 的斑马鱼胚胎上完成药物暴露实验,计算出长春碱 IC50的数值.设置长春碱为实验组,胚胎培养液为空白对照组,分别作用于受精后0.5~1.5 h的斑马鱼胚胎,观察受精后24~120 h的斑马鱼胚胎发育情况,记录死亡、孵化及畸形的胚胎数目;收集不同组别的斑马鱼胚胎,通过实时荧光定量PCR和胚胎整体原位杂交的方法,检测斑马鱼胚胎中abcb4基因的表达量.结果计算出长春碱在斑马鱼胚胎中的IC50为3.08 μmol/L;与对照组比较,实验组的斑马鱼胚胎abcb4基因的mRNA水平明显升高(P<0.05);通过胚胎整体原位杂交的方法,在受精后120 h斑马鱼胚胎的小肠部位发现有abcb4基因阳性杂交信号,且实验组斑马鱼胚胎在脑和心脏部位发现abcb4基因阳性杂交信号.结论长春碱能明显增加斑马鱼早期胚胎中abcb4肿瘤耐药基因的表达水平,提示使用斑马鱼可以复制肿瘤耐药模型.
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胎盘ABCB4表达下调对胆汁酸排泌功能的负性调节作用及其对围生儿预后的影响
目的:研究妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘ABCB4表达下调对胎儿胆汁酸排泌代谢的影响及其与胎儿围生期预后的关系.方法:采用RT-PCR和免疫组化技术检测妊娠晚期ICP患者(30例,ICP组)和正常晚孕妇女(30例,对照组)胎盘组织中ABCB4 mRNA和蛋白的表达情况,采用化学氧化法和酶动力学法检测母血胆红素及转氨酶,采用放射免疫分析方法检测母血及脐血中的甘氨胆酸(GA)含量,并与胎儿围生期预后进行相关性分析.结果:对照组胎儿围生期预后明显好于ICP组,其新生儿体重和Apgar评分均高于ICP组(P<0.01),而羊水粪染率低于ICP组(P<0.01).两组胎盘组织中均检测到ABCB4 mRNA和蛋白的表达,但与对照组相比,ICP组胎盘组织ABCB4 mRNA和蛋白均明显降低(P<0.01).ICP组母血中丙氨酸转氨酶、总胆红素以及母血、脐血中GA水平均高于对照组(P<0.01),而且,脐血GA、母血GA水平与ABCB4 mRNA呈明显负相关(r=-0.627;r=-0.795,均P<0.01).结论:胎盘ABCB4表达下调对胎盘胆汁酸的排泌功能有负性调节作用,这可能是引起ICP围生儿预后不良的重要机制之一.
关键词： 妊娠期肝内胆汁淤积症 胎盘 甘氨胆酸 abcb4 -
吉非替尼对斑马鱼胚胎发育及肿瘤耐药基因表达的影响
目的 研究吉非替尼对斑马鱼早期胚胎发育及abcb4肿瘤耐药基因表达的影响.方法 实验动物采用斑马鱼,实验分为吉非替尼组、阿霉素和吉非替尼的混合液组、空白对照组.将吉非替尼稀释成不同浓度梯度的药液,分别处理受精后0.5～1.5 h(0.5～1.5 hpf)的斑马鱼胚胎,观察胚胎和幼鱼的死亡率、孵化率及畸形率变化.统计各浓度不同时间点的胚胎死亡率,计算出IC50的数值;统计48 hpf和72 hpf的胚胎孵化率及120 hpf的畸形率;收集不同组别的斑马鱼胚胎,通过实时荧光定量PCR,检测斑马鱼胚胎中abcb4基因的表达量.结果 计算出吉非替尼在斑马鱼胚胎中的IC50为16.18 μmol/L.与对照组比较,高剂量吉非替尼(≥20 μmol/L)显著抑制胚胎的孵化,并有明显的胚胎致死效应和致畸效应;吉非替尼组的斑马鱼胚胎abcb4基因的mRNA水平变化不显著,而阿霉素和吉非替尼的混合液组的abcb4基因的mRNA水平有明显变化(P＜0.05).结论 吉非替尼对斑马鱼早期胚胎中abcb4肿瘤耐药基因的表达水平无明显影响(P＞0.05),但是吉非替尼能逆转易耐药药物阿霉素的耐药作用,提示使用斑马鱼可以构建肿瘤耐药模型.
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阿霉素对模式生物斑马鱼中abcb4基因表达的影响
目的 选择斑马鱼作为实验对象,研究阿霉素(doxorubicin,DOX)对其abcb4基因表达的影响,进一步了解abcb4基因在斑马鱼多药耐药机制中可能的作用.方法 分别以2 mL/L二甲基亚砜(DMSO),10 μmol/LDOX及含2 mL/LDMSO的10 μmol/L DOX对斑马鱼胚胎进行药物处理,另以Eggwater处理的胚胎作为对照组.将正常发育的4～16个细胞期斑马鱼胚胎,随机分入以上各组中,药物处理至120 hpf.收集药物处理下的斑马鱼不同时期胚胎运用实时荧光定量PCR和胚胎原位杂交技术,检测abcb4基因在斑马鱼中的表达变化情况.结果 相较于对照组,药物处理的斑马鱼胚胎abcb4基因mRNA表达水平升高(P＜0.05),而abcb5基因mRNA表达情况则无明显变化.通过斑马鱼胚胎原位杂交,均在斑马鱼120 hpf胚胎小肠部位发现有abcb4基因阳性杂交信号,且药物处理的斑马鱼胚胎在脑及心脏部位发现abcb4基因阳性杂交信号.结论 DOX能诱导斑马鱼胚胎abcb4基因表达水平增高,对阐明abcb4基因在斑马鱼多药耐药产生机制中的作用具有重要意义.
