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丹芪偏瘫胶囊中羚羊角用人工牛黄替代的体外研究
为研究丹芪偏瘫胶囊(DPC)及DPC去羚羊角人工牛黄翻倍(DPCBD)对神经再生和血管再生的作用,初步探讨人工牛黄替代羚羊角的可能性,进行了体外培养细胞实验.本实验分为空白血清对照组、模型组、DPC组(0.306 g· kg-1·d-1,以下相同)、丹芪偏瘫胶囊去羚羊角(DPC RA)组、DPCBD组.体外培养脑微血管内皮细胞(BMEC)、星形胶质细胞(astrocytes)以及神经干细胞(neural stem cells,NSC),并将3种细胞共培养,模拟神经血管单元,用微管相关蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)抗体标记神经元,用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)标记astrocytes.酶标仪法检测BMEC乳酸脱氢酶(LDH)含量,倒置相差显微镜观察BMEC管样结构形成,显微镜下计数与BMEC黏附的白细胞个数,免疫荧光法检测β-tubulinⅢ和GFAP阳性细胞比例以及RT-PCR法检测NGF,BDNF,VEGF和VEGFr-2 mRNA的表达水平.结果显示,与模型组相比,DPC和DPCBD均可减少LDH漏出;均可促进BMEC管样结构形成;均可抑制白细胞与BMEC黏附;均可增加β-tubulinⅢ阳性细胞分化比例(P＜0.01),降低GFAP阳性细胞比例(P＜0.01);均能在一定程度上增加共培养细胞NGF,BDNF,VEGF和VEGFr-2 mRNA的表达,其中对NGF和VEGF mRNA表达水平的影响具有显著性差异(P＜0.05),且2组疗效相当.DPCRA组对各指标的影响明显不如DPCBD和DPC组.DPCBD与DPC对神经再生和血管再生的作用疗效相当,提示丹芪偏瘫胶囊中羚羊角可用人工牛黄进行替代.
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中药对脑梗死大鼠运动功能及神经再生微环境的影响
目的:观察复健片对脑梗死模型大鼠运动功能以及脑组织酪氨酸受体激酶B(trk-B)和勿动蛋白A(Nogo-A)表达的影响,探讨其促进神经再生作用机制.方法:90只Wistar大鼠随机分为药物组、模型组、假手术组,每组30只.用电凝法制备大脑中动脉闭塞大鼠模型,造模成功后6h药物组灌胃给予复健片水溶液9g·kg-1,其余2组分别灌胃给予同等量生理盐水,每天1次,共2周.用前肢放置检测法评定运动功能；分别用免疫组化法和原位杂交法观察脑组织trk-B和Nogo-A的表达,并测定染色平均灰度.结果:药物组大鼠运动功能评分( 86.34±5.48)明显高于模型组(62.26±14.87),P＜0.01；trk-B表达药物组(95.98±3.55)较模型组明显增强(110.10±6.82),P＜0.01;而Nogo-A药物组(131.09±8.99)表达较模型组明显减弱(121.36±11.06),P＜0.01.结论:复健片可显著增强trk-B并抑制Nogo-A的表达,从而改善神经再生微环境,促进脑梗死大鼠运动功能康复.
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三七三醇皂苷对脑梗死后不同时点Nogo-A表达的影响
大脑可塑性研究一直是脑科学研究的热点,影响脑血管病后功能重塑的因素十分复杂,包括促进因素和抑制因素,在诸多抑制因素中,Nogo引人注目,其发现是中枢神经创伤性损伤修复分子机制研究的重大突破.Nogo-A,是目前发现的为强烈的神经纤维再生抑制因子,在神经功能恢复过程中起着重要作用,Nogo-A通过与其受体结合而发挥抑制神经再生的作用[1,2].中药三七在脑血管病的治疗中具有疗效,本研究首次通过给予三七三醇皂苷,观察局灶性脑缺血模型大鼠不同时点脑组织中Nogo-A含量的变化,探讨中药三七在脑缺血后脑功能重塑中的作用机制.
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电针对MCAO模型大鼠海马区内源性神经干细胞表达的影响
目的 观察电针对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)后缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)不同时间点大鼠海马区内源性神经干细胞(endogenous neural stem cells,eNSCs)表达的影响,探讨电针对急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACl)远隔损害的可能机制.方法 雄性SPF级SD大鼠用线栓法制作MCAO模型,采用随机数字表法分为假手术组、脑梗死组、电针组,每组30只;假手术组仅做手术创伤,脑梗死组仅作MCAO缺血再灌注处理;电针组选取“百会”和“大椎”行电针治疗,每天1次,每次30 min;治疗后第1、7、14天分别评定神经功能缺损程度,同时在各组随机选取6只大鼠处死,分离出缺血侧海马组织,采用免疫荧光法检测海马组织eNSCs增殖与分化表达.结果 (1)大鼠神经功能缺损评分方面:与假手术组比较,脑梗死组在第1、7、1 4天神经功能缺损评分增高(P＜0.05);与脑梗死组比较,电针组在第1、7、14天神经功能缺损评分降低(P＜0.05).(2)BrdU阳性细胞表达:与假手术比较,脑梗死组缺血侧海马CA1、CA3、DG处BrdU阳性细胞数在第1、7、14天均增多(P＜0.05);与脑梗死组比较,电针组BrdU阳性细胞数均增多(P＜0.05).(3) Nestin阳性细胞表达:与假手术组比较,脑梗死组海马齿状回Nestin阳性细胞数在第1、7、14天均增多(P＜0.05);与脑梗死组比较,电针组Nestin阳性表达增加,但仅第7天差异明显(P＜0.05).(4)DCX阳性细胞表达:与假手术组比较,脑梗死组第1、7天DCX阳性细胞增多(P ＜0.05);与脑梗死组比较,电针组第7、14天DCX阳性细胞增多(P＜0.05).(5)NeuN阳性细胞表达:与假手术组比较,脑梗死组海马齿状回NeuN阳性细胞表达在第1、7、14天均增加,但仅第14天时差异明显(P＜0.05);与脑梗死组比较,电针组NeuN阳性细胞表达增多,但仅第1、14天时差异明显(P＜0.05).(6)GFAP阳性细胞表达:与假手术组比较,脑梗死组缺血侧海马齿状回GFAP阳性细胞表达在第1、7、14天均明显增多(P ＜0.05);与脑梗死组比较,电针组GFAP 阳日J性生细胞表达增多不显著,仅第14天时差异明显(P＜0.05).结论 大鼠脑梗死后海马区存在eNSCs增殖与分化,电针治疗可促进脑梗死后神经缺损功能恢复,其机制可能与电针促进脑梗死海马区eNSCs增殖与分化,抑制eNSCs过度分化为星形胶质细胞,及早长时程促进eNSCs分化为神经元,促进神经再生等机制密切相关.
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复健片促进脑梗死大鼠运动功能康复和神经再生的作用
目的 观察中药复方复健片促进脑梗死模型大鼠中枢神经再生的作用,探讨其改善运动功能的机制.方法 90只Wistar大鼠随机分为药物组、模型组、假手术组,每组30只.用电凝法制备大脑中动脉闭塞大鼠模型,于造模成功后6 h药物组给予复健片水溶液9 g/kg灌胃,余2组分别给予同等量生理盐水灌胃,每日1 次,共2周.用横木行走实验评定运动功能;用免疫组化法观察模型大鼠梗死周边区脑组织巢蛋白(nestin)、多唾液酸神经细胞黏附分子(polysialic acid neural cell adhesion molecule,PSA-NCAM)、微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)、生长相关蛋白(growth-associated protein,GAP-43)、突触素(synaptophysin,Syn)的表达,并测定染色平均灰度或光密度值.结果 86只大鼠纳入结果分析.给药2周后药物组大鼠神经功能评分明显高于模型组,差异有统计学意义(P <0.01);药物组大鼠在梗死周边区脑组织nestin、PSA-NCAM、MAP-2、GAP-43、Syn各指标表达方面均较模型组明显增强,差异有统计学意义(P <0.01).结论 复健片可促进神经再生,从而改善脑梗死大鼠运动功能.
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补阳还五汤及不同配伍组方对缺血性脑中风后大鼠神经增殖作用的对比研究
目的 观察补阳还五汤及不同配伍组方对缺血性脑中风后大鼠神经增殖作用的影响.方法 采用机械开颅电凝法阻断大鼠大脑中动脉24 h后,用随机电脉冲刺激仪每天刺激2 h,连续15天,造成大鼠缺血性中风模型,分为模型组(给予等体积生理盐水灌胃)、补阳还五汤组、补阳还五汤去地龙组、当归补血汤组(同时给予相应药物灌胃进行干预治疗).以免疫组织化学方法检测大鼠脑组织中5一溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)的表达.结果 补阳还五汤组和补阳还五汤去地龙组大鼠海马区域中有大量BrdU阳性细胞存在,排列密集,部分呈簇状聚集,与模型组相比较,差异有显著性(P＜0.01),并且脑缺血侧海马区域BrdU阳性细胞数与对侧比较显著增多(P＜0.05);当归补血汤组与模型组和大鼠海马区域BrdU阳性细胞数比较,差异无显著性(P＞0.05).结论 补阳还五汤促神经增殖作用优于当归补血汤.
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干细胞治疗缺血性脑卒中的研究现状
缺血性脑卒中为常见的脑血管病类型,具有高发和易复发的特点,给家庭和社会带来沉重的负担.临床上现有的治疗措施对许多患者还未取得理想的效果.近年来随着干细胞研究的迅速发展,干细胞治疗被认为是神经功能缺损患者的一个潜在有效的策略.
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神经干细胞治疗脑创伤的研究进展
内源性神经干细胞通过迁移,激活的方式分化为神经元及胶质细胞,并改善神经功能,但创伤导致的复杂的微环境使内源性神经干细胞的增殖和分化受到限制.外源性神经干细胞可在宿主内存活并通过旁分泌功能改善局部微环境,促进内源性神经干细胞的增殖和分化,恢复神经元之间的连接功能,从而促进神经组织再生和功能修复.
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中枢神经系统干细胞研究进展
近年来,中枢神经系统干细胞的研究方法和其在临床应用方面的价值日益成为神经干细胞研究的焦点,本文对于神经干细胞的发现,新的神经干细胞研究技术以及神经干细胞在中枢神经系统退变性疾病,缺血损伤和肿瘤治疗等方面的研究进展作一概述.
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降钙素基因相关肽在面神经切断后SD大鼠面神经核中的表达变化
目的:研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide ,CGRP)在面神经损伤后再生过程中面神经核中的表达变化.方法:健康SD大鼠36只分别于茎乳孔处行左侧面神经切断术,而右侧于相应部位仅行面神经游离术;随机均分为术后3、7、14、21、28、35 d 6组.分别于相应时间点取出含面神经核团脑干部分,用免疫组化及图像分析技术,观察大鼠两侧面神经核中CGRP表达的变化.结果:CGRP分布于正常SD大鼠面神经各亚核,损伤侧的面神经核中CGRP表达比对照侧增强(P﹤0.05);图像分析CGRP灰度值两侧比较,差异有统计学意义(P﹤0.05).结论:周围性面神经损伤导致CGRP在面神经核中的表达增加,提示CGRP在面神经再生修复过程中发挥调理作用.
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舌下神经压榨损伤后降钙素基因相关肽在SD大鼠舌下神经核中表达的变化
目的:研究降钙素基因相关肽(CGRP)在舌下神经损伤后再生过程中舌下神经运动神经元中的表达变化.方法:健康SD大鼠36只,均行左侧舌下神经压榨术,术后饲养至第3、7、14、21、28、35天,分别取出脑干含舌下神经核团部分,用免疫组化及图像分析技术,观察舌下神经核中的CGRP在舌下神经再生中的变化.结果:CGRP分布于正常SD大鼠舌下神经各亚核,舌下神经损伤后第3天,损伤侧的舌下神经核中CGRP比对照侧增强,图像分析CGRP灰度值与对照侧比较,差异有统计学意义(P﹤0.05);损伤后第7天达高峰(P﹤0.05),以后尽管显著表达但渐减.结论:损伤导致CGRP在舌下神经运动神经元中的表达增加,提示CGRP在舌下神经再生修复过程中发挥调理作用.
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交感神经对周围神经功能影响的研究进展
目的:了解交感神经对周围神经功能影响的研究现状.方法:查阅近年来国内外有关交感神经与周围神经解剖学关系、交感神经对周围感觉神经功能影响和对神经损伤后再生影响的相关文献和研究报道并进行总结分析.结果:(1)交感神经节后纤维是无髓C类纤维,是周围神经组成部分.(2)在病理状态下,由于神经生长因子、瓦勒变性、背根节神经元兴奋增强等因素作用下,交感神经通过形成交感-感觉耦联参与感觉传入调制.(3)交感神经通过调节周围神经的营养血管影响神经血供和影响周围神经的轴浆转运速度对周围神经再生产生不同的影响,与交感神经不同的功能状态有关.结论:交感神经既影响感觉传入神经功能,也影响周围神经再生.随着该方面研究的深入将有助于周围神经疾病的诊治.
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高频超声在周围神经损伤与再生诊断的应用进展
目的 总结高频超声在周围神经损伤与再生诊断领域的应用价值.方法 以“高频超声”、“周围神经损伤”和“神经再生”作为关键词,在Elsevier ScienceDirecr、EBSCO全文数据库、万方数据、中国知网等数据库中检索近年发表的相关文章,并对高频超声在周围神经损伤领域诊断进展情况进行归纳总结.结果 高频超声诊断周围神经损伤临床上具有多元的方法;临床上神经多平面性损伤很难通过电生理以及其他方式进行诊断,但利用超声检查可诊断出多节段损伤,避免治疗的盲目性、减少手术次数并为手术提供了明确的手术入路.结论 尽管对周围神经损伤的认识已相当成熟,但其早期诊断方法在临床上尚存在争议及进步空间.如何利用高频超声在术前有形态学证据诊断神经损伤成为高频超声之优势.
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大鼠坐骨神经损伤后背根节感觉神经元神经丝蛋白基因表达的变化
目的探讨神经损伤再生过程中细胞骨架蛋白基因表达调控机制. 方法用原位杂交组织化学技术观察了大鼠坐骨神经夹伤后神经再生过程中,L4～6背根节感觉神经元内轻分子量(light,L)、中分子量(medium,M)和重分子量(heavy,H)神经丝蛋白亚基mRNA的表达变化. 结果光镜下,轴突损伤后背根节神经元内各神经丝亚基mRNA的杂交信号明显减弱,神经丝-L和神经丝-M mRNA的杂交信号位于神经元胞浆内,而在神经元胞浆和胞核内均可见神经丝-H mRNA的表达信号. 结论神经丝3个亚基基因表达的调控机制不同,神经丝基因表达的下调可能是神经元对轴突损伤的基本应答,而且在有效神经再生过程中发挥重要作用 .
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大鼠嗅球和鼻腔嗅粘膜成鞘细胞的形态学研究
目的观察大鼠嗅神经成鞘细胞在嗅球和嗅粘膜的分布及其形态学结构特征,研究其与中枢神经再生的关系.方法Luxol固蓝染色、Mallory染色和NGFRp75免疫组织化学染色结合透射电镜观察. 结果在嗅球纤维层的成鞘细胞随神经纤维呈纵向排列,在嗅小球层的成鞘细胞则围绕着嗅小球环行排列.在嗅粘膜的成鞘细胞位于柱状上皮深方,沿基底膜分布.成鞘细胞的胞体为细长梭形,有较长的突起,细胞核呈圆形或椭圆形.在嗅小球周围和嗅粘膜内的成鞘细胞呈NGFRp75免疫反应阳性.在电镜下,嗅球成鞘细胞的纵断面上可见其胞体呈长梭形,细胞核为不规则形,核仁清晰.在胞体的周围有大量的平行神经纤维纵向排列,在放大的横断面上,可见在1个成鞘细胞的细胞核周围有数根神经纤维被胞质包裹在一起. 结论嗅成鞘细胞是一种特殊的胶质细胞,分布于嗅球的纤维层、嗅小球层和嗅粘膜内.嗅神经成鞘细胞的胞体细长,有较长突起,其轴系膜紧密包裹成束的无髓神经纤维.
关键词： 嗅神经成鞘细胞 超微结构 神经生长因子受体75kD蛋白 神经再生 大鼠 -
同源盒基因Lhx3和Lhx4在成年大鼠缺血性脑损伤后的表达变化
目的揭示发育基因Lhx3和Lhx4参与成年动物中枢神经损伤修复的过程. 方法线栓法制作局灶性脑缺血模型,阻断成年大鼠右侧大脑中动脉,缺血2 h后再灌注,分别于损伤再灌注后3 d、7 d、14 d和21 d取左右侧大脑皮层组织,采用RT-PCR结合HPLC测定方法,相对定量分析上述不同损伤时相同源盒基因Lhx3和Lhx4在损伤侧与对照侧皮层运动神经元mRNA表达量的改变. 结果正常成年大鼠大脑皮层运动神经元中,Lhx3和Lhx4基因均维持一定的表达水平,在局灶性脑缺血再灌注3 d、7 d、14 d后,大脑皮层运动神经元损伤侧的Lhx3和Lhx4基因表达均有明显改变,但变化规律不同.其中Lhx3在损伤后mRNA表达量较自身对照侧明显降低,而Lhx4的mRNA表达量较自身对照侧明显升高,该结果与成年大鼠坐骨神经夹伤后,脊髓中Lhx3和Lhx4的基因表达变化规律基本一致. 结论 LIM同源盒基因家族中的Lhx3和Lhx4基因不仅在神经元发育过程中起重要调控作用,而且可能参与成年动物中枢神经损伤的修复过程.
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CPT-环磷酸腺苷对视网膜节细胞再生的影响
目的探讨玻璃体内插入外周神经和玻璃体内注射CPT-环磷酸腺苷对轴突损伤的视网膜节细胞再生的影响. 方法 20只成年金黄地鼠随机分4组,每组5只.切断视神经(ON)并缝接坐骨神经为再生对照组(attached graft,AG);ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射CPT-cAMP和/或插入一小段自体坐骨神经(SN)为实验组.采用逆行示踪标记术,观察视网膜平铺片节细胞数. 结果 1.对照组(AG),视网膜再生的节细胞数为:1428±284个;2.外周神经组(AG+SN):每个视网膜再生的节细胞平均数为2220±415个;3.CPT-cAMP组(AG+cAMP):每个视网膜再生的节细胞平均数为2175±364个;4.外周神经和CPT-cAMP联合组(AG+cAMP+SN):每个视网膜再生的节细胞平均数为4255±820个;其中,AG+SN、AG+CPT组同AG组相比存在差异显著性(P<0.01);AG+CPT+SN组同AG、AG+CPT和AG+SN组相比均有差异显著性(P<0.01). 结论研究结果提示玻璃体内注射CPT+cAMP或联合应用外周神经和CPT-cAMP可大幅提高受损视网膜节细胞的再生.
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脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究
目的观察脱细胞处理的同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的作用.方法用组织工程学方法制备的大鼠同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损,并对再生神经进行电生理学功能测试,光镜、电镜观察移植物内的再生神经,并进行统计分析.结果术后13周内,动物未见炎症及排斥反应.用脱细胞处理的同种异体神经移植物修复神经缺损,再生神经的传导功能、纤维数量、轴突直径、有髓纤维占有的面积与自体神经移植对照及计量学上统计分析均无显著性差异.结论脱细胞处理的同种异体神经移植物具有良好的组织相容性,它对缺损的坐骨神经再生有促进作用.
关键词： 脱细胞同种异体神经移植物 神经再生 大鼠 -
雷公藤甲素对异种神经移植后神经再生的影响
目的探讨雷公藤甲素对异种神经移植后神经再生的影响. 方法将日本大耳兔的神经移植于Wistar大鼠坐骨神经后,宿主服用雷公藤甲素. 结果大鼠存活4、8、12、16、24周,可见再生神经纤维长入移植神经并向远段坐骨神经生长.移植神经和远段神经内的再生神经纤维中有髓纤维和无髓纤维兼有之,大部分再生神经纤维聚集成束.术后12周的腓肠肌AChE呈阳性,并可见再生神经纤维与运动终板相连.12周以后的爪部皮下出现再生神经束,真皮层出现游离神经末梢.未服用雷公藤甲素的对照组因免疫排斥反应而神经不能再生.结论雷公藤甲素在异种神经移植中具有免疫抑制作用.
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人工组织神经移植物对大鼠陈旧性坐骨神经缺损(60天)的修复作用
目的 观察人工组织神经移植物对陈旧性大鼠坐骨神经缺损的修复作用.方法 切除成年SD大鼠部分左侧坐骨神经,饲养60d形成陈旧性坐骨神经缺损后,以人工组织神经移植物修复缺损,同时设自体神经修复和不修复两对照组.修复术后3个月做神经-肌复合电位、腓肠肌湿重及再生神经形态学检测.结果 人工组织神经移植物修复组实验侧的运动神经传导速度、腓肠肌湿重、移植物远侧再生神经有髓神经纤维髓鞘厚度等结果与自体神经修复组相似.不修复对照组则未记录到神经-肌复合电位,未观察到再生神经纤维结构,腓肠肌湿重明显小于人工组织神经移植组和自体神经移植组.结论 人工组织神经移植物在一定程度上能修复缺损60d的大鼠坐骨神经.
