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及早预防卵巢早衰
不久前,因为某女艺人引起的冷冻卵子一事被广泛关注.大龄单身女性倾向冷冻卵子无非是为了寻求一个保障,既然如此,不如从保护好自己的卵子和卵巢做起.卵巢早衰的年轻女性增多一般情况下,女性一生一般只有400～500个卵泡发育成熟并排卵,每月只有一个原始卵泡成熟,从卵巢排出到输卵管.如果当月没有受精,卵子会在48～72小时后自然死亡.左右两个卵巢通常是轮流排卵,少数情况下能同时排出两个或两个以上的卵子,此时若能与精子相结合,就出现了双胞胎或多胞胎.
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不同卵巢组织冷冻方法对保存女性生育力的研究
目的 比较程序化冷冻和玻璃化冷冻两种方法保存人卵巢组织,解冻后组织病理分析原始卵泡存活情况.方法 卵巢组织取自15例卵巢畸胎瘤患者,卵巢皮质切割成10 mm×1 mm×1 mm的组织条随机分配到玻璃化冷冻组(A组)、程序化冷冻组(B组),新鲜对照组(C组),组织病理分析比较三组原始卵泡形态的影响. 结果 三组共有572个原始卵泡,C组中96.9%的原始卵泡保持形态学正常,A和B组分别为85.6%与83.9%,差别有统计学意义(P<0.01);A与B组比较,差别没有统计学意义(P>0.05). 结论 尽管冻融后组织的原始卵泡存活率小于新鲜组织,玻璃化冷冻与程序化冷冻方法都能较好地保存人类卵巢组织,可用于人类卵巢组织的冷冻保存.
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原始卵泡活化的相关研究进展
本综述主要介绍两种用于研究原始卵泡活化的模型(卵巢皮质薄片培养模型和鸡胚尿囊绒毛膜移植物模型),以及与原始卵泡活化有关的调控因子(包括KIT/Kit配体、白血病抑制因子、碱性成纤维细胞生长因子及其他因子)在原始卵泡活化中的作用及可能机制.
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卵母细胞和卵巢组织的冷冻
精子冻存已取得了一定的成功,但是冻存的卵母细胞体外发育的成功率很低,因为卵母细胞冻存与许多因素有关,成熟的卵母细胞对冻存非常敏感,很容易出现非整倍体现象.为了提高卵母细胞的受精率,人们已着手研究不成熟卵母细胞及卵巢的冻存.要建立一个方法,使生长完全的生殖泡(germinal vesicle,GV)和MII卵母细胞暴露于与冻存有关的物理和化学逆境后,仍然具有很高的存活率、受精率和发育率.目前还没有一个简单可行的冻存方法,而且主要困难在于如何使原始卵泡中的未成熟卵母细胞发育为成熟的卵母细胞.
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原始卵泡的形成与发育
在胚胎发育时期,原始生殖细胞形成并迁移至生殖腺,形成种系囊.卵原细胞进入减数分裂成为卵母细胞.随后种系囊分裂,单个卵母细胞与前颗粒细胞组装成原始卵泡.前泡膜细胞被募集到原始卵泡周围,原始卵泡发育并向初级卵泡转化.原始卵泡的形成和发育是卵巢生物学的重要过程,阐释其分子和细胞机制为调节卵巢功能和治疗卵巢疾病提供方向.
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原始卵泡生长启动调控机制的研究进展
原始卵泡生长启动的调控机制至今尚未阐明,目前研究显示,原始卵泡的生长启动主要受卵泡内外产生的各种因子的调节,而可能不受卵泡刺激素(FSH)的直接调节;原始卵泡的细胞连接以及细胞间信号通讯对这一过程起着重要的调控作用.
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晚期糖基化终末产物对卵巢原始卵泡的影响
目的 探究晚期糖基化终末产物(AGEs)对原始卵泡激活的影响. 方法 取4日龄ICR小鼠卵巢,将其分别置于基础培养液(空白对照组)、包含200 μg/ml牛血清白蛋白(BSA)培养液(溶剂对照组)以及包含200 μg/ml AGE-BSA培养液(AGE-BSA组)中进行体外培养,4d后取材检测.HE染色观察各组卵巢卵泡构成比;免疫蛋白印迹法检测AGEs受体(RAGE)和卵泡激活相关指标细胞增殖核抗原(PCNA);免疫组织化学法检测PCNA定位表达. 结果 与溶剂对照组相比,AGE BSA组中生长卵泡构成比增加(P＜0.001),同时伴随着卵巢髓质部原始卵泡的出现;AGE-BSA组RAGE、PCNA的蛋白表达较溶剂对照组显著增加(P＜0.05),而空白对照组与溶剂对照组间卵泡构成比以及RAGE、PCNA的蛋白表达均无显著差异(P＞0.05);免疫组织化学结果显示PCNA表达在卵巢各级卵泡卵母细胞和颗粒细胞中. 结论 AGEs可能通过AGEs-RAGE轴激活卵巢内的原始卵泡,促进卵泡池耗竭.
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七子益肾理冲汤对DOR大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响
目的 探讨七子益肾理冲汤对VCD致卵巢储备功能低下(diminished ovarian reserve,DOR)大鼠之卵巢颗粒细胞凋亡的影响.方法 60只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药低、中、高剂量组及DHEA组.模型组采用VCD注射制作DOR大鼠模型.观察各组大鼠HE染色卵巢切片中各级卵泡数及黄体数量,及TUNEL法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞凋亡率.结果 与空白组比较,模型组卵巢原始卵泡数量及生长卵泡数量显著下降(P＜0.05);与空白组比较,中药高剂量组及西药组的原始卵泡数量及生长卵泡数量均无显著差异;模型组较空白组卵巢颗粒细胞凋亡率显著上升(P＜0.05),经治疗后,中药中剂量、高剂量组及西药组大鼠的颗粒细胞凋亡率均比较模型组明显降低(P＜0.05).结论 七子益肾理冲汤可减少卵巢细胞凋亡,修复卵巢原始卵泡储备的损失.
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恶性肿瘤在冷冻复苏后的卵巢组织移植中的转移风险研究进展
1960年，Parrott DM等［1］将冷冻复苏后的小鼠卵巢进行移植并获得妊娠。卵巢组织冷冻是指冷冻保存卵巢的皮质组织或卵巢组织，目前多采用卵巢皮质组织。这种方法可以保存大量的原始卵泡，适用于无法进行超促排卵的癌症患者和青春期前癌症患者进行生育力保存。迄今为止，卵巢组织冷冻技术已经导致了24例正常分娩［2］，日后癌症患者可能有望在癌症治愈后移植冷冻复苏后的自体卵巢组织恢复生育能力。但值得注意的是癌症患者冷冻保存的卵巢组织中可能残留恶性肿瘤细胞，移植后可能导致肿瘤复发［3］。因此，在卵巢组织冷冻保存前进行恶性肿瘤转移风险的评估至关重要，这有助于增加恶性肿瘤患者卵巢组织移植的安全性。本文旨在综述目前恶性肿瘤患者卵巢组织冷冻复苏后自体移植中恶性肿瘤转移的风险及其评估方法的研究进展。
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动物原始卵泡生长调节因子的研究进展
了解原始卵泡的形成、激活,特别是原始卵泡向初级卵泡转变的调控机制对卵子库的建立和辅助生殖技术的发展有着重要意义.简要综述与哺乳动物原始卵泡的形成、激活及向初级卵泡的转变过程有关的Fig-a、神经内分泌因子、酪氨酸蛋白激酶受体(c-kit)的配体(KL)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、白血病抑制因子(LIF)、转化生长因子β(TGF-β)家族成员、抗苗勒激素(AMH)等调节因子的研究进展.
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c-src在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用初探
目的:研究原癌基因c-src在大鼠卵巢的表达,及其在原始卵泡启动过程中的作用.方法:取2日龄SD雌性大鼠卵巢,在Waymouth培养体系中培养0、4、8d后,首先采用RT-PCR方法证实大鼠卵巢中有c-src的表达,再体外合成其RNA小干扰片段(small interference RNA,siRNA)转染培养中的卵巢组织进行RNA干扰,用HE染色及RT-PCR筛选佳干扰片断并用慢病毒包装后检测干扰效果.结果:随着培养天数的增加,原始卵泡在卵泡总数中所占比例逐渐减少；c-src mRNA在原始卵泡中有表达,经筛选用佳干扰片断siRNA1慢病毒包装进行RNA干扰,发现干扰后,与空白组、空白载体组相比,佳干扰组c-src mRNA含量明显下降,原始卵泡在卵泡总数中所占比例相对更多,原始卵泡发育受到抑制.结论:c-src在原始卵泡中有表达,并在一定程度上促进了原始卵泡的发育.
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胰岛素样生长因子对卵泡发育的调控
卵泡作为卵巢的基本功能单位,在一系列高度协调的作用下由原始卵泡终发育为高度分化的排卵前的窦状卵泡.现已公认卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)对卵泡的成熟具有重要作用,而其他肽类物质和甾类激素能够增强或减弱FSH和LH对卵泡的作用,胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)系统在此过程中发挥着重要作用[1],本文就此做一综述.
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c-erbB2在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用
本文旨在研究原癌基因c-erbB2在大鼠卵巢的表达,及其在原始卵泡启动过程中的作用.我们首先采用RT-PCR方法证实大鼠卵巢中有c-erbB2的表达,再体外合成其RNA小干扰片段(small interference RNA,siRNA),并用脂质体(Metafectene)介导转染体外培养的新生大鼠卵巢,在引发原癌基因c-erbB2表达沉默或抑制的情况下,观察原始卵泡的生长启动情况,以及表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在此过程中的作用是否发生变化.结果显示:将c-erbB2 siRNA转染原始卵泡后,c-erbB2 mRNA水平明显下调(P<0.05),三对siRNA抑制率分别为49.6%、46.7%、82.6%,同时其蛋白表达也明显下调(P<0.01).通过siRNA抑制原癌基因c-erbB2的表达,原始卵泡的启动、生长受到抑制;EGF可以促进原始卵泡的启动生长,但此作用可以被c-erbB2siRNA阻断.以上结果提示,c-erbB2参与原始卵泡启动生长过程的调控,并介导EGF促进原始卵泡启动生长的作用.
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小鼠卵巢冷冻移植后卵泡发育和卵母细胞成熟的研究
本研究探讨了冷冻保存的1日龄小鼠卵巢异体异位移植后,其原始卵泡重新启动生长发育的能力.一日龄B6C2F1小鼠卵巢分离冷冻后置液氮中保存,保存1周～6个月后解冻,并将卵巢移植到8～12周龄B6C2F1受体鼠肾脏包膜下,移植至少14 d.每侧肾囊移植2枚卵巢的40只受体鼠中卵巢的回收率为45.00%(72/160),而每侧肾囊移植1枚卵巢的20只受体鼠的回收率为82.50%(33/40).移植卵巢上卵泡的发育基本与体外自然生长鼠的卵巢卵泡发育情况一致.对卵巢移植19 d的受体鼠用孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)处理后,从移植卵巢上发育成熟卵泡中获得的卵母细胞在MEMα培养基中培养16～17 h,有40.90%的卵母细胞发生生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD),其中89.02%的卵母细胞发育到第二次减数分裂中期(metaphaseⅡ,MⅡ).将剩余的卵母细胞继续培养到20～21 h,又有50.83%的卵母细胞发生生发泡破裂,但其中只有21.40%的卵母细胞能够发育到MⅡ期.以上结果说明,小鼠早期卵巢经过冷冻-解冻并异体异位移植后,其原始卵泡能够重新启动生长发育,发育后的卵泡卵母细胞能够在体外培养成熟.这些结果意味着原始卵泡或卵巢冷冻-移植技术有可能充分利用雌性生殖细胞用于濒危动物保种、建立动物基因库和人类辅助生殖等.
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近30年中国卵巢生理学研究进展
卵泡的形成和分化是在激素、卵巢内调节因素以及细胞间相互作用的精密调控下发生的序贯过程.细胞增殖与凋亡的平衡在优势卵泡的筛选中发挥着重要作用.原始生殖细胞在生殖嵴内的迁移和归巢需要诸多因素的协同调控,包括卵母细胞源性多肽生长因子、生长分化因子9、骨形态发生蛋白、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、转录因子肾母细胞瘤蛋白1(Wilms' tumour 1,Wt1)等,同时这一过程还需要原始生殖细胞在逐渐成熟的性腺刺激下与细胞外基质蛋白、细胞基质进行相互作用.卵丘-卵母细胞复合体的形成以及排卵的发生直接受黄体生成素(luteinizing hormone,LH)的调控,同时需要卵巢颗粒细胞中丝裂原活化蛋白激酶的活化参与其中.本文将对卵泡发育和分化以及排卵过程中涉及的细胞间作用以及信号转导的关键分子做一综述,重点关注卵母细胞以及体细胞产生的信号因子.
关键词： 原始卵泡 发育与分化 信号通路与转导 生殖细胞与体细胞的相互作用 -
维持原始卵泡静息状态的相关信号分子及通路
雌性哺乳动物生殖寿命与原始卵泡池大小有关,而原始卵泡池大小有赖于原始卵泡“启动”及“静息”之间的平衡,故有关其生长启动以及静息状态维持的分子机制成为近年研究热点.大量研究表明,某些基因突变、卵巢局部自分泌或旁分泌因子、原癌基因或抑癌基因参与了原始卵泡启动及静息状态的维持.本文就维持原始卵泡静息状态的重要信号分子和通路方面的研究进展进行综述.
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HSP27在人卵巢周期中的表达
目的 通过研究热休克蛋白27(HSP27)在正常人卵巢周期中的不同发育阶段卵泡中的表达,探讨其在卵泡发育中的可能调控机理.方法 收集18例月经规则的生育年龄妇女不同周期阶段的卵巢组织和6例PCOS患者的卵巢组织,采用免疫组织化学方法观察HSP27蛋白在人卵巢中的定位及表达情况.结果 HSP27定位表达于人原始卵泡的卵母细胞,各期卵泡的颗粒细胞、卵泡膜细胞、黄体细胞及间质细胞均未见表达.PCOS组卵母细胞阴性表达.结论 HSP27可能和原始卵泡的卵母细胞发育与凋亡有关.
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原始卵泡的激活与临床应用
哺乳动物的卵巢中,卵母细胞发生与发育的基本功能单位为卵泡.与雄性动物睾丸终生含有生殖干细胞不同,雌性哺乳动物的卵泡储备是有限并在成年期不可更新的.在大多数哺乳动物物种中,出生前后会建立一个被称为原始卵泡库的生殖储备库,是哺乳动物一生惟一的生殖资源.而在原始卵泡形成后即进入休眠状态,随后只有少部分被逐渐地选择性激活,并参与到繁衍下一代的过程中.由于休眠的原始卵泡是雌性卵巢中卵泡的贮藏形式,因而原始卵泡的初形成数量直接决定着雌性哺乳动物的生育力.同时,原始卵泡休眠与激活之间的平衡更直接决定了雌性哺乳动物的生育寿命.近年随着基因修饰动物的不断开发,人们对原始卵泡形成与激活发育的内在调控机制的认识有了长足的进步.随着对于原始卵泡激活调控分子机制的不断揭示,目前利用休眠原始卵泡技术治疗不孕不育在临床中逐渐走向了现实.
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环磷酰胺对大鼠卵巢功能的影响
[目的]探讨环磷酰胺(CTX)对大鼠卵巢功能损害的影响,建立CTX对卵巢功能损害的大鼠模型,观察检测CTX作用下卵巢功能变化的相关指标及观察CTX作用后大鼠卵巢储备功能变化的相关因素.[方法]60只60～70 d的清洁级成年雌性SD大鼠分为空白对照组(生理盐水组)和CTX组(CTC 75 mg/kg),分别于用药后3 d、1周、2周、4周、8周观察动情周期、称取卵巢重量、卵巢组织形态学观察及卵泡计数、测定血清雌二醇(E2)、促卵泡生成激素(FSH),评估卵巢储备功能.[结果]成年大鼠用药后3 d、1周、2周、4周、8周卵巢原始卵泡数分别与对照组比较,原始卵泡数均减少(P<0.05).用药后3 d、1周、2周、4周血清E2分别与对照组比较,E2降低(P<0.05).用药后3 d、1周血清FSH分别与对照组比较,FSH升高(P<0.05).成年CTX组大鼠第1、2周阴道涂片显示动情周期发生改变,规则的动情周期变化消失,周期延长为8～17d,绝大多数停止于动情间期.用药后1周、2周、4周、8周卵巢重量分别与对照组比较,卵巢重量减轻(P<0.05).[结论]①本研究采用CTX 75 mg/kg单次腹腔注射用药建立CTX对卵巢功能损害的大鼠模型,成本低,手术操作简便,建模成功率高.②CTX作用下卵巢形态学改变显著的是原始卵泡数目减少,提示这可能是其减少卵巢储备量,致卵巢功能受损的主要机制之一.
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人卵巢组织冷冻研究进展
早期诊断以及强有力的化疗和放疗正在提高大量年轻女性恶性肿瘤患者的长期生存率,但这类细胞毒性治疗可能对卵巢功能产生一定影响,导致部分卵巢功能丧失或卵巢早衰,出现提前闭经,不孕不育等[1,2],因此,保存生殖能力成了提高患者生活质量的一个重要方面.部分生育期女性和Turner综合征患者[3]也要求保存生殖能力,以利于以后在适当时间获得自己的后代.目前女性生殖能力保存主要有3种方法:(1)胚胎冷冻:适用于已婚或有男性愿意提供精子的生育期女性,在冷冻前为获得一定数目的胚胎需经过超排卵体外受精胚胎培养等过程,时间长,花费较大,且冻存胚胎的使用及后续处理涉及较多的伦理和法律问题[3,4].(2)卵子冷冻:适用于生育期女性,但取卵时间及能获得的卵子数目有限,在冷冻过程中低温和暴露于冷冻保护剂中可能使颗粒细胞提前释放,导致卵透明带变硬.另外减数分裂的纺锤体对温度敏感,在低温时解聚,尽管过程可逆,仍可能出现同源染色体移位而导致胚胎非整倍体等异常[5].(3)卵巢冷冻:作为一种新的保存生殖力的方法,正在大力开展研究,特别适用于因疾病必须切除卵巢,或必须行放疗、化疗可能损伤卵巢功能的儿童或青少年患者,也是青春期前女孩的唯一保持生育能力的方法[4],目前已有第1例冷冻卵巢移植后健康女婴出生[6],因此具有很大的发展潜力.
