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乳酸菌细菌素的生物合成与应用
乳酸菌产生的细菌素是一类具有抑菌活性的多肽或蛋白质物质,大部分细菌素只对近缘关系的细菌有抑制作用,少数细菌素的抑菌谱较广,对多种革兰氏阳性细菌有很强的抑制作用.细菌素可分为热稳定的小分子肽、热敏感的大分子蛋白和羊毛硫抗生素三类.本文综述了细菌素的理化性质,生物合成与应用.
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阴道来源的乳杆菌抑菌物质研究进展
乳杆菌是大多数健康女性阴道微生态中的优势菌群,对预防泌尿生殖系统感染性疾病起重要作用.能产生乳酸、过氧化氢、细菌素和生物表面活性物质等抑菌物质是乳杆菌成为潜在益生菌的重要基础.本文对阴道来源的乳杆菌抑菌物质相关研究进展作一综述.
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苏云金芽孢杆菌4AJ1细菌素对单增李斯特菌的活性研究
细菌素(bacteriocin)是细菌在代谢过程中由核糖体合成基因编码的一类具有生物活性的多肽或蛋白质类物质.与抗生素相比,细菌素具有靶向性强、安全和不容易产生耐药性等优点.近年来,研究发现苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)可产生不同大小的具有抑菌作用的细菌素[1].本研究旨在寻找安全、高效、具备应用潜力的新型细菌素,探讨苏云金芽孢杆菌4AJ1细菌素对单核细胞增多性李斯特菌的抑菌活力[2].为新型抗李斯特菌的药物研发提供基础资料.
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变形链球菌ComCDE密度感应参与不同菌种的竞争
目的 研究口腔变形链球菌( S.mutans )ComCDE密度感应系统参与血链球菌(S.sanguinis)的相互竞争作用.方法 采用LIVE\DEAD BacLightTM荧光染色结合激光共聚焦显微镜,观察变形链球菌(简称变链菌)在CSP信号肽诱导下群体细菌自身死亡变化；通过荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定细菌素以及细菌素免疫蛋白相关基因表达变化,分析变链菌ComCDE系统参与菌群生存竞争的调控机制.结果 在细菌竞争中,变形链球菌△comC、△comD 、△comE突变株失去不同菌种间的竞争力,无法抑制相邻Ssanguinis的正常生长；只有野生株保持竞争力,抑制相邻S.sanguinis生长,形成缺陷菌环.CSP信号肽诱导下,变链菌群体死菌/活菌率增高58.1％(P＜0.05)；细菌素及免疫蛋白相关SMU.151、SMU.423、SMU.1913c基因分别升高23.3倍(P=0.00)、15.9倍(P＜0.05)、19.3倍(P＜0.05).结论 变形链球菌ComCDE密度感应系统调控变链菌的变链素及免疫蛋白产生、参与不同菌种间竞争生存.
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细菌素PediocinPA-1融合蛋白的表达纯化
目的 在原核中表达和纯化融合蛋白.方法 IPTG诱导融合蛋白表达,表达的融合蛋白经金属镍离子螯合亲和层析纯化后,用分子筛Superdex G75进一步纯化和鉴定.结果 诱导表达后,通过SDS-PAGE分析,融合蛋白主要存在上清中,金属螯合层析和分子筛纯化后,所得融合蛋白的纯度大于90%.结论 获得纯化的融合蛋白,为进一步研究和应用奠定基础.
关键词： 细菌素 pediocinPA-1 融合蛋白 -
生殖道中具有抑菌活性乳酸菌的分离筛选及其抑菌物质分析
目的 从阴道炎患者的棉拭子样本中分离筛选具有抗菌活性乳酸菌,为研究对细菌性阴道炎具有确实疗效的微生态制剂提供理论与菌种保证.方法 应用纯培养技术及双层平板法从阴道样品中分离筛选具有较好抑菌活性的乳酸菌.通过有机酸排除试验、过氧化氢排除试验和蛋白类抑菌物质排除试验对具有较好抑菌活性菌株的主要抑菌物质分析,并通过PCR反应对是否具有细菌素相关基因进行鉴定.结果 从7个棉拭子样本中共分离得到26株乳酸菌,其中有6株呈现抑菌活性.K4M2、K4M5、K4M6和K4M8菌株的主要抗菌物质为有机酸.而K4M9、K4M10两株植物乳杆菌的主要抗菌物质除有机酸外,尚可以产生细菌素.病原菌拮抗试验结果表明,这两株菌株的混合培养上清对具有较好的抑菌效果.结论 K4M9、K4M10菌株有望作为微生态制剂用于细菌性阴道炎的临床防治.
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植物乳杆菌CMCC-P0002代谢产物中抑菌物质的研究
目的 通过对一株植物乳杆菌代谢产物的抑菌作用以及该产物的某些物理特性的研究,为进一步发现可替代现有抗生素的抗菌物质奠定基础.方法 首先利用低温离心和超滤法对植物乳杆菌培养后的上清液进行初步提取,用打孔法行抑菌试验,明确其对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌等临床分离菌株的抑菌活性;并进一步经加热、调整pH及过氧化氢酶等处理上清液后,再验证其活性变化.结果 植物乳杆菌的培养上清液对铜绿假单胞菌等多株临床分离菌株均具有一定的抑菌活性,且以pH在6以内时该物质抑菌活性较好,过氧化氢酶处理后或加热至100℃、30 min,上清液的抑菌活性依然存在.结论 在植物乳杆菌的培养上清液中存在着具有抑菌活性的物质,对从临床标本所分离的部分革兰阴性菌及革兰阳性菌有抑菌作用,该物质对热耐受,其活性受pH变化的影响.
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凝结芽胞杆菌G1及其抑菌物质的研究
目的 获得具有良好性状的产细菌素菌株.方法 测定菌株形态学和生理生化学特性以进行菌种鉴定;采用牛津杯法测定抑菌谱及细菌素的理化特性.结果 经鉴定实验菌株为凝结芽胞杆菌,所产细菌素在100 ℃加热60 min后,残余活力为90%;在pH 5～9范围内,抗菌活力稳定.结论 凝结芽胞杆菌G1可产性能良好的抑制革兰阳性菌生长的细菌素.
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一种使用酶标仪快速测定细菌素效价的方法
目的 建立快速测定细菌素效价的方法.方法 以Nisin为参照物,利用酶标仪测定指示菌吸光度值.结果 确定了在指示菌接种量为10%和细菌素作用时间为8 h 2个测定参数条件下,样品效价检测值的相对标准偏差在5%以下.结论 所建方法快速、准确,适合检测菌所产细菌素的研究.
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1株产细菌素乳酸菌的筛选和鉴定
目的从植物性材料中筛选产细菌素的乳酸菌.方法琼脂扩散法.结果所筛选的产细菌素R260菌株经鉴定为植物乳杆菌.排除有机酸、过氧化氢等干扰因素后,发酵液仍有很强的抑菌作用;用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理后,发酵液抑菌活性急剧下降,因而确定产生的抑菌物质具有蛋白质性质,是一种细菌素.抑菌谱试验测定表明,此菌株的发酵液不仅抑制革兰阳性菌,而且对部分革兰阴性菌也有抑制作用,因此产生的是一类广谱细菌素.结论筛选到了1株产广谱细菌素的乳酸菌.
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产细菌素乳酸菌的筛选及体外抑菌试验
从健康鸡、兔、仔猪肠道内容物及新鲜粪便中分离到41株乳酸菌,通过单层琼脂平板扩散实验,筛选出5株有明显抑菌活性代谢产物的乳酸菌,其中4株属于乳杆菌属,1株属于链球菌属.排除酸的干扰后,离心发酵液对指示菌仍有抑菌活性,用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理后抑菌活性明显降低,用过氧化氢酶作用上清液,抑菌效果不变,说明过氧化氢未起作用,从而得知抑菌物质中有蛋白质类细菌素.将离心发酵液分别调pH值为2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0,做抑菌试验,试验结果证明:所分离的5株乳酸菌在pH2.0,3.0,4.0时均有较强的抑菌活性,且MD菌株在pH7.0时抑菌活性亦较强,这进一步排除了酸的作用.每周重复一次,抑菌结果完全一致,但至第5周时,抑菌现象完全消失,说明抑菌物质随时间的延长而失活,起抑菌作用的物质不是有机酸.
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女性阴道中产细菌素的乳杆菌筛选与鉴定
目的对从60例健康女性阴道中筛选出产生细菌素的优势乳杆菌进行鉴定,并为研制开发微生态制剂提供优良可靠菌种.方法利用牛津杯法筛选出19株乳杆菌,其菌株发酵乳酸量高并且产生细菌素.对19株乳杆菌进行了多项理化鉴定.结果 19株乳杆菌分别为:格氏乳杆菌9株,唾液乳杆菌1株,卷曲乳杆菌9株.结论筛选的19株乳杆菌是健康女性阴道中的优势有益菌,具有较强的产酸能力,都产生细菌素,其中16株产生过氧化氢,某些菌株具有较高的生产应用价值.
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长寿老人源产细菌素乳酸菌的筛选与分子生物学鉴定
本研究以124株我国广西巴马百岁以上长寿老人源乳酸菌菌株为试材,采用双层琼脂平板扩散法筛选产细菌素的优良菌株.在排除有机酸、H2O2等的干扰后,菌株B02、B03、B04、B07、B11、B25、B24和B78的发酵上清液对受试的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等5株指示菌都表现出很强的抑制作用;进一步硫酸铵沉淀、透析及浓缩处理后,其抑菌活性显著增强,同时蛋白酶敏感性试验显示其具有蛋白质性质,这些结果共同确定其为乳酸菌细菌素.后,通过16S rRNA序列分析鉴定后确定B02为副干酪乳杆菌;B03为植物乳杆菌;B04为动物双歧杆菌;B07为干酪乳杆菌;B11为德氏乳杆菌保加利亚亚种;B24为鼠李糖乳杆菌;B25为粪肠球菌;B78为植物乳杆菌.
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罗伊乳杆菌对致龋变形链球菌拮抗作用的研究
目的 研究罗伊乳杆菌对变形链球菌的拮抗作用,初步了解产生拮抗作用的原因.方法 利用罗伊乳杆菌无菌上清液,应用双层平板打孔法测定其抑菌效果,再通过滤纸片抑菌法对罗伊乳杆菌发酵的酸乳制品与普通酸乳制品对变形链球菌的抑菌作用进行比较,用饱和硫酸铵沉淀法分析产生拮抗作用的原因.结果 罗伊乳杆菌有显著抑菌活性(P＜0.05),仅罗伊乳杆菌的发酵乳样品对变性链球菌产生直径为6.3 mm抑菌圈,80%饱和硫酸铵沉淀的细菌素抑菌活力强,蛋白酶K处理后无明显抑菌圈.结论 本研究证明了罗伊乳杆菌的代谢产物以及罗伊乳杆菌发酵的酸奶制品对致龋菌变形链球菌有着明显的拮抗作用.
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鼠疫菌素及特异基因的研究概述
鼠疫菌素(Pesticin,Pst)是鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,以下简称鼠疫菌)产生的一种细菌素,是鼠疫菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生并具有抑制在分类学上关系密切的一些菌株生长作用的活性多肽[1-2],它的作用受鼠疫菌素受体(Psn)制约.Pst是一种重要蛋白质,曾经被世界卫生组织(WHO)鼠疫专家委员会列为鼠疫菌的4种毒力决定因子之一[3],Pst Ⅰ检测是检查鼠疫菌毒力强弱的指标之一[1,4],对Pst Ⅰ敏感是田鼠型鼠疫菌的重要特征[5].
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葡萄球菌素研究进展
葡萄球菌素为细菌素的一种,是由葡萄球菌产生的一类具有抗菌活性的肽类物质,具有细菌不易产生抗性、体内无残留、对机体无毒副作用等特点,其开发应用前景广阔,但目前尚未作为抗感染药物进入临床应用.本文简要介绍几种葡萄球菌素的结构特征、抗菌机制及其抗菌活性的研究进展.
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一株产乳链菌肽菌株的分离与鉴定
为了从新疆生牛奶菌群中挖掘具有产乳链菌肽能力的乳酸链球菌,利用含有高浓度乳链菌肽的平板对生牛奶菌群进行初筛,随后使用敏感菌平板初步验证初筛菌株的产抗菌物质能力;利用16S rDNA测序和生物信息学方法对其进行菌种鉴定;针对乳酸乳球菌的乳链菌肽合成基因簇,在其3个不同位点设计并合成PCR引物进行扩增;同时利用牛津杯法测定了其在不同培养基中发酵液的乳链菌肽效价.实验结果表明:筛选所得菌株是乳酸乳球菌Il1403(Lactococcuslactis Il1403)亚型,同源性为100％;该菌拥有完整的乳链菌肽合成基因簇,可以在敏感菌平板上产生显著的抑菌圈;在30℃静置培养18 h的条件下,使用GM17培养基和CM培养基的发酵液效价分别为823.33 IU/mL和926.67 IU/mL.实验结果证实从生牛奶菌群中分离得了一株具有产乳链菌肽能力的乳酸链球菌.
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血链球菌细菌素对唾液生物膜中牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌拮抗作用的实验研究
目的:提取血链球菌标准菌株(ATCC10556)细菌素,研究其对唾液生物膜中牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的拮抗作用.方法:通过超声破碎,高速离心,盐析等方法提取血链球菌细菌素;采用二倍稀释法,测定血链球菌细菌素对浮游状态下牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的小抑制浓度(MIC);在体外建立牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌唾液生物膜模型,利用激光共聚焦扫描电镜观察该生物膜中细菌活性的变化.结果:血链球菌细菌素对浮游状态下的牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的MIC为0.5 g/L;使用血链球菌细菌素作用牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌生物膜,活菌百分比显著下降,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05).结论:血链球菌细菌素对浮游状态下和生物膜中的牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌生长均有显著的抑制作用.
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11例破伤风患者的护理体会
破伤风是破伤风杆菌经伤口侵入人体引起的一种特异性感染,是由细菌素引发的以局部和全身性肌强直、痉挛和抽搐为特征的一种毒血症,死亡率较高.
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一株产广谱细菌素乳酸菌S3菌株的菌种鉴定
乳酸菌广泛分布于自然界,细菌素是由某些细菌通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌生物活性的蛋白质,抑菌范围不仅仅局限于同源的细菌,产生菌对其细菌素有自身免疫性.
