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武夷山土壤中分离的Bt杀蚊新菌株
本研究对武夷山的5份土壤样本进行苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)菌株的分离,获得2株Bt新菌株,编号分别为QQ3和QQ17.生物测定结果表明,QQ17对白纹伊蚊有很高的杀虫活性,校正死亡率达95.6%,超过标准菌株Bt H-14;SDS-PAGE结果显示.QQ17菌株含多种杀蚊蛋白.因此该新菌株将会是一个很好的生物杀蚊制剂候选菌株.
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苏云金芽孢杆菌杀蚊新菌株LLP29对白纹伊蚊作用机理的研究
从武夷山自然保护区白玉兰叶片上分离获得1株新的苏云金芽孢杆菌菌株LLP29,内含cyt1Aa6杀蚊基因.纯化的Cyt1Aa6毒素蛋白对白纹伊蚊幼虫和C6/36细胞都有高效活性.为更好地利用该菌株对白纹伊蚊进行生物防治,本试验以白纹伊蚊敏感品系及C6/36细胞为研究对象初步研究了其作用机理.免疫荧光染色和免疫组织化学实验结果表明:Cyt1Aa6毒素蛋白主要结合于C6/36细胞膜和白纹伊蚊幼虫中肠上.
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神农架原始森林高毒力苏云金芽孢杆菌菌株分离鉴定研究
目的:调查湖北神农架原始森林苏云金芽孢杆菌(简称B.t)天然资源,以期发现新的B.t亚种或毒力特异性菌株.方法:B.t的分离采用热处理筛选法,高毒力菌株的筛选采用常规生物测定程序.B.t亚种鉴定采用血清学反应和常规生理生化反应方法.结果:从神农架原始森林160份不同生态类型的土壤样品中,共分离出B.t 18株,从中筛选出8株高毒力菌株,较国内对棉铃幼虫高毒力生产菌株HD-1而言,菌株A3、B4、C5、C6、D2和E6对夜娥科3种害虫(棉铃幼虫、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾)均具有相对较高毒力,其中A3、B4对棉铃幼虫具显著高毒力水平,毒力指数分别为2.98和4.26,C5和C6对斜纹夜娥和甜菜夜蛾有较高毒力,菌株F3和F8对致倦库蚊较国内生产高毒株HID-567有相对较高的毒力水平,毒力指数分别为13.7和16.4,经生理生化反应和血清学反应鉴定,A3属于H3abc型,F3和F8属H14型,A3、B4、C5、C6、D2、E6属H7型.结论:神农架原始森林高毒力B.t菌株分离,进一步丰富了我国B.t的天然资源,具有较高的科学研究价值和广阔的应用开发前景.
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苏云金芽孢杆菌杀蚊蛋白基因cry11Aa的克隆与表达
目的 克隆苏云金芽孢杆菌以色列亚种的杀蚊毒素蛋白基因cry11Aa,并使其在酵母双杂交系统受体菌Saccharomyces cerevisiae L40中获得表达.方法 应用聚合酶链反应扩增获得cry11Aa基因,构建表达载体pHybLex/Zeo-cry11Aa,转化到酵母菌Saccharomyces cerevisiae L40.结果 用Cry11Aa抗体和LexA抗体进行的Western blot免疫杂交表明cry11Aa基因在酵母菌L40中成功表达,生成了Cry11Aa-LexA融合蛋白.结论 成功地克隆、表达了cry11Aa基因,为进一步利用酵母双杂交系统寻找与毒素蛋白Cry11Aa特异性结合的蚊幼中肠受体蛋白,揭示苏云金芽孢杆菌毒杀蚊虫的分子生物学机制奠定了基础.
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我国蚊媒病发生近况及生物农药防治蚊虫国内外研究进展
蚊虫吸血、骚扰人畜、传播疾病,多年来采用化学合成杀虫剂对其控制、杀灭取得了较好效果,但也诱导了蚊虫抗性的产生,并造成了环境问题.因此研制和使用生物杀蚊剂受到广泛关注.笔者综述了我国近年来蚊媒病的发生情况、蚊虫的化学防治与抗性机制以及生物农药防治蚊虫的国内外研究进展.
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苏云金芽孢杆菌杀蚊机制研究概况
从1976年起,人们就将目光转向苏云金芽孢杆菌(Bt)对蚊虫的研究和应用上.笔者简要描述了Bt主要的杀蚊晶体蛋白和杀蚊机制,并针对当前研究概况提出展望.随着杀虫晶体蛋白(ICPs)结构与功能研究的不断深入,必将不断丰富和完善ICPs分子作用机制,为进一步在分子水平上利用基因操作及蛋白质工程技术开发这一潜在有广阔应用前景的微生物杀蚊剂奠定基础.
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炭疽芽孢杆菌基因分型的研究进展
炭疽芽孢杆菌按Bergey分类属于杆菌科需氧芽孢杆菌属(Cohn 1872)群Ⅰ中菌体在0.9?m以上的一簇.其中包括炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、腊样芽孢杆菌(B.cereus)、蕈状芽孢杆菌(B.mycoides)、假真菌样芽孢杆菌(B.pseudomycoides)、苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)和B.weihenstephanensis菌.
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苏云金芽孢杆菌4AJ1细菌素对单增李斯特菌的活性研究
细菌素(bacteriocin)是细菌在代谢过程中由核糖体合成基因编码的一类具有生物活性的多肽或蛋白质类物质.与抗生素相比,细菌素具有靶向性强、安全和不容易产生耐药性等优点.近年来,研究发现苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)可产生不同大小的具有抑菌作用的细菌素[1].本研究旨在寻找安全、高效、具备应用潜力的新型细菌素,探讨苏云金芽孢杆菌4AJ1细菌素对单核细胞增多性李斯特菌的抑菌活力[2].为新型抗李斯特菌的药物研发提供基础资料.
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Bt野生菌Q1杀虫晶体蛋白及基因型分析
目的:分析我国千山地区森林地带土壤中分离的野生菌Q1的32类杀虫晶体蛋白基因类型和表达蛋白.方法:利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析方法,以JM110为受体菌、PMD-18T为克隆载体对cry7基因的同源区段进行克隆测序.结果:Q1同时含有cry1、cry7、cry16基因,同时表达了130kD、90kD 和60kD蛋白.电镜观察显示晶体形状多为菱形或长菱形.测序后与模式基因比对相似性均在89%以上.结论:该实验为克隆cry7全长基因奠定了研究基础,丰富了菌株及基因资源,在资源积累方面具有重要意义.
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苏云金芽孢杆菌应用与抗性的研究进展
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称B.t.i)是目前国际上生产量大并成功地用于防治农、林、贮粮害虫和一些卫生害虫的微生物杀虫剂.开展研制、应用工作至今已有30多年的历史.近年来,为了更有效地控制害虫危害,在防治过程中,能够更好地保持生态平衡和减少环境污染,用B.t.i防治人类及动物病的多种媒介昆虫正日益受到世界卫生组织及各国的重视,在研究、生产、应用等方面都获得了较大的进展.
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苏云金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌亲缘关系研究
目的 探讨苏云金芽孢杆菌(Bt)与蜡状芽孢杆菌(Bc)的亲缘关系,为Bt鉴定、安全性评价及降低其致病风险等提供科学依据.方法 采用肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术,对6株苏云金芽孢杆菌和3株蜡状芽孢杆菌及对照菌株的基因组DNA进行扩增,对其指纹图谱进行分析;回收并克隆重复性好的苏云金芽孢杆菌基因组DNA扩增片段,以其为探针,分别与供试菌株基因组DNA进行杂交.结果 与蜡状芽孢杆菌相比,苏云金芽孢杆菌菌株间基因组DNA指纹图谱较一致;所有供试苏云金芽孢杆菌菌株均扩增产生一条250 bp左右的片段;苏云金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌均可扩增产生600 bp左右的共有DNA片段.此外,以苏云金芽孢杆菌500 bp片段为探针与苏云金芽孢杆菌基因组DNA杂交有很好的特异性.结论 肠杆菌基因间重复一致序列-PCR指纹图谱可以正确反映苏云金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌亲缘关系;500 bp片段可以作为苏云金芽孢杆菌鉴定探针.
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苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌BZ-1的分离筛选及鉴定
目的 从被污染的蝴蝶兰初代培养基中分离筛选苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌,并进行鉴定.方法 分离自被污染的蝴蝶兰初代培养基的苏云金芽孢杆菌经富集后,筛选伴胞晶体产生菌BZ-1,显微镜观察进行鉴定;采用PCR法分析菌株BZ-1的16S rDNA和脂肽抗生素合成相关基因,SDS-PAGE分析菌株的伴胞晶体;制备菌株发酵粗提液,提取活性物质,分别置于不同温度(50、60、80、100℃)30 min、用不同的蛋白酶(蛋白酶K、胰蛋白酶)于37℃处理30 min,以枯草芽孢杆菌作为指示菌检测菌株的抑菌活性;并检测菌株对小菜蛾的毒力.结果 菌株BZ-1能产生芽孢,并在芽孢旁形成多个无规则伴胞晶体;该菌株的16S rDNA扩增产物测序结果经与GenBank中登录的16S rDNA核苷酸序列进行BLAST比对,与B.anthracis str.Ames(NR 074453)、B.cereus (NR_074540)和B.thuringiensis Bt407(NR_102506)菌株相似度达99％,表明菌株BZ-1属于芽孢杆菌属,结合扫描电镜观察结果,可初步确定该菌株为苏云金芽孢杆菌;该菌株可扩增出脂肽抗生素合成相关基因sfp、mycB、ituA 、fe nB;该菌株从培养2d芽孢形成后开始分泌相对分子质量约130 000的晶体蛋白,4d时蛋白表达量增加,6d后蛋白表达量基本达到稳定;该菌株具有一定的热稳定性,对蛋白酶K具有一定的耐受性;该菌株于30℃培养6d,对小菜蛾表现出较高的毒力.结论 从被污染的蝴蝶兰初代培养基中分离筛选的苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌BZ-1所产的抗菌物质主要抑制革兰阳性细菌,具有较高的毒力,可作为原始菌株发酵进行田间生物防治,也可为构建杀虫基因工程菌以及培育抗虫转基因植物提供高毒力的候选基因,具有较好的应用前景.
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恒定磁场对苏云金芽孢杆菌的生长及毒力的影响
目的:研究恒定磁场对苏云金芽孢杆菌的生长和毒力的影响.方法:通过0-100 Gs的恒定磁场下对苏云金芽孢杆菌G-02、HD-1菌株的发酵,测定其生长和毒力的变化.结果:G-02、HD-1菌株分别在磁场强度43Gs和14Gs条件下发酵48h后的芽孢量和毒力达到高,芽孢增长比分别为1.26和2.0,毒力增效比分别为1.27和1.25,苏云金芽孢杆菌G-02适宜的磁场强度为43-50Gs,HD-1菌株为7-29Gs.结论:低磁场强度对两种菌株的生长有一定的促进作用,而高强度磁场会对其生长产生抑制作用.
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苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌杀蚊作用以及工程菌改造研究进展
苏云金芽孢杆菌和球形芽孢杆菌是应用广泛的杀蚊幼虫的细菌,但还存在很多不足.苏云金芽孢杆菌产生两类杀蚊幼虫晶体蛋白,即内毒素晶体蛋白和溶细胞毒素,球形芽孢杆菌产生二元毒素和杀蚊毒素.研究不同毒素的不同杀蚊作用,以及通过DNA重组技术改造原有的菌种,扩大其杀蚊幼虫的活性和范围,有助于更有效地杀火媒介蚊虫和防治疟疾.
