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Egr-1基因的辐射生物学效应研究进展
Egr-1(early growth response-1)基因是一系列“立即早期基因(immediate early gene)”之一，参与细胞的多种辐射生物效应。研究表明，Egr-1在多种正常细胞和肿瘤细胞受到电离辐射后的早期就能被激活，它的激活表达与辐照后细胞的生长、周期、凋亡等的改变密切相关。另外，Egr-1基因调控序列具有辐射可诱导特性，这一特点使其具有潜在的临床和基因工程生产应用前景。
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一氧化氮对肿瘤细胞辐射敏感性的影响具有G2/M期依赖性
目的 观察不同浓度一氧化氮对携带野生型p53基因状态的人肺腺癌细胞所在不同周期中生存、凋亡、染色体畸变和DNA双链断裂的双向性影响.方法 选择携带野生型p53基因的人肺腺癌细胞作为研究对象.急性X线照射(3 Gy、6 Gy)野生型p53基因的人肺腺癌细胞前6 h,使用不同浓度的一氧化氮(5μmol/L、500μmol/L)作用于细胞,或使用0.02 Gy小剂量预照射.使用血清饥饿方法获得细胞同步化,经过离心后收集有丝分裂的细胞,有丝分裂后分别培养2.5 h、12.5 h、17.5 h,依次获得G1、S、G2/M期细胞.细胞敏感性、细胞凋亡、染色体畸变和DNA双链断裂分别由克隆形成实验、TUNEL染色法、染色体显带技术和免疫荧光检测.结果 主要在G2/M期细胞,在急性大剂量辐射前,先给予小剂量0.02 Gy预照射,或使用一氧化氮供体硝酸异山梨酯(ISDN)浓度为5μmol/L,可明显观察到对于辐射的适应性反应,反应的主要外在表现为抑制细胞的凋亡,细胞内的染色体出现畸变或者DNA双链发生断裂的降低.另一方面,与之相反的是,也是在G2/M期细胞,在急性大剂量辐射前,使用高浓度的500μmol/L IS-DN处理,细胞会出现明显的增敏反应,产生辐射增敏后具体的外在表现为加速了细胞的凋亡,同样染色体发生畸变以及DNA的双链断裂得到增强.结论 携带野生型p53基因状态的人肺腺癌细胞在一氧化氮放射诱导下的细胞生存、凋亡、染色体畸变和DNA双链断裂的影响具有G2/M期依赖性.
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荜茇酰胺对人肺腺癌A549细胞的增殖及其辐射敏感性的影响
目的 探讨荜茇酰胺对人肺腺癌A549细胞的增殖以及辐射增敏性的影响.方法 体外培养人肺腺癌A549细胞,取对数生长期细胞进行实验.采用活细胞计数盒(CCK-8)法测定荜茇酰胺对A549细胞生长增殖的影响;流式细胞术观察细胞周期和凋亡.结果 荜茇酰胺明显抑制A549细胞的增殖,引起细胞凋亡和细胞G0/G1期的阻滞.荜茇酰胺联合X射线照射能明显增加细胞的增殖抑制率和细胞凋亡.结论 荜茇酰胺可明显抑制人肺腺癌细胞的生长增殖.低浓度的荜茇酰胺增加了人肺腺癌细胞的辐射敏感性,可能与其促进细胞的增殖抑制、诱导细胞凋亡、引起G0/G1期阻滞有关.
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NP方案联合不同间隔时间放疗对乳腺癌MCF-7细胞辐射敏感性的影响
目的:研究化疗方案顺铂(DDP)+盖诺(NVB)联合不同间隔时间放射治疗对人乳腺癌MCF-7细胞辐射敏感性的影响.方法:采用细胞集落形成方法观察DDP+NVB方案联合不同间隔时间放疗对细胞的杀伤作用.结果:MCF-7细胞化放间隔不同时间后细胞SF值差异随照射剂量增加而逐渐明显,8Gy时12h组低,0h组居中,48、72h组高.结论:NP不同时机顺序联合放疗对MCF-7细胞辐射敏感性有一定影响,这种差异同NP作用后不同时间细胞周期分布、凋亡等作用有关,值得进一步探讨.
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一氧化氮对人肝癌细胞SMMC-7721辐射敏感性的增强效应
目的:观察一氧化氮对肿瘤细胞SMMC-7721辐射敏感性的作用效果.方法:实验于2005-06/09在兰州大学生命科学学院和中科院近代物理研究辐射医学实验室进行.处于对数生长期的肝癌细胞SMMC-7721,在用X射线照射前4 h,换人含有0.1 mmol/L硝普钠(一氧化氮的前体)的培养液,与对照组(不加硝普钠)一起,在200 cGy/min的剂量率下,分别照射0,1,2,4,6,8 Gy,换为正常培养液培养.用集落形成法计算细胞的存活率,用吖啶橙/溴乙啶双染法检测细胞的死亡情况,用流式细胞仪检测细胞周期.结果:①存活曲线细胞存活率随照射剂量增加而减少,硝普钠组细胞的克隆形成率低于对照组(2 Gy时,P＜0.01).②细胞死亡百分率(坏死细胞与凋亡细胞总数/总细胞数):与照射剂量呈正相关,硝普钠组高于对照组(P＜0.05).对照组从(9.95±3.53)%(0 Gy)逐渐升至(58.74±3.46)%(6 Gy),而硝普钠组则从(18.53±12.02)%(0 Gy)迅速升至(61.57±9.53)%(2 Gy).③细胞周期检测结果:对照组细胞经过X射线照射后,出现了G2/M期阻滞[从0 Gy时(12.50±5.76)%逐渐增加到8 Gy(40.36±2.74)%],而硝普钠组细胞在低剂量时主要表现为G0/G1期阻滞[0 Gy:(16.06±7.19)%;2 Gy:(17.93±0.92)%],而G2/M期阻滞仅在高剂量时明显[8 Gy时为(50.10±3.93)%,P＜0.05].结论:经硝普钠产生的一氧化氮,通过与X射线协同作用,减少了肝癌细胞SMMC-7721的细胞存活率,促进细胞死亡,阻止细胞被阻滞至G2/M期,是一种有效的辐射增敏剂.
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高压氧在肿瘤放疗中的实验研究及临床应用现状
恶性肿瘤因乏氧细胞的存在引起放射抗拒现象.经研究发现高压氧可以明显提高组织氧分压,使缺氧的肿瘤细胞供氧得以改善,增加了肿瘤细胞对氧的敏感性.高压氧对乏氧程度较高的恶性肿瘤有明显的增强放疗的作用,并且在放射损伤的治疗中也有很好的效果.
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p53基因Msp I位点多态性与NSCLC易感性及辐射敏感性关系的研究
目的 研究中国北方人对非小细胞肺癌(NSCLC)的易感性及放疗敏感性与p53基因Msp I单核苷酸多态性(SNP)的关系.方法 采用病例对照方法,通过合成序列特异性引物(PCR-RFLP)方法检测50例NSCLC患者及56例健康对照者的p53基因Msp I单核苷酸多态性位点的基因型.同时,观察不同基因型患者的放射治疗疗效,检测与辐射敏感性相关的基因型.结果 NSCLC组的A1/A2杂和基因型频率明显高于对照组(χ2=4.38,P＜0.05).A1/A2杂合子患非小细胞肺癌的风险相对风险度为2.51(1.06＜OR＜5.96).未观察到p53基因Msp I单核苷酸多态性与非小细胞肺癌病人的辐射敏感性有密切的相关关系.结论 p53基因Msp I单核苷酸多态性位点的A1/A2杂和基因型为非小细胞肺癌的易感基因,但尚未发现该基因型与NSCLC的辐射敏感性相关.
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爱迪加放射液疗综合治疗老年中晚期食管癌近期疗效的临床观察
目的 观察爱迪加放射治疗老年中晚期食管癌疗效及其副作用。方法 选择爱迪与放疗综合治疗20例老年中晚期食管癌作治疗组，并随机抽取同期接受单纯放疗的老年中晚期食管癌患者20例作对照组进行对比观察。结果 爱迪毒副作用小，能尽早改善患者症状，放疗半量时治疗组、对照组的有效率为65%、35%(P＜0.05)，放疗全量时为85%、60%(P＜0.05)。结论 爱迪能提高放疗对食管癌作用的辐射敏感性，可以显著提高老年中晚期食管癌局控率，近期疗效显著，毒副反应小，值得临床进一步推广使用。
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miR-21对宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响
目的：探讨miR-21与宫颈癌 H eLa细胞辐射敏感性之间的关系，阐明miR-21对细胞凋亡和自噬改变的可能作用机制。方法：人宫颈癌 HeLa 细胞分为假照组和4 Gy照射组，分别转染 miR-21 NC（阴性对照）、miR-21 mimics、miR-21 inhibitor NC和miR-21 inhibitor。实时荧光定量 PCR检测照射前和照射后 miR-21的表达水平；集落形成实验观察miR-21对 H eLa细胞辐射敏感性的影响；流式细胞术检测细胞凋亡和自噬细胞百分率；采用生物信息学方法预测miR-21的靶基因；荧光素酶报告基因分析验证 miR-21与靶基因3′UTR的结合；Western blotting法检测相关蛋白 beclin1表达水平。结果：与假照组比较，4 Gy照射组 miR-21表达水平明显增加（P＜0.05）；集落形成实验，与 miR-21 NC 组比较，miR-21 mimics 组 HeLa 细胞辐射敏感性无明显变化（P＞0.05）；与miR-21 inhihitor NC组比较，miR-21 inhibitor 组 HeLa细胞辐射敏感性无明显变化（P＞0.05）；与miR-21 NC＋4 Gy 组比较，miR-21 mimics＋4 Gy 组 HeLa 细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）；与 miR-21 inhibitor NC组比较，miR-21 inhibitor组 HeLa细胞凋亡率明显减少（P＜0.05）。与 miR-21 NC组比较，miR-21 mimics组自噬率升高（P＜0.05）。与miR-21 NC＋4 Gy组比较，miR-21 mimics＋4 Gy组自噬率升高（P＜0.05）；与miR-21 NC＋4 Gy组比较，miR-21 mimics＋4 Gy组 beclin1蛋白表达水平增加（P＜0.05）。结论：发现了miR-21新的靶基因 beclin1。过表达miR-21促进辐射诱导的凋亡和自噬，但对于宫颈癌 HeLa细胞辐射敏感性无直接影响。
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miR-18a对结直肠癌SW116细胞辐射敏感性的影响
目的:探讨miR-18a与结直肠癌SW116细胞辐射敏感性之间的关系,阐明miR-18a影响细胞凋亡和自噬的可能机制.方法:人结直肠癌SW116细胞分为miR-18a NC组、miR-18amimic组、miR-18a NC+4Gy组和miR-18a mimic+4Gy组.qRT-PCR法检测照射前后SW116细胞中miR-18a的表达;集落形成实验观察miR-18a对SW116细胞辐射敏感性的影响;GFPLC3形态学方法检测SW1 16细胞自噬率;流式细胞术检测SW116细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-18a的靶基因,以荧光素酶报告基因验证miR-18a与靶基因3'UTR结合;Western blotting法检测SW116细胞中共济失调-毛细血管扩张突变基因(ATM)蛋白表达.结果:与照射前比较,照射后SW116细胞中miR-18a表达水平明显降低(P＜0.05).集落形成实验,与miR-18a NC组比较,miR-18amimic组SW116细胞辐射敏感性增强(P＜0.05),细胞凋亡率和自噬率明显增加(P＜0.05).与miR-18a NC+4Gy组比较,miR-18a mimic+4Gy组SW116细胞中ATM蛋白表达减少.结论:miR-18a的靶基因为ATM; miR-18amimic可促进辐射诱导的细胞凋亡和自噬,且能增加结直肠癌SW116细胞辐射敏感性.
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褪黑素对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射敏感性的影响
目的:检测褪黑素(MLT)联合放疗对人非小细胞肺癌(NSCLC) H1299细胞增殖和凋亡的影响,阐明MLT在调节H1299细胞辐射敏感性中的作用.方法:将H1299细胞分为对照组、MLT组、照射组及照射+ MLT组,对照组H1299细胞不作任何处理,MLT组H1299细胞给予不同浓度(100和500 μmol·L-1)MLT,照射组H1299细胞采用137Cs γ射线进行一次性6 Gy照射,照射+MLT组H1299细胞给予100和500 μmol· L-1MLT加6 Gy137Cs γ射线.克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,流式细胞术检测照射后24和48 h各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测各组细胞中核转录因子κB(NF-κB)蛋白的磷酸化水平.结果:克隆形成实验,与照射组比较,照射+ MLT组H1299细胞克隆形成数明显减少(t=7.234,P＜0.01).流式细胞术,照射后24 h,与对照组比较,照射组和MLT组H1299细胞凋亡率明显升高(t=5.020,t=13.525,P＜0.01),与对照组比较,照射+MLT组H1299细胞凋亡率升高(t=12.884,P＜0.01);照射后48 h,照射+MLT组H1299细胞凋亡率与照射组比较差异无统计学意义(t=0.394,P＞0.05).蛋白免疫印迹法,照射+MLT组H1299细胞中NF-κB蛋白磷酸化水平低于照射组.结论:MLT联合放疗对人NSCLC H1299细胞有明显的抑瘤效应,提高了NSCLC H1299细胞的辐射敏感性.
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脱氧胞苷激酶对HeLa细胞放化疗敏感性的影响
目的:研究脱氧胞苷激酶(DCK)对人官颈癌细胞HeLa药物敏感性与辐射敏感性的影响,为宫颈癌的基因治疗提供理论依据.方法:采用FuGENE 6转染HeLa细胞构建细胞模型,实验分为空白对照组、空载体阴性对照组及DCK基因沉默(siRNA)组,实时荧光定量PCR及Western blotting检测转染前后DCK mRNA及蛋白的表达变化,细胞计数法检测细胞的增殖情况,MTT法检测细胞对阿糖胞苷(AraC)的药物敏感性,克隆形成实验检测细胞的辐射敏感性.结果:与空白对照组及阴性对照组比较,siRNA转染HeLa细胞后DCK mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05)；3组细胞生长曲线无明显差异；siRNA组HeLa细胞对AraC药物的敏感性降低,辐射敏感性增高(P＜0.05).结论:抑制DCK基因表达可以降低宫颈癌细胞对药物的敏感性,增强辐射敏感性.
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西妥昔单抗对肺腺癌A549细胞株辐射增敏作用的研究
目的 探讨西妥昔单抗(Cetuximab,C225)对人肺腺癌A549细胞株的辐射增敏作用及其机制.方法 体外培养人肺腺癌A549细胞株,经不同浓度的C225作用后,使用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,计算出C225的半数抑制浓度(IC50),并将IC50的1/5作为后续实验的浓度.采用克隆形成方法观察C225对细胞辐射敏感性的影响,按多靶单击模型拟合细胞存活曲线,计算辐射增敏比(SER).流式细胞仪检测细胞凋亡以及细胞周期情况.结果 C225均抑制了细胞的增殖,并呈现明显的量-效关系,其IC50为18.24μg/mL.与单独照射组相比,加药照射组的SF2、D0、Dq均下降(P＜0.05),SERD0为1.40.C225联合X线照射明显增强了辐射诱导的细胞凋亡(P＜0.05).C225使细胞阻滞于G0/G1期(P＜0.05),单独照射组G2/M期细胞比例增加(P＜0.05),C225+照射组同时出现G0/G1、G2/M期细胞阻滞(P＜0.05);与对照组相比,C225组、单独照射组以及C225+照射组S期细胞比例均下降(P＜0.05).结论 C225对A549细胞株具有辐射增敏作用,其机制可能与C225抑制细胞的生长增殖和受照射后亚致死性损伤的修复,增加细胞凋亡以及诱导细胞G0/G1期阻滞有关.
关键词： 西妥昔单抗 肺腺癌A549细胞株 细胞周期 凋亡 辐射敏感性 -
DNA依赖的蛋白激酶与卵巢癌SKOV3细胞辐射关系的研究
目的 干扰SKOV3细胞中DNA依赖的蛋白激酶(DNA-PK)的表达,观察细胞辐射敏感性变化.方法 采用shRNA技术沉默SKOV3细胞中DNA-PK的表达.结果 X射线辐射后4h和28 h,转染DNA-PKshRNA的SKOV3细胞的凋亡百分数显著高于单纯转染DNA-PKshRNA组和转染shNC+辐射组(P＜0.05),也显著高于SKOV3组、SKOV3+辐射组、shNC组(P＜0.01).结论 DNA-PK与卵巢癌细胞辐射敏感性密切相关.
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125I籽源持续照射对人肺癌细胞凋亡及DNA-PK蛋白表达的影响
目的:探讨125I籽源低剂量率持续照射诱导人肺癌细胞凋亡以及对DNA依赖蛋白激酶复合物(DNA-PK)表达的影响.方法:选择A549和NCI-H446两种辐射敏感性不同的人肺癌细胞株,采用9粒125I籽源组成的平面照射装置进行持续照射,吸收剂量为2 Gy.应用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化,免疫组化方法检测DNA-PKcs蛋白表达.结果:125I籽源照射2 Gy后,A549和NCI-H446细胞的凋亡率分别为(11.14±1.12)%和(25.27±5.65)%,分别是对照组的5倍和8倍左右,其中NCI-H446细胞的凋亡率较A549细胞显著升高(P＜0.05),显示NCI-H446细胞更敏感.两种细胞的细胞周期均出现明显的G2/M期阻滞(P＜0.05).A549细胞自身蛋白表达显著高于NCI-H446细胞(P＜0.05).结论:125I籽源低剂量率持续照射诱导肺癌细胞凋亡的效果与DNA-PK修复基因的状态和受照射后的变化密切相关.
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Ku70反义寡核苷酸增强甲状腺癌细胞的辐射敏感性
目的 研究DNA修复基因Ku70反义寡核苷酸(ASODN)对甲状腺癌细胞辐射敏感性的影响.方法 设计合成特异性靶向Ku70的ASODN,以不同浓度转染人甲状腺髓样癌细胞(TT),并设脂质体和正义寡核苷酸(SODN)对照组进行比较.采用Western印迹技术检测各组细胞中Ku70蛋白表达水平.利用不同剂量60 Co γ射线照射细胞后,细胞克隆形成实验检测细胞存活分数.CCK-8法、Annexin-V/PI染色法分析ASODN对细胞活力和细胞凋亡的影响.彗星电泳法比较γ射线照射后DNA双链断裂的修复效率.结果 转染ASODN各组细胞Ku70蛋白表达均较脂质体对照组、SODN组明显降低,并呈浓度依赖性;照射后细胞存活率降低(P＜0.01),凋亡率显著增加(P＜0.01),DNA双链断裂的修复效率降低(P＜0.01).结论 ASODN能够特异性地下调甲状腺癌细胞Ku70的表达,抑制γ射线照射后细胞存活和DNA双链断裂修复,提高肿瘤细胞的辐射敏感性.
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CRISPR-Cas9敲除Notch1对CNE2细胞增殖及辐射敏感性的影响
背景与目的:Notch信号转导通路对鼻咽癌的发生、发展及维持肿瘤干细胞的自我更新等具有重要作用,既往研究方法难以使Notch通路中特定基因功能完全丧失.本研究旨在利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Notch1基因敲除的CNE2鼻咽癌细胞系,并观察Notch1敲除对CNE2细胞增殖、辐射敏感性的影响.方法:采用蛋白质印迹法(Western blot)检测人鼻咽癌细胞CNE2及鼻咽正常上皮细胞NP69中Notch1表达水平;利用sgRNA在线设计工具,针对Notch1设计sgRNA;利用PX459质粒构建含sgRNA的敲除载体PX459-Notch1-sgRNA;将质粒瞬时转染CNE2细胞,经过药物筛选、克隆化培养、Western blot检测、免疫荧光染色验证得到Notch1敲除的CNE2鼻咽癌细胞系;采用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测方法、克隆形成实验检测Notch1敲除组(Notch-KO)与未转染亲本组(Parental)、转染PX459空载体水平较的对照组(Ctrl)的增殖活性及辐射敏感性,并进一步采用流式细胞术检测侧群细胞比例.结果:与NP69细胞相比,CNE2细胞中Notch1蛋白水平较高;Western blot检测、免疫荧光染色验证Notch1基因被完全敲除.Notch1基因敲除可抑制细胞增殖活性(P<0.05);Notch1-KO组的D0、Dq和SF2值分别为1.160、1.881和0.630 Gy,低于Parental(1.176、2.533和0.824 Gy,P<0.001)和Ctrl组(1.182、2.516和0.819 Gy,P<0.001);Notch1-KO中侧群细胞比例[(1.13±0.01)％]较Parental[(3.81±0.03)％]、Ctrl[(3.70±0.03)％]明显下降(P<0.001).结论:运用CRISPR-Cas9技术可成功敲除CNE2细胞中的Notch1基因,Notch1基因敲除导致CNE2细胞增殖能力下降、辐射敏感性增加、侧群细胞比例降低.
关键词： Notch1基因 CRISPR-Cas9 鼻咽癌 辐射敏感性 -
大肠癌细胞辐射敏感性的蛋白组学研究
背景与目的: 大肠癌细胞系SW480与LoVo具有不同的辐射敏感性,我们运用蛋白组学技术筛选大肠癌细胞辐射敏感相关的蛋白.方法: 采用SELDI-TOF蛋白芯片技术分别对经0 Gy、2 Gy、4 Gy和6 Gy照射后24 h的SW480与LoVo细胞进行蛋白质谱分析.结果: LoVo细胞在平均质荷比分别为2 478.24、4 521.30、5 383.82和8 454.03的蛋白质峰值随辐射剂量增加而逐渐下降;SW480细胞在平均质荷比分别为5 655.29、7259.53的蛋白质峰值随辐射剂量增加逐渐升高,在平均质荷比分别为15 829.02,17 859.47的蛋白质峰值随辐射剂量增加呈梯度下降.结论: 大肠癌细胞辐射敏感性的预测可以通过蛋白质水平来体现.
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MicroRNA-150对NK/T细胞淋巴瘤组织和NK-92细胞辐射敏感性的影响
目的:探讨microRNA-150 (miR-150)对NK/T细胞淋巴瘤组织和NK-92细胞辐射敏感性的影响.方法:选取2010年1月至2016年1月在南方医科大学珠江医院收治的NK/T细胞淋巴瘤患者36例为研究对象,并收集患者的组织标本.所有患者均接受放疗并采用淋巴瘤国际工作组标准((IWG)评价患者的近期疗效,根据疗效分为完全缓解(CR)组和未完全缓解组(Non-CR).实时荧光定量PCR检测患者肿瘤组织及NK/T细胞淋巴瘤细胞系中miR-150的表达量,向淋巴瘤NK-92细胞转染miR-150 mimics,利用MTT法和集落形成实验分析过表达miR-150对NK-92细胞辐射敏感性的影响,流式细胞术检测转染过表达miR-150对NK-92细胞辐射致凋亡的影响,Western blotting实验检测miR-150对凋亡相关蛋白Caspase3和PARP表达的影响.结果:根据IWG标准,12例患者CR,24例患者为Non-CR;与CR组相比,Non-CR组患者miR-150表达量普遍下调(P＜0.05).与正常对照sCD3-CD56+ NK细胞相比,NK/T细胞淋巴瘤组织(9.10±0.19 vs4.01±0.22,P＜0.01)和5种NK/T细胞淋巴瘤细胞系中miR-150呈明显低表达(P＜0.05).过表达miR-150可明显降低辐射后NK-92细胞的增殖能力(P＜0.01)和集落形成能力(P＜0.01),明显提高NK-92细胞的辐射增敏比(10 Gy时辐增敏比为5.375),显著促进辐射诱导的NK-92细胞的凋亡[(37.3±1.24)％vs(28.3±2.34)％,P＜0.05],可促进激活的Caspase 3和PARP蛋白表达.结论:miR-150在NK/T细胞淋巴瘤组织标本及体外培养细胞系中的表达呈显著低水平,miR-150表达量低的患者放疗后缓解率低;转染miR-150 mimics能够增强辐射对NK-92细胞增殖的抑制作用和促进辐射诱导致凋亡作用,对NK/T细胞淋巴瘤有辐射增敏作用.
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抑制Polo样激酶1对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响
目的:探索抑制Polo样激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2辐射敏感性的影响.方法:分别运用siRNA和小分子抑制剂BI2536抑制CNE-1和CNE-2细胞内PLK1的表达或磷酸化,通过MTT法检测抑制PLK1对NPC细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测对细胞周期和凋亡的影响,细胞免疫荧光检测对辐射后DNA损伤位点的影响,克隆形成实验及曲线拟合计算对辐射后细胞放射生物参数和放射增敏比(sensitizationenhancement ratio,SER)的影响.结果:与对照组相比,抑制PLK1可以明显抑制NPC细胞增殖,并诱导细胞发生G2-M期阻滞和有丝分裂灾难.抑制NPC细胞PLK1联合射线辐射后,NPC细胞克隆形成能力下降(CNE-1:P ＜0.05;CNE-2:P ＜0.05),且随着BI2536浓度的增大克隆形成能力下降更加明显(CNE-1:P ＜0.05;CNE-2:P ＜0.05);细胞生存分数明显降低(均P＜0.05);核中γ-H2AX位点数目明显增加(P＜0.05);细胞凋亡率显著升高(均P＜0.05);siR-PLK1转染CNE-1和CNE-2后SER分别为1.1988和1.3198,BI2536处理CNE-1和CNE-2后SER分别为1.5508和1.2028.结论:抑制PLK1可以抑制NPC细胞增殖,诱导发生细胞周期阻滞和有丝分裂灾难,并能显著提高NPC细胞辐射敏感性.
关键词： polo样激酶1 鼻咽癌 小分子抑制剂BI2536 辐射敏感性
