首页 > 文献资料
-
荜茇药材中荜茇酰胺高效液相色谱研究
目的 建立一种快速简便地测定荜茇药材中荜茇酰胺含量的方法,并用此方法测定不同产地及不同药用部位荜茇药材中荜茇酰胺含量.方法 以荜茇药材中荜茇酰胺为指标成分,采用迪马Diamond C18(5μm 250×4.6 mm)色谱柱,流动相为甲醇-水(35∶65),流速1mL· min-1,柱温30℃,进样量20 μL,检测波长254 nm,测定荜茇药材中荜茇酰胺含量,并用该方法测定海南、广西、四川等产地荜茇药材中荜茇酰胺的含量,并比较其差异.结果 荜茇药材中的荜茇酰胺含量在0.0414～0.3726 mg·mL-1与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.58％,RSD=1.03.不同产地荜茇药材中,广西壮族自治区产地的荜茇中荜茇酰胺含量高,荜茇茎中荜茇酰胺的含量明显低于荜茇果实.结论 该方法建立了一种快速、准确、经济的测定荜茇药材中荜茇酰胺含量的方法,为荜茇药材的质量控制与品质评价奠定了基础,不同产地及不同药用部位的荜茇中荜茇酰胺含量存在差异.
-
中药荜茇活性成分荜茇酰胺抗胃癌的作用机制研究
目的 观察不同浓度中药荜茇活性成分荜茇酰胺作用不同时间对胃癌MKN45细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 将培养至对数期的胃癌细胞株MKN45用不同浓度的荜茇酰胺处理后,选择10μmol/L荜茇酰胺用于后续实验,设定空白对照组、3 mmol/L抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)组、10μmol/L荜茇酰胺组和3 mmol/L NAC预处理+10μmol/L荜茇酰胺组.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率、活性氧簇(ROS)水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测通路中相关蛋白p21、X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、剪切聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达情况.结果 ① 细胞活性:荜茇酰胺可抑制MKN45细胞活性,其作用呈浓度和时间的正相关性(均r>0.8,P<0.05);②G1期阻滞:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞G1期阻滞,其作用呈浓度正相关性(均r>0.8,P<0.05),0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下G1期细胞为(35.33±3.56)％、(41.42±4.04)％、(48.78±5.24)％、(55.12±5.78)％;③ 细胞凋亡:荜茇酰胺可诱导MKN45细胞凋亡,其作用呈浓度依赖性,0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺作用下细胞凋亡率分别为(9.21±2.13)％、(13.82±3.45)％、(19.66±4.73)％、(25.21±5.05)％;④caspase细胞凋亡途径:0、5、7.5、10μmol/L荜茇酰胺可下调抗凋亡蛋白XIAP表达,上调剪切caspase-9及剪切PARP表达(XIAP为0.432±0.101、0.120±0.022、0.023±0.005、0.005±0.001,剪切caspase-9为0.003±0.001、0.007±0.001、0.225±0.049、0.649±0.132,剪切PARP为0.005±0.001、0.014±0.003、0.428±0.152、0.895±0.111);即荜茇酰胺可激活caspase依赖性凋亡途径,其作用呈浓度依赖性;⑤ROS-p53细胞凋亡途径:荜茇酰胺能上调ROS、p53、p21、p53凋亡调控因子(PUMA)表达,其作用呈浓度依赖性,经NAC处理后,ROS水平降低为(850.48±124.53)U/L,MKN45细胞活性上升为(73.45±6.12)％,p53降低为0.732±0.152、剪切PARP蛋白表达降低为0.487±0.108.结论 荜茇酰胺可抑制胃癌细胞MKN45增殖,降低其活性,阻滞细胞周期G1期,诱导凋亡,可能的作用机制为提高细胞ROS水平,激活p53与caspase凋亡途径有关.
-
荜茇酰胺对人肺腺癌A549细胞的增殖及其辐射敏感性的影响
目的 探讨荜茇酰胺对人肺腺癌A549细胞的增殖以及辐射增敏性的影响.方法 体外培养人肺腺癌A549细胞,取对数生长期细胞进行实验.采用活细胞计数盒(CCK-8)法测定荜茇酰胺对A549细胞生长增殖的影响;流式细胞术观察细胞周期和凋亡.结果 荜茇酰胺明显抑制A549细胞的增殖,引起细胞凋亡和细胞G0/G1期的阻滞.荜茇酰胺联合X射线照射能明显增加细胞的增殖抑制率和细胞凋亡.结论 荜茇酰胺可明显抑制人肺腺癌细胞的生长增殖.低浓度的荜茇酰胺增加了人肺腺癌细胞的辐射敏感性,可能与其促进细胞的增殖抑制、诱导细胞凋亡、引起G0/G1期阻滞有关.
-
荜茇酰胺对胶质瘤细胞增殖影响
目的 探讨荜茇酰胺(piperlongumine)对胶质瘤增殖影响及机制.方法 采用荜茇酰胺处理2种不同人脑胶质瘤细胞系,同时设正常神经元和胶质细胞对照;采用噻唑蓝法检测细胞增殖力,采用试剂盒法检测细胞内活性氧(ROS)及过氧化物还原酶4(PRDX4)活性,采用Annexin V染色法检测细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测PRDX1 ～6基因表达.结果 与对照组比较,荜茇酰胺能够明显抑制胶质瘤细胞增殖能力,增强2种胶质瘤细胞内的ROS水平(P＜0.05),但对正常神经元则无明显影响;与对照组比较,胶质瘤细胞凋亡率明显升高(P＜0.05),胶质瘤细胞内PRDX4表达上升(P＜0.05).结论 荜茇酰胺可通过提高PRDX4的表达从而介导胶质瘤细胞的凋亡.
关键词： 荜茇酰胺 胶质瘤细胞 活性氧(ROS) 过氧化物还原酶4(PRDX4) 凋亡率 -
荜茇酰胺对人胃癌细胞株 MKN45增殖、凋亡的影响及其机制研究
背景：近年研究显示，荜茇酰胺（PL）在诸多恶性肿瘤中可通过升高活性氧（ROS）水平选择性杀伤肿瘤细胞，然而其对胃癌细胞的作用仍有待进一步研究。目的：探讨 PL 对人胃癌细胞株 MKN45增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法：以不同浓度 PL 以及 caspase 抑制剂、抗氧化剂单独或联合处理 MKN45细胞，CCK-8法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和细胞内 ROS 水平，蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白 XIAP、cleaved-caspase3、7、9、cleaved-PARP、p53及其下游靶基因 p21、GADD45α、PUMA 表达。结果：PL 可剂量和时间依赖性地抑制 MKN45细胞增殖，经 PL 处理的 MKN45细胞 G1期细胞比率、细胞凋亡率和细胞内 ROS 水平显著升高，抗凋亡蛋白 XIAP 表达下调， caspase 依赖性凋亡途径、p53及其下游靶基因激活。抗氧化剂 NAC 或广谱 caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 预处理可逆转PL 的促 ROS 生成以及增殖抑制和促凋亡作用。结论：PL 能抑制 MKN45细胞增殖，使细胞发生 G1期阻滞，诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应的作用机制可能为升高肿瘤细胞内 ROS 水平，进而激活 p53和 caspase 依赖性凋亡途径。
关键词： 荜茇酰胺 活性氧 肿瘤抑制蛋白 p53 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 细胞凋亡 胃肿瘤 -
荜茇酰胺对人肺腺癌 A549细胞辐射敏感性的影响
目的：探讨荜茇酰胺对人肺腺癌A549细胞辐射敏感性的影响。方法体外培养人肺腺癌A549细胞，分别加入1、2、4、8、16μmol／L荜茇酰胺作用24、48、72 h，采用CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率，筛选出对A549细胞毒性低的浓度。将A549细胞分为空白对照组、荜茇酰胺组、单纯照射组以及联合处理组，空白对照组不做处理，荜茇酰胺组加入1μmol／L荜茇酰胺，单纯照射组给予8 Gy X线照射，联合处理组先给予1μmol／L荜茇酰胺作用48 h后再给予8 Gy X线照射。采用CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率，流式细胞术观察各组细胞周期及凋亡情况。结果不同浓度荜茇酰胺处理A549细胞24、48、72 h后，1μmol／L荜茇酰胺的细胞增殖抑制率均低于其他各组（P均＜0．05）。联合处理组48 h时的细胞增殖抑制率高于单纯照射组和荜茇酰胺组（P均＜0．05）。联合处理组G0／G1期细胞比例较单纯照射组增多，而S期细胞比例减少，细胞凋亡率高于单纯照射组（ P均＜0．05）。结论1μmol／L荜茇酰胺能够增加A549细胞对X射线的辐射敏感性，其机制可能与促进细胞增殖抑制、诱导细胞凋亡、引起细胞G0／G1期阻滞有关。
-
荜茇酰胺对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨荜茇酰胺(PL)对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖、凋亡和生长迁移的影响.方法 用MTT法检测不同浓度(0、5、20 μmol/L)的PL干预后的人胆管癌HCCC-9810细胞增殖活力,并用Hochest33258试验和细胞划痕试验分别检测HCCC-9810细胞的凋亡和生长迁移情况.结果 人胆管癌HCCC-9810细胞经不同浓度(0、5、20 μtmol/L)的PL处理后,其PL浓度越高,细胞增值率越降低(P＜0.01),核变形细胞比例越高(P＜0.01).结论 PL能明显抑制人胆管癌HCCC-9810细胞的增殖,且具有明显的浓度依赖性;PL且可诱导人胆管癌HCCC-9810细胞的凋亡,并明显抑制人胆管癌HCCC-9810细胞生长迁移.
关键词： 荜茇酰胺 胆管癌 HCCC-9810细胞凋亡 -
荜茇酰胺药理学作用机制及研究进展
荜茇酰胺属一种有多种药理学作用的生物碱类化合物，其具有抗恶性肿瘤、抗血小板凝集、调节血脂代谢、抗帕金森病、促进黑色素细胞增殖、抗炎、抗真菌等作用，而对正常的细胞、组织、器官无明显的毒副作用。本文对其在各种疾病的药理学机制的研究进展进行综述。
-
荜茇酰胺对儿童抗凝、抗血小板聚集作用的体外实验研究
目的 观察荜茇提取物荜茇酰胺(PL)对儿童具有抗血小板、抗凝作用,为临床用药提供实验依据.方法 抽取30名健康儿童静脉血,随机分为5组,分离富血小板血浆(PRP),取PRP分别加入二甲基亚砜(DMSO)作为空白组,加入阿司匹林(终浓度10 μmol/L)作为对照组,加入PL(终浓度分别为20、100、200 μmol/L)作为不同浓度PL组,37 ℃孵育5 min,作用后PRP分别加入诱导剂二磷酸腺苷(ADP)终浓度10 μmol/L,胶原(Coll)终浓度2.5 μg/mL,花生四烯酸(AA)500 μg/mL,采用比浊法在37 ℃条件下测定血小板聚集率.抽取静脉血分离血浆后分5组,将不同浓度PL分别与3组血浆混合,终浓度分别为5、10、20 μmol/L,空白组将1％ DMSO与血浆混合,对照组将肝素钠与血浆混合(35 U/mL),各组37 ℃孵育5 min后上机检测纤维蛋白原(FIB)水平、凝血酶原时间(PT)及凝血酶时间(TT)、活化部分凝血酶原时间(APTT).结果 与对照组比较,PL(20、100、200 μmol/L)干预后对AA、Coll诱导的血小板聚集均有显著抑制作用(P<0.05),PL 100 μmol/L、PL 200 μmol/L可以显著抑制ADP诱导的血小板聚集率(P<0.05);PL 10 μmol/L、PL 20 μmol/L干预后可以显著延长儿童血浆的PT、APTT、TT值(P<0.05),但FIB未见明显变化.结论 PL能抑制儿童血浆的血小板聚集,抑制抗凝活性.
-
荜茇酰胺对人肺癌A549/DDP细胞耐药性的逆转作用
目的:研究荜茇酰胺对人肺癌A549/顺铂(DDP)细胞耐药性的逆转作用.方法:A549/DDP细胞经0、20、30 μmol/L荜茇酰胺作用48h后,用MTS法检测肿瘤细胞抑制率;流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、细胞周期、P-糖蛋白(P-gp)表达和肿瘤细胞内罗丹明Rht123含量的变化;Western blotting法检测多药耐药基因(MDR)1、多药耐药相关蛋白(MRP)1、DNA拓扑异构酶(Top)Ⅱ、谷胱甘肽S-转移酶(GST)-π、凋亡抑制蛋白Survivin、周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)1和蛋白激酶(PK)Cζ蛋白表达;实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MDR1、MRP1、Top-Ⅱ、GST-π、Survivin和CDKl mRNA表达;酶标仪检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8活性.结果:A549/DDP细胞经0、20、30 μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP对肿瘤细胞增殖的抑制率明显升高;与0 μmol/L比较,20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP导致的细胞凋亡率和G2期/M期明显升高,P-gp表达明显减弱,Rh-123浓度明显增加,MDR1、MRP1、Top-Ⅱ、GST-π、Survivin、CDK1和PKCζ蛋白表达明显减弱,MDR1、MRP1、Top-Ⅱ、GST-π、Survivin、CDKmRNA表达明显减弱,Caspase-3、8的活性明显增强.结论:荜茇酰胺可逆转人肺癌A549/DDP细胞DDP耐药性,可能与其调节多药耐药相关基因表达有关.
