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乌鲁木齐市部分高危人群庚型肝炎病毒感染现状及5′ UTR区基因序列分析
新疆地处我国西部边陲,存在着各型肝炎散发流行的危险因素,庚型肝炎病毒在乌鲁木齐市的流行现状尚未见报道.在新疆医科大学第一附院收集了267份各类人群的血清,用酶标法检测血清中庚型肝炎病毒抗体(抗-HGV),再以庚型肝炎病毒NS3区为引物运用RT-PCR法对抗-HGV(阳性)血清进行庚型肝炎病毒核酸(HGV RNA)的扩增检测,阳性扩增产物为83bp.后,选择该病毒5′非编码区为引物对第一次RT-PCR扩增HGV RNA(阳性)血清,再次进行
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HGV RNA逆转录套式聚合酶链反应法的优选实验
1995年,美国Simons等和Linnen等分别从肝炎患者的血清中克隆出庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)的基因组,并建立了检测血清GBV-C/HGV RNA的逆转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)方法.但是,该检测方法的灵敏度存在着较大差异.本实验使用A~E共5套PCR引物,基中A、B、D为自行设计的HGV 5′端非编码区引物,目的产物长度分别为368bp, 158bp及220bp;C引物为参照文献设计的核心区引物,目的产物为302bp;E引物为李倬副研究员设计的NS3区引物,目的产物长度为591bp.采用改良的异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取HGV RNA,套式逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR).
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如何看待病毒性肝炎的基因诊断
基因诊断是以检测感染者体内病毒核酸的有无,或含量多少来进行病原学诊断的一种方法,它可用在各种感染性疾病的诊断中,尤其在病毒性肝炎的诊断方面得到广泛应用.病毒性肝炎基因诊断包括病毒基因种类、含量、基因分型、亚型和变异及准种等的诊断.由于甲型肝炎和戊型肝炎无慢性化,且有较好的血清学诊断指标,故一般不需进行基因诊断.至于庚型肝炎病毒和经输血感染的病毒(TTV),因至今尚未明确其对人类的致病性,这两种病的基因诊断在临床上也较少应用,目前主要用于基础和实验研究.为此,仅对基因诊断在慢性乙型肝炎和丙型肝炎中的应用加以切磋.
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肝胆疾病患者各型肝炎病毒血清标志分析
肝胆疾病在本地区有较高的发病率.为了解此类疾病与各型肝炎病毒感染的关系,我们收集近年来我院收治的部分住院的肝胆疾病患者血清,做了从甲~庚型肝炎病毒血清学标志检测,现报告如下.
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广州地区部分人群庚型肝炎病毒感染的流行病学调查
[摘要]目的 为了解广州地区庚型肝炎病毒(HGV)感染的现状和流行特点,我们对348例住院和门诊的肝病患者进行了HGV RNA、HGV抗体(HGV-Ab)检测,现将结果报道如下.
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艾滋患者群中HCV、HBV及HGV的感染状况
目的:了解丙型肝炎病毒(HCV)、乙型肝炎病毒(HBV)和庚型肝炎病毒(HGV)在艾滋病病毒(HIV)感染人群中的感染状况,初步分析病毒之间的相互影响.方法:对血源性艾滋病流行地区人群进行流行病学调查,检测HIV阳性人群血清抗-HCV、HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc、抗-HGV及梅毒抗体.结果:314名HIV阳性人群中,抗-HCV阳性273例(86.9%),HBVM(HBV病毒标志物)阳性95例(30.3%),HBsAg阳性13例(4.1%),抗-HGV阳性206例(65.6%),梅毒抗体2例阳性(0.6%).HIV重叠感染HGV组AIDS患病率明显低于未重叠感染组.结论:在艾滋病高发地区,HIV感染者常合并HCV、HGV感染;HIV合并HCV和/或HGV感染可能干扰HBsAg合成;合并感染HGV可能延缓HIV感染者疾病的进展.
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HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中相关病毒抗原表达
庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的致病性是目前研究焦点之一,多数研究表明大多数HGV/GBV-C感染者体内常有两种或两种以上的肝炎病毒混合感染,并认为HGV/GBV-C感染对原有乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染的基础病变似无明显影响[1-3].但仅从血清学、临床表现及常规病理角度试图说明HGV/GBV-C对机体有无损害的研究工作是很困难,我们应用免疫组织化学技术对HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中HGV/GBV-C.HCV相关抗原表达进行研究,试图从免疫病理学角度探讨HGV/GBV-C对机体肝脏的致病性.
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敏感特异RT-nPCR检测高危人群HGV感染状况
目的建立敏感、特异的RT-nPCR技术以检测高危人群中HGV感染状况.方法根据已知并已公认的HGV序列,在其5'UTR区寻找大同源序列并设计套式引物建立HGVRNA的RT-nPCR检测法,对129例高危人群(包括48例静脉药瘾者,15例血透患者及各型肝炎患者66例)的血清标本进行检测.结果我们所建立的5′UTR引物的RT-nPCR检测HGVRNA的敏感性高于NS3区引物的RT-nPCR的敏感性(高10~100倍);IVDUs、血透者及乙型、丙型、非甲-戊型肝炎患者HGVRNA的检出率分别为12%(6/48),13%(2/15)及17%(3/18),22%(7/32),6.2%(1/16),抗-HGV的检出率分别为10%(5/48),7%(1/15)及22%(4/18),28%(9/32),25%(4/16).输血组的HGV感染率(38%)显著高于未输血组(18%)(P<0.05).结论5′UTR区引物的HGVRNA RT-nPCR检测法敏感、特异;HGV在高危人群中的感染普遍存在,是部分非甲-戊型肝炎的病因,输血和使用血制品为HGV传播的重要的途径.
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地高辛素标记探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒RNA
目的自从建立起甲、乙、丙、丁、戊5种肝炎病毒的病原学诊断之后,仍有少部分肝炎患者的病因得不到明确,因此不少学者试图探索是否还有新型肝炎病毒的存在,并进行了大量的流行病学和实验诊断的研究,认为的确存在可经肠道外传播并引起人类肝炎的致病因子.目前关于庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)的致病性和组织嗜性尚无结论性资料.本文目的是研究HGV/GBV-C RNA在肝组织中表达并进一步探讨HGV/GBV-C引起肝脏损害的可能机制.方法应用地高辛素标记HGV/GBV-C cDNA探针原位杂交法检测肝组织中庚型肝炎病毒RNA.结果检测196例肝炎患者肝组织切片中的HGV/GBV-CRNA阳性率为37.24%;在血清中HGV/GBV-CRNA呈阳性患者肝组织中该病毒RNA检出率为48.94%;单一HGV/GBV-C感染者肝组织中检出率为58.33%;阳性信号仅为胞质型.原位杂交信号阳性细胞与肝细胞变性、瘀胆、炎性细胞浸润及细胞坏死程度等并不相关.本文原位杂交与免疫组化两种检测方法对比研究结果表明,两项技术有较高的符合率(86.74%),说明这两项技术具有相辅相成的作用.结论提示HGV/GBV-CRNA并不直接损害肝细胞.原位杂交和免疫组化两项技术成功地应用于石蜡包埋切片,为回顾性研究HGV/GBV-C的致病性及致病机制提供了有价值的实验手段.
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HGV RNA转录体感染恒河猴的血清学及组织学改变
目的:观察接种HGV实验猴的血清学和组织病理改变,以探讨HGV对恒河猴的致病性.方法:将庚型肝炎病毒(HGV)全长RNA转录体肝内注射感染恒河猴,检测血清HGV RNA、ALT变化和抗HGV.定期取实验猴肝组织,观察肝组织病理改变.免疫组化对HGV E2蛋白的表达进行定位分析尸检取猴的各种脏器进行常规病理检查,并分析HGV E2蛋白在心、肝、胰、脾和肾脏的表达.PCR检测心、肝、胰、脾和肾脏中HGV正负链RNA的存在透射电镜分析肝组织超微结构的变化.结果:感染后lwk HGV RNA即阳转,长持续达27wk.实验恒河猴血清ALT间歇性升高,高达2106nkat·L-1.肝组织学活检呈现轻度炎性病变,尸检结果表明实验猴死于间质性肺炎,除肝组织炎症改变外,其他组织正常.免疫组化显示HGVE2蛋白主要在肝细胞质内表达,在心脏和脾脏亦有不同程度的表达.HGV基因组RNA和负链RNA的检测表明HGV在肝脏以外的其他脏器如心和脾脏中亦有复制.电镜结果表明肝细胞超微结构改变较大,肝窦内发现直径约25nm~30nm的病毒样颗粒呈晶格状排列.结论:HGV RNA转录体有感染性并能形成病毒血症.恒河猴对HGV感染敏感,可作为研究HGV复制及致病性的动物模型.
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乙型病毒性肝炎研究进展(综述)
肝炎是严重危害人类健康的疾病之一,它是由以侵害肝脏为主而引起病毒性肝炎的一组病原体所致.目前,已明确病毒性肝炎至少有五个型,即甲型病毒性肝炎、乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、丁型病毒性肝炎、戊型病毒性肝炎.与肝炎相关的病毒还有庚型肝炎病毒和TT型肝炎病毒,但均未被后确定[1].其中乙型病毒性肝炎是全球病毒性肝炎中的重点防治传染病,尤其在发展中国家,也包括中国,不仅其发病率和流行率高,而且造成的影响特别严重.因此,对乙型病毒性肝炎的研究,一直是国内外专家重点讨论的课题之一.
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庚型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在男男同志人群中的应用
目的 建立庚型肝炎病毒(GBV-C)的实时荧光定量PCR检测方法.方法 根据GBV-C 5'-端非编码区序列设计引物及其相应的TaqMan探针,构建质粒标准品,建立绝对定量检测方法,分别对99份HIV-1阳性和175份HIV-1阴性男男同性恋者标本进行检测.结果 建立了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.99.99份HIV-1阳性标本中,34份检测结果为阳性;175份HIV-1阴性标本中,22份为阳性结果,检测结果线性范围良好,且均与定性巢式RT-PCR检测结果一致.结论 GBV-C实时荧光定量PCR检测方法具有快速、特异性强和稳定性好等优点,为进一步研究GBV-C与HIV-1共感染对HIV/AIDS患者疾病进程的影响提供了一定的技术支持和平台.
关键词: 庚型肝炎病毒 荧光定量聚合酶链反应 男男同志人群 -
肝癌患者乙、丙、丁、庚型肝炎病毒感染状况分析
原发性肝癌是常见的10种恶性肿瘤之一,已占我国居民恶性肿瘤死亡的第2位[1].病毒性肝炎则是危害人类健康严重的一种传染病,我国年罹患率高达100/10万~200/10万,在国际上被划为高度流行区[2].
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对HIV流行地区人群抗庚型肝炎病毒抗体的调查
目的在艾滋病病毒(HIV)流行地区调查庚型肝炎(庚肝)病毒(HGV)的感染率,并探讨其对HIV/AIDS患者病情进展的影响.方法对某HIV流行地区647名村民询问病史,检测血清抗-HGV和抗-HIV.结果 647人中检测出抗-HGV 333例(51.5%),抗-HIV 328例(50.7%),混合感染HGV和HIV 210例(32.5%);其中≥20岁、有供血浆史或HIV感染者是HGV感染的高危人群.HIV感染合并HGV人群与不合并感染HGV人群相比较,其患AIDS或AIDS死亡者所占比例较低.结论供血浆传播是造成该地区HGV和HIV流行的主要原因,合并感染HGV似乎能延缓HIV/AIDS患者病情的进展.
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庚型肝炎病毒(HGV RNA)基因的定量检测
目的:建立庚型肝炎病毒基因(HGV RNA)的定量检测方法.方法:采用荧光转换原理,应用特异荧光物质标记的引物进行逆转录PCR(RT-PCR),检测41例临床血清标本的HGV RNA.结果:与巢式定性PCR结果比较,两者具有相关显著性.以定量实验为标准定性实验的阳性漏检率为3.33%,阴性漏检率为18.1%,两者相对符合率为92.68%.结论:定量检测HGV RNA在定性的基础上提供了量的结果,而且具有特异性强、结果稳定、操作简便等特点.
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新兵人群庚型肝炎病毒感染流行病学调查
目的:了解新兵人群庚型肝炎病毒感染情况.方法:采用血清流行病学调查方法,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)技术,随机抽取近5年入伍新兵444例血清进行庚肝病毒IgM和IgG抗体检测,统计分析其阳性率.结果:各年度新兵血清庚肝病毒IgM、IgG均未检出;对2006、2007年入伍新兵9169例筛查出的HBsAg阳性20例标本,进一步行庚肝病毒IgM、IgG检测均为阴性.结论:新兵人群中庚型肝炎病毒既往感染率较低.
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聚合酶链反应检测HGV RNA方法的建立及应用
目的:了解我国不同人群中庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)感染的状况.方法:以NS5区序列分析为基础设计引物,建立聚合酶链反应方法,并对我国几个地区、不同疾病状况的268例患者进行庚型肝炎病毒核酸的检测.结果:有输血史的健康人群、HBV和HCV感染者及慢性非乙非丙型肝炎患者的GBV-C/HGV RNA阳性率均高于自然人群,分别为13.3%,18.4%,19.8%,8.9%,其中有明确血液暴露史者的检出率达20.1%.结论:庚型肝炎在我国有广泛的流行,输血等肠道外途径为重要危险因素.
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不同区引物检测庚型肝炎病毒RNA
1995年Genelabs和Abbott公司相继报道了一种与人类肝炎相关的RNA病毒,分别命名为HGV(hepatitis G virus)和GBV-C(GB virus C)[1,2],即庚型肝炎病毒(本文统称为HGV).此后国内外许多学者应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-PCR, RT-PCR)技术在多组不同人群中检出了HGV,其阳性率1.2%~33.3%[3].我们根据HGV的病毒全序列[4]和国内外部分研究资料[5~8],分别设计合成了HGV基因组不同区的4组引物,同时对同一批样品进行了比较分析,探讨不同区引物检测HGV-RNA的情况.
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散发性肝炎患者及血液透析病人血清中HGV RNA的检测及其意义
庚型肝炎病毒(HGV)是近年来被证实为与人类肝炎有关的一种RNA病毒[1,2].为了解HGV在各型肝炎中的感染情况及传播,我们对本院的肝炎病人、血液透析患者及献血员进行了HGV RNA的检测.
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巢式RT-PCR法检测HIV-1阳性者中庚型肝炎病毒感染的研究
目的 调查HIV流行地区庚型肝炎病毒(HGV)在HIV阳性人群中的感染率,并探讨其对HIV病程的影响.方法 根据已知并公认的HGV序列,设计特异巢式引物,建立HGVRNA的巢式RT-PCR方法,对100例HIV-1阳性感染者进行检测,同时进行CD4+T细胞计数和HIV病毒载量的测定.结果 100例HIV-1阳性者中检测出HGVRNA阳性感染者22例(22%);合并感染HGV的HIV感染人群体内可见有较高CD4细胞数.结论 HIV阳性感染者有较高的HGV重叠感染率,可能与其具有共同的传播途径有关,合并感染HGV似乎能延缓HIV感染者的病程.