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不同因素对非甲基化CpG ODN佐剂活性的影响
CpG ODN即含有胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸的寡脱氧核苷酸,研究发现,非甲基化的CpG ODN能够显著促进机体的特异性及非特异性免疫应答,是一种高效的TH1型疫苗佐剂,它的佐剂活性与其结构有着密切的关系.我们综合考虑了可能影响CpG ODN佐剂活性的6个因素,即骨架是否进行了硫代修饰、是否具有回文结构、CpG基序侧翼序列的种类、CpG基序数量的差异、是否含有5′-poly(A) 结构以及免疫时间的长短,利用正交试验设计合成了10种不同序列的CpG ODN(表1).
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新型乙肝疫苗CpG-BW006佐剂对鼠脾B细胞表型和功能的影响
乙型肝炎病毒(HBV)感染是慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌的重要原因,目前尚无治疗HBV感染的特效方法.乙肝疫苗是预防HBV感染安全、有效的手段.然而,接种乙肝疫苗后的免疫应答受多种因素的影响,约有10%的人群对该疫苗反应低下或无反应[1].CpG为近年来佐剂研究的热点.由于CpG-ODN具有同时提高细胞免疫和体液免疫的特点,在体内主要诱导Th1型免疫应答,因此被认为是一种有潜力的新型免疫佐剂[2].本研究用一种新设计合成的含有CpG基序的寡核苷酸( BW006)联合HBsAg对B细胞表型和功能的影响进行研究,目的是探讨CpG作为乙肝疫苗佐剂诱导机体免疫应答的机制,为新型预防和治疗性乙肝疫苗的研发提供依据.
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SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测DNA甲基化方法的建立
近期,表观遗传学与肿瘤发生关系的研究日益增多[1-2].DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分,并已成为肿瘤早期诊断的研究热点.甲基化特异性PCR(MSP)是检测DNA甲基化的常用方法之一[3],该方法灵敏度和特异度高,但操作繁琐,难以自动化.TaqMan荧光定量PCR法,即Methylight在MSP的基础上设计1条TaqMan探针,该方法的准确性和检测的灵敏度都很高.然而,因需要设计合成特异的探针而使其的应用受限[4],而且TaqMan探针昂贵[5].本研究建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR(FQ-PCR)检测DNA甲基化的方法,通过临床标本检测和对比试验,以证明其与Methylight的检测效能,以便为DNA甲基化检测的临床应用提供工具.
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聚合酶链反应在腺病毒角结膜炎诊断中的应用
设计合成多聚合酶链反应(PCR)通用引物,结合限制性片段长度多态性(RFTL)分析,建立了腺病毒性角结膜炎的检测方法,初步应用于急性角结膜患者眼拭子标本的检测.
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反义Survivin诱导食管鳞癌细胞凋亡
目的:研究Survivin ASODN联合三氧化二砷(As2O3)对食管鳞癌细胞系EC109凋亡的影响.方法:设计合成特异性Survivin反义寡核苷酸(ASODN).细胞分成6组:空白对照组、空脂质体转染对照组、正义链转染对照组、160、200、240 nmol/L反义链转染组.以阳离子脂质体为载体转染至EC109细胞内,用Western blot法检测各组细胞Survivin蛋白表达情况;TUNEL法检测细胞凋亡情况;MTT法检测As2O3和5-氟尿嘧啶(5-Fu)对转染前后细胞的生长抑制情况.结果:各浓度ASODN转染组癌细胞Survivin蛋白表达有不同程度减少,而各对照组细胞Survivin蛋白表达无明显变化.各ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(5.48±1.56,6.04±1.95,11.92±1.76 vs 1.52±0.73,P<0.05),以240 nmol/L转染组明显高于160和200 nmol/L组(11.92±1.76%vs5.48±1.56%,6.04±1.95%,P<0.05).240 nmol/L转染组中As2O3对肿瘤细胞生长抑制率明显高于5-Fu组(56.40±1.27%vs 43.49±0.83%,P<0.05).结论:Survivin ASODN转染食管鳞癌细胞能下调Survivin蛋白的表达,诱导食管鳞癌细胞凋亡,抑制细胞增值,增加食管鳞癌细胞对化疗药物As2O3的敏感性.
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VEGF165核酶对裸鼠人肺腺癌的治疗作用
本研究设计合成针对血管内皮生长因子165(VEGF165) 212位点的锤头状核酶及其突变体,构建其腺病毒真核表达载体,并转染人肺腺癌细胞A549,观察核酶对肿瘤细胞生物学特性和VEGF165 表达的影响及其对肿瘤生长的抑制作用.
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金属卟啉化合物光动力学作用对人膀胱癌细胞株增殖与凋亡的影响
光动力学疗法(PDT)由于其良好的肿瘤特异性、较小的副作用而可用于膀胱癌的治疗.我们设计合成了金属卟啉化合物5,10,15,20-四(N-甲基-4-吡啶基)锰卟啉四碘盐(简称锰卟啉),探讨光动力学作用对人膀胱癌细胞增殖和Bcl-2、Bax表达的影响,现报告如下.
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新螯合剂FZ-82-4的毒性实验研究
在核事故情况下,特别是在事故早期,促排是减少病员内照射剂量的重要途径之一。传统使用的促排剂有EDTA、DTPA等。70年代初,封觉设计合成了螯合剂H-73-10,经动物实验证明它对钚、钍和铀的促排效果优于DTPA和喹胺酸[1-3]。嗣后又合成了新型螯合剂FZ-82-4,经动物实验表明它对上述核素及重金属有更强的螯合作用,是一种新型高效的促排剂。本文作者仅就其对动物的急性、长期毒性进行了实验研究,并对该药的毒性进行了初步评价。 一、材料和方法 1.实验动物:急性毒性实验用昆明种小鼠,体重(22.10±2.08) g;长期毒性实验用Wistar大鼠,体重(157.74±11.37) g,雌雄各半,两种动物均由中国辐射防护研究院动物室提供。
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新型2-吲哚酮类c-Met激酶抑制剂的设计、合成及活性研究
目的 设计合成新型2-吲哚酮类c-Met激酶抑制剂.方法 以c-Met激酶抑制剂SU11274为先导化合物,利用生物电子等排原理设计出系列2-吲哚酮类衍生物.以2-吲哚酮为起始原料,先后经历与氯磺酸的氯磺酰化、与3的磺酰胺化、与6a~6h,7a~7h和4a~4b的缩合反应制得目标产物10a~10r,并测定它们对c-Met激酶和MCF-7细胞增殖的抑制活性.结果与结论 成功合成了设计的18个2-吲哚酮类化合物,产物结构经1H NMR和ESI-MS确证.部分化合物显示出一定的c-Met激酶和MCF-7细胞增殖抑制活性.对目标产物进行了初步构效关系分析,为该类化合物进一步的结构优化奠定了基础.
关键词: 抗肿瘤 c-Met激酶抑制剂 2-吲哚酮 设计合成 -
芳酰基类蛋白酪氨酸激酶抑制剂的合成及其活性研究
目的:以Ex-Rad为先导化合物,设计并合成具有蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制活性的芳酰基类化合物。方法分别以1-[(4-氟苯基)氨基甲酰基]环丙烷羧酸、1-苯基咪唑烷-2-酮为原料合成中间体3a~3d,将中间体与羧酸通过酰氯法合成目标化合物T1~T7。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定PTK抑制活性,计算抑制率,筛选出具有抑制PTK活性的化合物。结果合成芳酰基类新化合物7个,结构经1H NMR确证。活性初筛发现化合物T2、T6的抑制活性强于先导化合物。结论合成方法简单,原料价廉易得。ELISA法测定结果表明T2、T6的PTK的抑制活性较强。
关键词: 设计合成 芳酰基 蛋白酪氨酸激酶抑制剂 -
新型广谱β-内酰胺酶抑制剂的设计、合成和活性评价
目的 设计合成具有β-内酰胺酶抑制活性的化合物.方法 以新型β-内酰胺酶抑制剂阿维巴坦为先导化合物,设计出2类四元内酰胺环化合物.以Boc-D-丝氨酸为起始原料,经过缩合、环合、氨基脱保护、缩合、脱苄、磺酸酯化共6步得到第Ⅰ类目标化合物;由第Ⅰ类目标化合物合成路线的前4步得到第Ⅱ类目标化合物.测定了目标化合物对A类TEM-1、C类AmpC和D类OXA-23的β-内酰胺酶的抑制活性.结果 合成了22个未见文献报道的目标化合物,结构经1H NMR和MS确证.浓度均为0.5 nmol/L时,有8个化合物对D类OXA-23酶的抑制率高于阿维巴坦(阳性化合物).结论 该研究对进一步结构优化寻找D类β-内酰胺酶抑制剂具有重要意义.
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新型酪氨酸激酶抑制剂的合成及其活性评价
目的 以L029为先导化合物,设计合成具有蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制活性的化合物.方法 以L029为原料,通过还原和(或)在其活泼H等位点接入侧链3-二甲基氨基-1-丙烷、乙酸甲酯、丙酸甲酯等基团,设计合成了一系列L029衍生物,并用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其PTK活性,计算抑制率.结果 成功合成5个目标化合物,结构经1H NMR和MS确证.其中3个化合物T2、T3、T5具有较强的PTK抑制活性.结论 本文研究的目标化合物合成路线方法简单,反应条件温和,3个目标化合物具有较强PTK抑制活性,为进一步开展此类分子的设计合成提供了参考.
关键词: 蛋白酪氨酸激酶抑制剂 设计合成 L029 -
香豆素苄(亚)砜类化合物的合成及其抗辐射活性评价
目的 设计合成具有抗辐射活性的香豆素苄(亚)砜类衍生物.方法 以Ex-Rad为先导化合物,设计香豆素苄(亚)砜类化合物16个;以2-巯基乙酸甲酯和4-溴甲基苯甲酸为起始原料,经3步反应合成目标化合物.通过抗辐射细胞实验测定目标化合物的抗辐射活性.结果 合成16个未见文献报道的目标化合物,结构经1H NMR和HRMS确证.初步药理结果显示,化合物6a、6b、6c和6d具有明显的抗辐射活性.结论 目标化合物6a、6b、6c和6d具有显著的抗辐射活性,值得进一步研究.
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芳基苄砜类化合物的合成及其蛋白酪氨酸激酶抑制活性评价
目的:以Ex-Rad为先导化合物,设计合成具有蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制活性的芳基苄砜类化合物。方法以2-萘酚等为原料,合成中间体3a~3f,用过氧化氢在冰乙酸中将3a~3f氧化成目标化合物4a、4b、5a~5f。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定PTK抑制活性,计算抑制率,筛选出具有抑制PTK活性的化合物。结果合成含砜及亚砜类化合物8个,结构经1H NMR确证。活性初筛发现化合物5c的抑制活性明显强于先导化合物。结论合成方法简单,原料廉价易得。 ELISA法测定发现5c的PTK抑制活性较强。
关键词: 设计合成 芳苄基砜 蛋白酪氨酸激酶抑制剂 -
新型2-吲哚酮类化合物的合成及其体外抗肿瘤活性
目的 设计合成具有抗肿瘤活性的新型2-吲哚酮类化合物.方法 以2吲哚酮类酪氨酸激酶抑制剂L029为先导化合物,设计目标化合物结构,以2-氟吡啶为起始原料,经过碘代反应、卤素重排、偶联反应及缩合反应制得目标化合物;评价了目标化合物对人结肠癌细胞(HCT116),肝癌细胞(HepG2),肺腺癌细胞(H1299),人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制活性;结果 成功合成18个目标化合物5a~5n,7a~7d,结构经1H-NMR确证.部分化合物对4种细胞有显著的抑制活性.结论 本文研究的2-吲哚酮类化合物合成方法简单,条件温和可控,7a~7d显示出广谱肿瘤细胞抑制活性,为深入开展此类分子的设计合成及抗肿瘤活性研究提供了参考.
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不同区引物检测庚型肝炎病毒RNA
1995年Genelabs和Abbott公司相继报道了一种与人类肝炎相关的RNA病毒,分别命名为HGV(hepatitis G virus)和GBV-C(GB virus C)[1,2],即庚型肝炎病毒(本文统称为HGV).此后国内外许多学者应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-PCR, RT-PCR)技术在多组不同人群中检出了HGV,其阳性率1.2%~33.3%[3].我们根据HGV的病毒全序列[4]和国内外部分研究资料[5~8],分别设计合成了HGV基因组不同区的4组引物,同时对同一批样品进行了比较分析,探讨不同区引物检测HGV-RNA的情况.
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间日疟特异DNA探针CS9211的研制与应用
本课题为探索间日疟灵敏特异的诊断和检测方法,解决灭疟后期疟疾监测的难题而设计.并从分子生物学角度,根据DNA分子碱基的互补原理和基因遗传的稳定性,从克隆的间日疟DNA重复序列中设计合成了CS9211寡核苷酸片段,由35 mer组成,经同位素标记作为探针,以斑点杂交法对不同虫种的疟原虫进行杂交,检验其特异性;对已知不同原虫密度的原虫血进行杂交,了解其敏感性和对现场采集的现症病人血样进行检测及现场传染源检索,以对其现场应用价值进行评价.在现场监测中对发热病人、流动人口、出国回归人员,疫点周围人群进行了检测,并使用镜检,IFA和PCR技术对结果进行验证以评价其结果的可靠性.
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应用RACE技术获取小鼠乳腺癌转移相关基因 G15γ5′端未知序列(论著摘要)
G15γ5′是本组以往用mRNA差异显示法从γ干扰素预处理的小鼠腺癌细胞系MA891中分离出的cDNA片段,推测其代表的基因可能与肿瘤转移有关.为进一步研究其功能,采用cDNA未端快速扩增技术(RACE),以获取该片段5′端未知序列.用IFN-γ(200 U/ml)处理MA891细胞48 h,提取总RNA并用DNaseI纯化.根据G15γ5′端序列,设计合成3个基因特异性引物GSP1,GSP2和GSP3.以GSP1为引物合成cDNA第1链,用末端转移酶在cDNA第1链的3′端进行同聚物加尾,对加尾后的cDNA先后用GSP2和GSP3与锚定引物进行初级及巢式PCR扩增,终得到一552 bp的扩增产物并将其克隆至pCRTM Ⅱ载体,经Northern印迹分析及序列分析证实,所得片段确实是G15γ5′的5′端延续.
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氮氧自由基与γ-氨基丁酸偶联物的设计合成与抗缺氧活性研究
目的 设计合成一种新型氮氧自由基与γ-氨基丁酸偶联物并研究其抗缺氧活性. 方法 以对羟基苯甲醛、溴乙酸乙酯、γ-氨基丁酸甲酯盐酸盐和2 ,3-二甲基-2 ,3-二羟氨基丁烷为原料,经醚化、酰胺化、缩合和氧化反应得到一种氮氧自由基与γ-氨基丁酸的偶联物(化合物3),并通过小鼠常压密闭耐缺氧实验对其抗缺氧活性进行评价.结果 3组在常压密闭缺氧实验下,与缺氧模型组比较,乙酰唑胺组和化合物3组存活时间均明显延长,差异有统计学意义(P<0. 01),化合物3组与乙酰唑胺组比较存活时间延长(P<0. 01). 与正常对照组比较,缺氧模型组中LD含量显著升高(P<0. 01),LDH活性显著降低(P<0. 01);与缺氧模型组比较,化合物3组小鼠血浆中LD含量差异无统计学意义,但是LD累积速率明显降低,差异有统计学意义( P<0. 01 ). 结论 氮氧自由基与γ-氨基丁酸偶联物的设计路线合理,合成方法简便,产率较高,并且表现出了较高的抗缺氧活性.
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气相色谱法测定4-邻甲苯磺酰氧基苯并唑酮原料药中有机溶剂残留的研究
4-邻甲苯磺酰氧基苯并唑酮(MBB)是本课题组首次设计合成的有很强抗炎镇痛活性的新型结构化合物[1],可作为潜在的非甾体镇痛抗炎候选药物.本研究根据MBB的合成路线,参照人用药品注册技术规范国际协调会(ICH)颁布的<药品注册的国际技术要求>[2]和中国药典2010年版二部附录[3]中对残留溶剂的相关规定,结合文献[4-6],采用气相色谱法,对合成过程中用到的丙酮、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃和三乙胺等6种残留溶剂进行了系统的研究和检测,以得到质量均一的化合物,为后续研究奠定基础.在相应的色谱条件下,6种有机溶剂均能得到很好的分离.该方法快速、准确、灵敏度高、分离度良好,可用于MBB中有机溶剂残留的测定.